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枯草芽孢杆菌在琼脂平板上进行的自然遗传转化 被引量：4
1
作者 陈向东 陈琪 +1 位作者 谢志雄 沈萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期95-99,共5页
本文对发生在琼脂平板上的枯草芽孢杆菌自然遗传转化进行了初步的研究。结果表明，在相同条件下，该菌在琼脂平板上的自然转化率明显高于传统液体转化，并且转化反应对ＤＮａｓｅ 的抗性增强，通常被认为不能建立感受态的ＬＢ 培养物当... 本文对发生在琼脂平板上的枯草芽孢杆菌自然遗传转化进行了初步的研究。结果表明，在相同条件下，该菌在琼脂平板上的自然转化率明显高于传统液体转化，并且转化反应对ＤＮａｓｅ 的抗性增强，通常被认为不能建立感受态的ＬＢ 培养物当涂布到平板上后也很快具有了自然转化的能力，说明在固相物表面进行的转化过程与传统的液体法存在一定的差异。在琼脂平板上，也能观察到具不同遗传标记的菌株间进行的细胞间自然转化。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 自然遗传转化 琼脂平板
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大肠杆菌在低Ca^(2+)条件下对外源DNA的摄取 被引量：2
2
作者 李文化 谢志雄 +2 位作者 郭培懿 陈向东 沈萍 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第2期247-250,共4页
含一定浓度 Ca2 +的 L B培养基 ,接种大肠杆菌 HB10 1,37℃振荡培养至 OD6 0 0 为 0 .5左右 ,培养前或培养后加入 p BR32 2质粒 ,4℃放置一段时间后经氨苄青霉素筛选和质粒检测发现 ,大肠杆菌不经过高 Ca2 + 下的冰浴处理和热激活等过... 含一定浓度 Ca2 +的 L B培养基 ,接种大肠杆菌 HB10 1,37℃振荡培养至 OD6 0 0 为 0 .5左右 ,培养前或培养后加入 p BR32 2质粒 ,4℃放置一段时间后经氨苄青霉素筛选和质粒检测发现 ,大肠杆菌不经过高 Ca2 + 下的冰浴处理和热激活等过程就能够直接摄取外源 DNA;通过对转化子质粒拷贝数和氨苄青霉素抗性测定发现 ,这种转化方式进入菌体内的质粒 DNA同样能够进行有效的复制和表达 ,与传统的人工转化结果无本质区别 ;在一定范围内 ,大肠杆菌的转化频率与环境中的 Ca2 + 浓度成正相关 ,并且这种准自然条件下的转化需要一定的时间 . 展开更多
关键词 大肠杆菌 自然遗传转化 基因工程微生物 培养基 外源DNA 钙离子浓度
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变异链球菌hit基因缺陷菌株的构建 被引量：2
3
作者 赖扬帆 王鹏 +3 位作者 乔里 刘中静 叶朝阳 梁燕 《口腔疾病防治》 2021年第12期801-808,共8页
目的构建hit基因缺陷型变异链球菌株并验证其细胞周期调控的功能。方法从变异链球菌株ATCC25175中提取基因组DNA,采用PCR扩增技术,将hit基因上下游片段克隆到pFW5质粒(壮观霉素抗性)上以构建重组质粒;利用该菌株天然遗传转化机制,将线... 目的构建hit基因缺陷型变异链球菌株并验证其细胞周期调控的功能。方法从变异链球菌株ATCC25175中提取基因组DNA,采用PCR扩增技术,将hit基因上下游片段克隆到pFW5质粒(壮观霉素抗性)上以构建重组质粒;利用该菌株天然遗传转化机制,将线性化重组质粒转入由其感受刺激多肽(competence stimulating peptide,CSP)刺激产生变异链球菌感受态中,进行同源重组;再通过壮观霉素抗性筛选,结合PCR产物电泳和Sanger法测序,筛选鉴定hit基因缺陷型变异链球菌株;最后在BHI培养基中培养,检测其生长速率。结果从ATCC25175变异链球菌基因组DNA中,克隆hit基因上游约856 bp、下游约519 bp片段到pFW5质粒的两个多克隆位点区间(MCS⁃I和MCS⁃II),经双酶切和PCR测序鉴定,得到重组质粒pFW5_hit_Up_Down。线性化该重组质粒,转入由CSP刺激产生变链感受态中进行同源重组;再通过壮观霉素BHI培养基多次抗性筛选,hit基因片段的PCR产物电泳和Sanger测序筛选出hit基因缺陷变异链球菌株,该缺陷菌株较其亲本菌株生长更快速(P<0.001)。结论获得具有遗传性状hit基因缺陷变异链球菌株,hit基因产物调控变异链球菌生长周期。 展开更多
关键词 变异链球菌 hit基因 pFW5质粒 天然遗传转化 同源重组 hit基因缺陷突变菌株 细菌生长 周期调控
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不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间发生的跨属自然遗传转化 被引量：1
4
作者 王小娟 李美菊 +2 位作者 陈向东 谢志雄 沈萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期963-967,共5页
