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卡介菌多糖核酸对干扰素的诱生和促诱生活性 被引量:104
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作者 赵伟强 王慧 谭礼智 《湖南医科大学学报》 CSCD 1990年第1期34-37,共4页
报道卡介菌多糖核酸在体外诱生小鼠脾细胞产生干扰素的活性较低,但与刀豆素A合用则有明显的促诱生活性。所诱生的干扰素主要是γ干扰素。γ干扰素是抗病毒并有免疫调节功能的淋巴因子,提示卡介菌多糖核酸性剂的药理作用可能与其诱导γ... 报道卡介菌多糖核酸在体外诱生小鼠脾细胞产生干扰素的活性较低,但与刀豆素A合用则有明显的促诱生活性。所诱生的干扰素主要是γ干扰素。γ干扰素是抗病毒并有免疫调节功能的淋巴因子,提示卡介菌多糖核酸性剂的药理作用可能与其诱导γ干扰素有关。 展开更多
关键词 卡介菌多糖核酸 干扰素 诱生 促诱生活性 免疫调节药
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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测 被引量:15
2
作者 谢芝勋 谢志勤 +5 位作者 雷剑明 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1141-1144,共4页
目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分... 目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,测定其特异性和敏感性,并对238份牛临床样品的DNA分别进行了检测。结果该方法对牛分枝杆菌能扩增出838bp和631bp的特异性基因片段,结核分枝杆菌只扩增出838bp基因片段而扩增不出631bp的特异性基因片段,对参试的其它牛菌株的DNA扩增结果均为阴性。敏感度检测可达到50pg的DNA含量。临床样品检测结核分枝杆菌阳性有21份,牛分枝杆菌阳性有1份,其它临床样品扩增结果全部为阴性。结论本方法可作为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 展开更多
关键词 检测 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 二重PCR
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卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价 被引量:12
3
作者 赵爱华 李凤祥 +11 位作者 寇丽杰 李长贵 乔来艳 王鹏 陈保文 徐苗 都伟欣 沈小兵 苏城 卢锦标 杨蕾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期161-167,共7页
目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细... 目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌。单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率。经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数。同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性。结果BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+%为41%,培养基对照组(NCS)组为27%;t=-4.40,P<0.05];促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+TLR-9+%为2.8%,NCS组为1.1%;t=-5.92,P<0.05);上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+%为82%,NCS组为31%;t=-4.32,P<0.05);可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+I-A/I-E+TLR-9+IL-12+%为2.1%,NCS组为0.1%;t=4.80 P<0.05)。BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均<10;H1N1低剂量组滴度<中剂量组滴度<高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高。H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30%、50%、90%、100%、100%,显示佐剂可提高40%动物存活率。Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100%病变,疫苗组完全转阴的动物达到30%,而且病变指数<30的动物达到60%~70%。佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应。结论BC-C02既能诱导细胞免疫 展开更多
关键词 分枝杆菌 DNA 细菌 佐剂 免疫 可重复性 结果
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牛结核病诊断技术研究进展 被引量:11
4
作者 包艳红 董阳 +5 位作者 张健宁 张晶 王春芳 徐杰 姜秀云 马红霞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第23期37-39,43,共4页
牛结核病是严重危害人类健康和畜牧业发展的人兽共患传染病,尚无有效的疫苗预防。快速、准确诊断对于控制该病、保护人类健康和促进畜牧业稳定发展具有重要意义。近年来,随着牛结核病新型诊断方法和技术的不断涌现,使该病检测的敏感性... 牛结核病是严重危害人类健康和畜牧业发展的人兽共患传染病,尚无有效的疫苗预防。快速、准确诊断对于控制该病、保护人类健康和促进畜牧业稳定发展具有重要意义。近年来,随着牛结核病新型诊断方法和技术的不断涌现,使该病检测的敏感性和特异性得到提高。文章主要针对结核菌素皮肤试验(TST)、γ-干扰素释放试验(IGRA)、酶联免疫吸附试验(ELASE)、序列扩增技术、全基因组测序法(WGS)等牛结核病诊断技术的研究进展进行综述,以期为牛结核病的临床检测提供科学依据。 展开更多
