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切割海马伞海马中56kD差异蛋白的质谱分析 被引量:8
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作者 朱蕙霞 秦建兵 +2 位作者 田美玲 陈蓉 金国华 《南通大学学报(医学版)》 2006年第6期408-410,413,共4页
目的:探讨切割海马伞海马中具有生物活性的56kD差异蛋白的组成成份及其功能。方法:切割SD大鼠海马伞后14d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对56kD差异蛋白进行检测和功... 目的:探讨切割海马伞海马中具有生物活性的56kD差异蛋白的组成成份及其功能。方法:切割SD大鼠海马伞后14d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对56kD差异蛋白进行检测和功能分析。结果:质谱分析找到了33组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、核酸水解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论:切割海马伞海马中56kD差异蛋白中含有功能涉及神经干细胞迁移、分化的蛋白质。 展开更多
关键词 56 kD蛋白 切割海马伞 海马 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱分析
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非变性PAGE在鉴定大豆脂肪氧化酶类型中的应用 被引量:7
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作者 马志民 蒋春志 +2 位作者 杨春燕 马峙英 张孟臣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期5-8,共4页
为解决脂肪氧化酶检测复杂、费用昂贵、剧毒试剂对人体影响等问题,研究出一种安全、快速而经济有效的大豆脂氧酶检测技术。以Suzuyutaka脂氧酶缺失近等基因系和非缺失类型大豆冀豆12为材料,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳探索非变性PAGE分析大... 为解决脂肪氧化酶检测复杂、费用昂贵、剧毒试剂对人体影响等问题,研究出一种安全、快速而经济有效的大豆脂氧酶检测技术。以Suzuyutaka脂氧酶缺失近等基因系和非缺失类型大豆冀豆12为材料,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳探索非变性PAGE分析大豆脂肪氧化酶,通过对不同样品浓度、电泳条件和分离胶浓度的比较,摸索鉴定大豆Lox缺失类型的最佳条件。通过电泳条件优化分析发现,电泳样品中预样品的浓度为30%、分离胶浓度为11%、电泳时间为6 h时,3种脂肪氧化酶分辨清晰度最高;通过重复电泳的相对迁移率分析,表明在上述电泳条件下的检测结果比较稳定且重复性好;通过3种脂肪氧化酶酶带与缺失酶带对照比较和分子量测定两方面验证了所得到的3条脂肪氧化酶酶带。非变性PAGE是一种简单、经济、快捷而安全的检测分析大豆脂肪氧化酶同功酶的方法,因而可以用于资源分析、良种繁育以及生产、收购和加工利用中的大豆脂氧酶缺失类型鉴定。 展开更多
关键词 大豆 脂肪氧化酶鉴定 非变性page 迁移率
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Response of Superoxide Dismutase,Catalase,and ATPase Activity in Bacteria Exposed to Acetamiprid 被引量:5
3
作者 XIAO-HUA YAO HANG MIN ZHEN-MEI LV 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2006年第4期309-314,共6页
Objective To investigate how acetamiprid, a new insecticide, affects the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and ATPase and the SOD isozyme patterns in two G-bacteria, E. coli K12 anti Pse.FH2,... Objective To investigate how acetamiprid, a new insecticide, affects the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and ATPase and the SOD isozyme patterns in two G-bacteria, E. coli K12 anti Pse.FH2, and one G^+ bactemm, B. subtilis. Methods The SOD, CAT, and ATPase specific activities of cell lysates were determined spectrophotometrically at 550 nm, 240 nm, and 660 nm, respectively, with kits A001, A016, and A007. SOD isozyme patterns were detected by native PAGE analysis. Results SOD