携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置40min,涂布选择性平板,37℃培养30h后得到一定数目的转化子,DNaseⅠ敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其它形式发生转移。实验发现大肠杆菌... 携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置40min,涂布选择性平板,37℃培养30h后得到一定数目的转化子,DNaseⅠ敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其它形式发生转移。实验发现大肠杆菌可以在特定生长时期向胞外分泌DNA,并且在对数期具有最高的提供质粒的能力,而生长后期的细胞因为体系中DNase量的增加转化频率下降。进一步的研究发现枯草芽孢杆菌在营养丰富的LB培养基中也具有与基本培养基中相当的转化能力,并且在对数生长前期具有较高的转化频率。 展开更多
关键词 穿梭质粒 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌 自然遗传转化
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健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛1的鉴定及特性分析
5
作者 赵红波 赵建宏 +7 位作者 孙素菊 徐保红 闫鹤 赵红丽 李继红 时东彦 刘晓雷 石磊 《分子诊断与治疗杂志》 2010年第4期231-236,共6页
目的检测健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛(SGI1)的分布情况及特性,分析其与细菌耐药性的关系。方法采用PCR方法对5株第一类整合子阳性的沙门菌检测SGI1,分别检测其左侧、右侧部分和其中间的部分基因,以及环状形式和切除状态,通过接... 目的检测健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛(SGI1)的分布情况及特性,分析其与细菌耐药性的关系。方法采用PCR方法对5株第一类整合子阳性的沙门菌检测SGI1,分别检测其左侧、右侧部分和其中间的部分基因,以及环状形式和切除状态,通过接合转移及自然转化检测其可移动性。结果一株鼠伤寒沙门菌携带SGI1,位于thdF和int2之间,且其多重耐药区含aadA2,floR,tetG,blaPSE-1基因,存在环状形式及切除状态,且可通过自然转化方式转移至其他菌株。结论 SGI1可通过自然转化方式转移到其他菌株,介导多重耐药的传播。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 沙门菌基因组岛 抗生素耐药 自然转化
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遗传工程微生物细胞间发生的自然遗传转化 被引量：5
6
作者 陈琪 陈向东 +1 位作者 谢志雄 沈萍 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期140-143,共4页
将两株具有不同遗传标记的枯草芽孢杆菌在基本培养基中分别培养至对数生长后期后进行短时间混合静置培养 ,经选择平板筛选、DNaseI敏感性试验、质粒检测和产蛋白酶活性检测 ,发现两菌株之间可通过自然遗传转化进行染色体DNA和质粒DNA的... 将两株具有不同遗传标记的枯草芽孢杆菌在基本培养基中分别培养至对数生长后期后进行短时间混合静置培养 ,经选择平板筛选、DNaseI敏感性试验、质粒检测和产蛋白酶活性检测 ,发现两菌株之间可通过自然遗传转化进行染色体DNA和质粒DNA的交换。研究结果表明 ,自然遗传转化可在细胞间进行 ,这对揭示微生物群居的自然环境中可能存在的细胞间的DNA转移 ,以及正确评估遗传工程微生物(GEMs)的安全使用具有重要意义。 展开更多
关键词 遗传工程微生物 细胞间 自然遗传转化 重组质粒
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通过DNA释放及感受态建立进行的枯草杆菌细胞间自然转化 被引量：2
7
作者 李美菊 陈向东 +1 位作者 谢志雄 沈萍 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期514-518,共5页
以平板转化法研究了枯草杆菌在液体基本培养基 (MM)及LB中培养时通过DNA释放和感受态建立进行的细胞间自然转化 .结果表明 ,该菌在这两种培养基中培养时均可在对数生长期向培养液中主动分泌有生物活性的DNA ,且细胞间接触有利于转化过... 以平板转化法研究了枯草杆菌在液体基本培养基 (MM)及LB中培养时通过DNA释放和感受态建立进行的细胞间自然转化 .结果表明 ,该菌在这两种培养基中培养时均可在对数生长期向培养液中主动分泌有生物活性的DNA ,且细胞间接触有利于转化过程的进行 ,暗示在本实验条件下DNA供体细胞可能具有某种主动功能 .对感受态建立的研究表明 ,不仅是MM培养物 ,而且通常被认为不能形成自然感受态的LB培养物 ,当涂布于MM选择平板后均可利用细胞分泌或提取的DNA进行自然转化 ,其转化高峰均出现在对数生长末期 ,转化频率分别可达到 3× 10 -3 和 1.9× 10 -6. 展开更多
关键词 枯草杆菌 细胞间自然遗传转化 DNA释放 感受态 微生物遗传学 平板转化法
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