and CAT activities in the tested bacteria increased significantly in a concentration-dependent manner after different concentrations of acetamiprid were applied. The activity of SOD in B. subtilis and Pse.FH2 was stimulated and reached the highest level after treatment with 100 mg/L acetamiprid for 0.5 h. For Pse.FH2, there was another stimulation of SOD activity after acetamiprid application for about 8.0 h and the second stimulation was stronger than the first. The stimulation by acetamiprid showed a relative lag for E. coli K12. Acetamiprid seemed to exhibit a similar effect on CAT activity of the two G bacteria and had an evident influence on ATPase activity in the three bacteria within a relatively short period. Only one SOD isozyme was detectable in Pse.FH2 and B. subtilis, while different isozyme compositions in E. coli could be detected by native PAGE analysis. Conclusion Acetamiprid causes a certain oxidative stress on the three bacteria which may not only elevate SOD and CAT activities but also generate new SOD isozymes to antagonize oxidative stress. However, this oxidative stress lasts for a relatively short time and does not cause a long-term damage. 展开更多
关键词 ACETAMIPRID SOD CAT ATPASE Stress response native page
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枯草芽孢杆菌内切木聚糖酶的分离纯化与鉴定 被引量:1
4
作者 袁小平 姚惠源 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第5期54-55,共2页
目的 :建立一种简便、快速的木聚糖酶分离和提取方法。方法 :采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,分离纯化枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固体培养基发酵产物中的木聚糖酶 ,进一步用薄层色谱和高压液相色谱对木聚糖酶进... 目的 :建立一种简便、快速的木聚糖酶分离和提取方法。方法 :采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,分离纯化枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固体培养基发酵产物中的木聚糖酶 ,进一步用薄层色谱和高压液相色谱对木聚糖酶进行鉴定。结果 :采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,从枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固体培养基发酵产物中分离得到了两种内切木聚糖酶 ,酶解桦木木聚糖的产要产物以木二糖和木三糖为主。结论 :活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合是一种新的分离纯化木聚糖酶的简便、有效方法。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 活性电泳 木聚糖酶
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微生物油脂卷枝毛霉中苹果酸酶异构体的解析 被引量:3
5
作者 周兵 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期43-48,共6页
卷枝毛霉(Mucor circinelloides)是一种能够富集γ-亚麻酸的产油真菌,而其中含有的苹果酸酶被认为是该真菌中生物合成多不饱和脂肪酸所需要的重要的酶。采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对卷枝毛霉中的苹果酸酶异构体进行纯化研究,发现... 卷枝毛霉(Mucor circinelloides)是一种能够富集γ-亚麻酸的产油真菌,而其中含有的苹果酸酶被认为是该真菌中生物合成多不饱和脂肪酸所需要的重要的酶。采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对卷枝毛霉中的苹果酸酶异构体进行纯化研究,发现其中有至少6种异构体。从不同培养基中分离提取异构体3和4,经过纯化,在SDS-PAGE电泳中分离出一条单一的谱带,用胰蛋白酶消化带胶蛋白,进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析。结果表明:异构体3和4的相对分子质量非常接近,分别是87.339 kDa和86.503 kDa。 展开更多
关键词 卷枝毛霉 Γ-亚麻酸 苹果酸酶 聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色 异构体 基质辅助激光解 析电离飞行时间质谱
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大豆脂肪氧化酶同功酶抗原的快速纯化方法 被引量:2
6
作者 马志民 刘渊 +3 位作者 蒋春志 杨春燕 马峙英 张孟臣 《大豆科学》 CSCD 北大核心 2008年第2期306-309,共4页
目前常用的蛋白纯化方法均存在操作复杂、纯化周期长、成本高等缺点,本试验试图探索出一种经济快捷的蛋白纯化方案,且纯化后的蛋白可以用于制备单克隆抗体;以普通大豆品种冀豆12以及脂肪氧化酶缺失近等基因系Suzuyutaka中的Su-1,3,Su-2,... 目前常用的蛋白纯化方法均存在操作复杂、纯化周期长、成本高等缺点,本试验试图探索出一种经济快捷的蛋白纯化方案,且纯化后的蛋白可以用于制备单克隆抗体;以普通大豆品种冀豆12以及脂肪氧化酶缺失近等基因系Suzuyutaka中的Su-1,3,Su-2,3为材料,将大豆脂氧酶非变性PAGE分析与电洗脱技术相结合,纯化脂肪氧化酶同功酶抗原蛋白;回收到具有活性的电泳纯级脂肪氧化酶溶液,回收率达到了与离子交换柱层析相当的水平(49.64%);本试验探索的方法实现了应用经济快捷的纯化方案获得免疫所需抗原,为尽早获得脂肪氧化酶单克隆抗体并将其应用于实践打下了基础,并为其它蛋白质的快速分离纯化提供了参考。 展开更多
关键词 脂肪氧化酶 非变性page 电洗脱 纯化
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Method for Detecting NADPH-Cytochrome P450 Reductase in Liver Microsomal Fractions by Using Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis and NADPH-Diaphorase Staining
7
作者 Hirokazu Yokoyama Yukishige Okamura Toshifumi Hibi 《American Journal of Analytical Chemistry》 2013年第6期301-305,共5页
By combining native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-diaphorase staining, a simple method for detecting NADPH-cytochrome P450 reductase in tissue sample... By combining native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-diaphorase staining, a simple method for detecting NADPH-cytochrome P450 reductase in tissue samples was established. When rat liver microsomal fractions were examined by this method, several bands with different mobility were visualized. Western blot analysis indicated that the band which appeared in the most anodal position among them represented NADPH-cytochrome P450 reductase. SDS-PAGE/Western blot analysis revealed that the molecular weight of the protein forming the band was around 80 kDa, which was identical to that of rat NADPH-cytochrome P450 reductase. The intensity level of NADPH-diaphorase staining assigned to this enzyme estimated by this method increased four times in microsomal fractions prepared from rat fed ethanol chronically compared to that from controls. When a dilution series of a rat liver microsomal fraction was examined by this method and SDS-PAGE/Western blot analysis, their staining intensities representing this enzyme were significantly correlated with each other. Using the naive PAGE/NADPH-diaphorase staining method, NADPH-cytochrome P450 reductase is detected in rat liver microsomes. This method is beneficial because compared with the conventional SDS-PAGE/Western blot analysis, the quantification of NADPH-cytochrome P450 reductase in tissue samples is allowed to be more easily done. 展开更多
关键词 NADPH-Cytochrome p450 REDUCTASE native page NADPH-DIAPHORASE STAINING Chronic Ethanol Consumption
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Separation and analysis of the soluble trimer of Aβ_(1-40) and its effects on the rise in intracellular calcium 被引量:1
8
作者 ZHENG Xiaohui WANG Lijun ZHANG Lan HONG Yuankai HUANG Lixin SHA Yinlin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2006年第7期830-838,共9页
The oligomers of Aβ1-40 peptide in PBS buffer solution were analyzed by SEC and native PAGE, and the trimer of Aβ1-40 was also isolated by SEC. In addition, the effects of the soluble Aβ1-40 trimer on intracellular... The oligomers of Aβ1-40 peptide in PBS buffer solution were analyzed by SEC and native PAGE, and the trimer of Aβ1-40 was also isolated by SEC. In addition, the effects of the soluble Aβ1-40 trimer on intracellular free calcium (Ca2+) balance of hippocampal neurons of postnatal rats were investi- gated by fluorescence microscopy. The experimental results indicated that Aβ1-40 peptide existed in the form of low molecular weight oligomers in 0.231 mmol/L fresh Aβ1-40 solution (20 mmol/L sodium phosphate buffer, pH 7.4, 0.02% sodium azide) within 24 h and the soluble trimer was the most abundant species. Both the trimeric and the fibrillar Aβ1-40 were able to increase the intracellular Ca2+ concentration, but the Aβ1-40 trimer caused a gradual rise and the potential was also stronger than that of the fibrils at the same concentration. In addition there were dif- ferent response modes for trimeric and fibrillar Aβ1-40, meaning that there are different mechanisms of in- crease in intracellular Ca2+ caused by Aβ1-40. 展开更多
关键词 三聚物 分离 SEC 色谱分析
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Aspergillus ficuum产果聚糖酶体系的分析 被引量:1
9
作者 王静 金征宇 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2002年第4期424-427,共4页
采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusfi... 采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusficuum能同时产内切菊粉酶和外切菊粉酶 . 展开更多
关键词 果聚糖酶 外切菊粉酶 内切菊粉酶 活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法 分离
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重组人热休克蛋白70生物活性的快速鉴定 被引量:1
10
作者 杨瑞 杨献军 +2 位作者 田玉慧 岳汉军 王辉 《新乡医学院学报》 CAS 2002年第1期29-30,33,共3页
目的 快速鉴定纯化后的重组人热休克蛋白 70 (rHSP70 )的特异性及其是否具有生物活性。方法 将rHSP70与肿瘤细胞内的小分子多肽在一定条件下温育 ,并利用含 5 %甘油的Nativepage电泳分析。 结果 可快速鉴定出rHSP70是否具有生物活性 ... 目的 快速鉴定纯化后的重组人热休克蛋白 70 (rHSP70 )的特异性及其是否具有生物活性。方法 将rHSP70与肿瘤细胞内的小分子多肽在一定条件下温育 ,并利用含 5 %甘油的Nativepage电泳分析。 结果 可快速鉴定出rHSP70是否具有生物活性 ,电泳后凝胶可做Western -blot特异性鉴定。结论 该法操作简便 ,重复性好 ,既可快速鉴定rhsp70的生物活性 。 展开更多
关键词 重组人热休克蛋白70 抗原肽 非变性凝胶电脉 生物活性
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8个紫花苜蓿品种的过氧化物同工酶分析
11
作者 赵菲佚 焦成瑾 +2 位作者 孔彬彬 康涛涛 安建平 《甘肃农业科技》 2016年第1期6-9,共4页
利用非变性聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术,对8个野生紫花苜蓿品种过氧化物同工酶进行了分析,通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨紫花苜蓿品种间的亲缘关系。结果表明,过氧化物同工酶在8个紫花苜蓿品种中均有表达,但各品种... 利用非变性聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术,对8个野生紫花苜蓿品种过氧化物同工酶进行了分析,通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨紫花苜蓿品种间的亲缘关系。结果表明,过氧化物同工酶在8个紫花苜蓿品种中均有表达,但各品种间的表达谱带及不同的同工酶表达量存有差异。8个品种共获得24条酶带,且存有1条共有表达酶条带,其中陇东野生紫花苜蓿同工酶谱带最多,表达有4条带;阿尔冈金酶谱带数最少,仅出现2条带。酶谱条带聚类分析表明,陇南野生紫花苜蓿与阿尔冈金间亲缘关系最远,亲缘关系呈现不同程度的差异。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 酶聚丙烯凝胶电泳分析 过氧化物酶同工酶 亲缘关系
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切割穹隆海马伞后大鼠海马中83ku差异蛋白的质谱分析
12
作者 朱蕙霞 秦建兵 +3 位作者 金国华 田美玲 张新化 黄镇 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2009年第4期277-280,共4页
目的:探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。方法:切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文... 目的:探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。方法:切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析。结果:质谱分析找到了17组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论:切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路,调控神经干细胞向神经元分化。 展开更多
关键词 83 KU蛋白 切割穹隆海马伞 海马 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱分析
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两优培九剑叶衰老过程光合膜功能及蛋白质复合物的变化 被引量:8
13
作者 叶露幻 沈唯军 +3 位作者 郑宝刚 宋涛 陈国祥 吕川根 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2030-2038,共9页
为探讨高产杂交稻两优培九在衰老过程中,剑叶光合膜蛋白质复合物的含量变化规律及其与光能吸收、转化、传递的关系,以大田栽培自然衰老剑叶为材料,利用活体叶绿素荧光动力学技术,并结合类囊体膜蛋白质复合物蓝绿温和胶电泳分析。结果表... 为探讨高产杂交稻两优培九在衰老过程中,剑叶光合膜蛋白质复合物的含量变化规律及其与光能吸收、转化、传递的关系,以大田栽培自然衰老剑叶为材料,利用活体叶绿素荧光动力学技术,并结合类囊体膜蛋白质复合物蓝绿温和胶电泳分析。结果表明,两优培九剑叶叶绿素含量、光合性能、类囊体膜蛋白稳定性等都在抽穗期达到顶峰,随后开始衰退,在扬花期、灌浆期尚保持较高水平,而进入籽粒成熟阶段衰退明显;随着衰老进程,光合膜蛋白质复合物有序非同步降解,稳定性为LHCII>PSIIcore>PSIcore>ATPase&Cyt b6/f>LHCI;PSI和PSII蛋白和相应电子传递活性的稳定性及下降幅度差异较大;衰老过程叶绿素a/b的不断下降与相对于反应中心更稳定的捕光天线有关,剑叶生长后期LHCII维持高水平保持了叶片对光能的吸收,并可能在调节光系统间能量分布和协助过剩能量耗散中起重要作用。 展开更多
关键词 两优培九 衰老 叶绿素荧光动力学 光系统 类囊体膜蛋白质复合物 蓝绿温和胶电泳
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胡萝卜抗冻蛋白的快速与高效纯化 被引量:5
14
作者 张党权 谭晓风 +1 位作者 仲健 王金发 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期27-30,共4页
将胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中进行表达后,对获得的包涵体进行了初步的洗涤纯化.分别采用HPLC和N ativePAGE法对其进行最终的纯化.结果表明,两种方法都能获得高度纯化的目的蛋白,而且耗时都很少.但N ative PAGE法更为经济,且可以同时进... 将胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中进行表达后,对获得的包涵体进行了初步的洗涤纯化.分别采用HPLC和N ativePAGE法对其进行最终的纯化.结果表明,两种方法都能获得高度纯化的目的蛋白,而且耗时都很少.但N ative PAGE法更为经济,且可以同时进行多个样品的纯化,更适用于一般实验室. 展开更多
关键词 胡萝卜 抗冻蛋白 纯化 native page
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改良Blue Native PAGE方法的建立及对注射用A型肉毒毒素活性药用成分天然结构的分析 被引量:2
15
作者 陆俭 周易 +4 位作者 魏子昊 王云天 李小娟 王璇 张雪平 《药物生物技术》 CAS 2019年第3期217-222,共6页
建立具有较高分辨率的温和的Blue native PAGE方法,用于分析国产注射用A型肉毒毒素(商品名为衡力■)复合物活性药用成分(Pharmaceutical active ingredient,API)天然结构。通过改进样品处理方法解决蛋白样品分解的问题。由7种电极缓冲... 建立具有较高分辨率的温和的Blue native PAGE方法,用于分析国产注射用A型肉毒毒素(商品名为衡力■)复合物活性药用成分(Pharmaceutical active ingredient,API)天然结构。通过改进样品处理方法解决蛋白样品分解的问题。由7种电极缓冲液构成8个组合,从中筛选出最优组合并改进染色方法,电泳结果的分辨率明显提高。以基于改良Blue native PAGE进行二维SDS-PAGE,以基于二维电泳的Western blotting对各组分定性分析,以改良对Blue Native PAGE对A型肉毒毒素API天然结构相对分子质量进行测定。改良Blue Native PAGE方法能够分析注射用A型肉毒毒素API天然结构,明确了注射用A型肉毒毒素API天然结构的存在形态及组成,注射用A型肉毒毒素API相对分子质量为(918±18. 38) k。 展开更多
关键词 蓝色天然电泳 注射用A型肉毒毒素活性药用成分 阴极电泳缓冲液 丽春红 二维电泳 相对分子质量
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玉米不同组织器官谷氨酰胺合成酶同工酶表达差异及聚合方式 被引量:3
16
作者 王小纯 张浩然 +3 位作者 韦一昊 贾喜婷 谷明鑫 马新明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1410-1414,共5页
谷氨酰胺合成酶(GS)是作物氮同化及转移利用的关键酶,本试验研究了玉米灌浆期不同组织器官的GS同工酶表达特性,鉴定了玉米GS同工酶的聚合方式。Western blot结果表明,玉米不同组织器官的GS同工酶亚基表达存在明显差异,分子量约40 kD的GS... 谷氨酰胺合成酶(GS)是作物氮同化及转移利用的关键酶,本试验研究了玉米灌浆期不同组织器官的GS同工酶表达特性,鉴定了玉米GS同工酶的聚合方式。Western blot结果表明,玉米不同组织器官的GS同工酶亚基表达存在明显差异,分子量约40 kD的GS1亚基在所有组织中均大量表达,39 kD的GS1亚基仅在穗位节及穗柄中大量表达,分子量约44 kD的GS2亚基在叶片等光合组织中微量表达。通过改进BNE技术,结合胶内转移酶活性的测定,分析了玉米GS同工酶全酶的大小;利用2-D胶结合Western blot鉴定了GS同工酶相应的亚基组成。结果表明,在玉米组织鉴定出3种分子量不同的GS同工酶,GS2全酶分子量约460 kD,为十聚体;GS1全酶有2种聚合状态,一种是分子量约410 kD的十聚体,另一种是分子量约240 kD的五聚体形式,可见玉米GS同工酶表达存在多种方式。 展开更多
关键词 玉米 谷氨酰胺合成酶(GS) 表达 BNE 聚合方式
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酮古龙酸菌醇醛脱氢酶基因的克隆及表达 被引量:2
17
作者 姜泽慧 熊向华 +2 位作者 张惟材 何建勇 汪建华 《生物技术通讯》 CAS 2009年第5期629-631,共3页
目的:从酮古龙酸菌SCB329株中分离山梨糖生物氧化相关酶的基因并进行表达验证。方法:根据酮古龙酸菌SCB329株基因组序列设计引物,通过PCR从SCB329株基因组中扩增醇醛脱氢酶基因aadh;构建载体pBMP3-aadh并在大肠杆菌中表达,经活性染色、... 目的:从酮古龙酸菌SCB329株中分离山梨糖生物氧化相关酶的基因并进行表达验证。方法:根据酮古龙酸菌SCB329株基因组序列设计引物,通过PCR从SCB329株基因组中扩增醇醛脱氢酶基因aadh;构建载体pBMP3-aadh并在大肠杆菌中表达,经活性染色、体外转化反应等方法考察表达产物的活性。结果:目的产物能够催化山梨糖、葡萄糖、果糖、木糖等多种含羟基及羰基化合物脱氢,并能将L-山梨糖直接转化为2-酮基-L-古龙酸。结论:从酮古龙酸菌SCB329株中分离到一种醇醛脱氢酶基因,可为该菌株糖酸转化机制的研究提供帮助。 展开更多
关键词 醇醛脱氢酶 酮古龙酸菌 活性染色 体外转化反应
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弗氏志贺菌2a 2457T株蛋白复合体BN/SDS-PAGE电泳方法的建立 被引量:1
18
作者 商娜 朱力 +4 位作者 刘小青 刘先凯 冯尔玲 游松 王恒樑 《军事医学科学院院刊》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期280-283,共4页
目的建立分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的BN/SDS-PAGE电泳方法 ,并优化分离条件。方法分别比较了不同配胶方式、配胶长度以及胶条平衡方法。结果成功建立了分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的方法。结论本实验所建... 目的建立分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的BN/SDS-PAGE电泳方法 ,并优化分离条件。方法分别比较了不同配胶方式、配胶长度以及胶条平衡方法。结果成功建立了分离弗氏志贺菌2a2457T株胞内可溶性复合物的方法。结论本实验所建立及优化的方法 ,可以有效地分离蛋白复合体,为进一步研究志贺菌属蛋白复合体奠定了基础,并对以后的实验具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 志贺菌 弗氏 蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白复合体 蛋白质组学
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大白菜非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的优化 被引量:17
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作者 梁宝萍 原玉香 +6 位作者 朴凤植 张晓伟 蒋武生 梁爽 姚秋菊 张强 赵艳艳 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期129-132,136,共5页
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的检测效果受到凝胶聚合速度、片段迁移率等多种因素影响。以大白菜为供试材料,研究比较了凝胶聚合速度及PCR产物在不同浓度凝胶上的检测效果。不同浓度的凝胶是由2种〔40%(19∶1)和30%(29∶1)〕贮存液分... 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的检测效果受到凝胶聚合速度、片段迁移率等多种因素影响。以大白菜为供试材料,研究比较了凝胶聚合速度及PCR产物在不同浓度凝胶上的检测效果。不同浓度的凝胶是由2种〔40%(19∶1)和30%(29∶1)〕贮存液分别配制的4种浓度(5%,7%,9%,11%)。结果表明,在4~30℃,凝胶聚合速度随温度的升高而加快;APS保持不变,不同温度下TEMED∶APS合适配比也不同:4℃(冬季)时,TEMED/APS的合适配比是1∶10,25℃(春秋)、30℃(夏季),选择1∶20的配比为宜;2种不同贮存液配制的相同浓度凝胶检测效果不同,30%(29∶1)优于40%(19∶1),由前者配制7%的凝胶上DNA片段分离效果好,带型清晰,分辨率高。 展开更多
关键词 非变性聚丙烯酰胺 聚合速度 贮存液 TEMED与APS配比
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多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测 被引量:15
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作者 詹翠琼 黄絮洁 +2 位作者 方展强 马广智 姚静 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2007年第3期333-338,共6页
为探讨利用孔雀鱼(Poecilia reticulata)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)作为生物标志物检测环境雌激素的可行性,采用浸浴法分别使用17β-雌二醇(E2)和多氯联苯(PCBs)对雄性孔雀鱼成鱼进行染毒,30d后测定其性腺系数(GSI)和肝指数(LSI),并... 为探讨利用孔雀鱼(Poecilia reticulata)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)作为生物标志物检测环境雌激素的可行性,采用浸浴法分别使用17β-雌二醇(E2)和多氯联苯(PCBs)对雄性孔雀鱼成鱼进行染毒,30d后测定其性腺系数(GSI)和肝指数(LSI),并将鱼体整体匀浆进行常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)及磷、脂和糖蛋白特异染色分析.结果表明,PCBs对雄性孔雀鱼具有雌激素效应,和E2均可以诱导雄性孔雀鱼体内产生Vtg,但诱导组雄鱼GSI及LSI与对照组比较均无显著性差异(p>0.05).Native-PAGE及磷、脂、糖蛋白特异性分析表明,孔雀鱼Vtg是一种富含磷、脂、糖的蛋白,具有VtgⅠ、VtgⅡ和VtgⅢ等3种形式,其分子量分别为642kDa、541kDa和441kDa.雄性孔雀鱼Vtg可作为环境雌激素监测的有效生物标记物. 展开更多
关键词 17Β-雌二醇 多氯联苯 卵黄蛋白原 常规聚丙烯酰胺凝胶电泳 孔雀鱼
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