关键词 牛结核病 牛分枝杆菌 诊断技术 结核菌素皮肤试验 Γ-干扰素释放试验 酶联免疫吸附试验 序列扩增技术 全基因组测序
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牛结核病病原体研究进展 被引量:9
5
作者 王志梅 贾广乐 +3 位作者 王建波 林祥梅 韩雪清 张映 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期207-210,共4页
牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概... 牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概述,并主要对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌进行了基因组比较以及它们之间的区分和鉴定进行了综述。 展开更多
关键词 结核病 牛结核病 牛分枝杆菌 结核分枝杆菌
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牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达 被引量:8
6
作者 刘思国 王春来 +2 位作者 彭永刚 宫强 王牟平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期336-339,共4页
以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65... 以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性。以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64kD和22kD,两个蛋白分子量相加与预测的86kD(HsP60 kD+GST26 kD)相符。牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础。 展开更多
关键词 牛分杆杆菌 HSP65基因 分子克隆 原核表达
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快速检测技术在奶牛结核病检测中的应用研究 被引量:10
7
作者 江渊 王曲直 +7 位作者 张阳奕 沈素芳 李静 唐文红 桂晓虹 梅建 潘启超 沈鑫 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期447-452,共6页
目的 评价快速检测技术在奶牛结核病检测中的应用,为改进奶牛结核病检疫工作提供实验室数据支持.方法 2010-2012年对上海市5家奶牛场9355头奶牛采用牛分枝杆菌提纯结核菌素皮内超敏反应方法(PPD试验)进行牛结核病筛查,筛查出223头阳性... 目的 评价快速检测技术在奶牛结核病检测中的应用,为改进奶牛结核病检疫工作提供实验室数据支持.方法 2010-2012年对上海市5家奶牛场9355头奶牛采用牛分枝杆菌提纯结核菌素皮内超敏反应方法(PPD试验)进行牛结核病筛查,筛查出223头阳性牛,5家奶牛场分别采用随机数字表法抽取PPD阳性牛,共抽取PPD阳性牛49头;无菌采集肺部淋巴结组织样本,采用MGIT 960液体培养法对奶牛组织中分枝杆菌进行快速分离培养,采用免疫色谱法和基因测序进行快速基因分型及菌种鉴定.结果 49头PPD试验阳性牛的组织样本,经MGIT 960液体培养、免疫色谱法初筛、基因分型和基因序列分析,最终病原学检测证实受分枝杆菌感染的奶牛有8头,其中受牛分枝杆菌感染的奶牛1头,受非结核分枝杆菌感染的奶牛7头,分别为鸟分枝杆菌感染6头,不产色分枝杆菌感染1头.结论 建议将分枝杆菌快速分离培养及菌种鉴定检测技术引入到对PPD阳性牛的实验室诊断中,进一步提高牛结核病检测的特异度. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 牛/诊断 结核菌素试验
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牛结核病的传播与控制 被引量:10
8
作者 张喜悦 孙明军 范伟兴 《中国动物检疫》 CAS 2017年第7期70-74,共5页
牛结核病是由牛分枝杆菌引起的一种慢性细菌性人兽共患病。牛分枝杆菌可在相同或不同的物种之间、动物到人之间自然传播,但在人与动物之间或人与人之间的自然传播则较为罕见。牛结核病从牛到牛传播的主要途径是通过呼吸道传播,封闭条件... 牛结核病是由牛分枝杆菌引起的一种慢性细菌性人兽共患病。牛分枝杆菌可在相同或不同的物种之间、动物到人之间自然传播,但在人与动物之间或人与人之间的自然传播则较为罕见。牛结核病从牛到牛传播的主要途径是通过呼吸道传播,封闭条件下同圈传播的效率远高于开放条件下的传播效率。人感染牛结核病的风险主要存在于饲养员、兽医等职业人群中。对于普通大众来说,主要风险是食用未经巴氏消毒的生乳及乳制品。本文分析了该病的几种主要防控手段,包括牛奶巴氏消毒、检疫和扑杀阳性牛、发挥公共卫生部门的作用等,以期为我国牛结核病的防控提供参考。 展开更多
关键词 牛结核病 牛分枝杆菌 人兽共患病 传播
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牛结核病的传播特点和风险因素及防控 被引量:9
9
作者 王华 孙成友 +3 位作者 王淑娟 吴晓东 徐天刚 王志亮 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第23期4583-4586,共4页
牛结核病是一种世界分布的人畜共患传染病,被世界动物卫生组织列为法定报告疾病。其传播风险影响着畜牧业持续发展和人类的健康。本文概述了牛结核病的宿主范围、传播特点、风险因素及其防控措施等方面,旨在为我国牛结核病疫情传播和预... 牛结核病是一种世界分布的人畜共患传染病,被世界动物卫生组织列为法定报告疾病。其传播风险影响着畜牧业持续发展和人类的健康。本文概述了牛结核病的宿主范围、传播特点、风险因素及其防控措施等方面,旨在为我国牛结核病疫情传播和预防控制提供理论研究。 展开更多
关键词 牛结核分支杆菌 人畜共患病 风险 传播 防控
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间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用 被引量:8
10
作者 张桂荣 万学济 +7 位作者 陈颖钰 吴波 晁彦杰 吕文 钦博 郭爱珍 陈焕春 谭亚娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期555-560,568,共7页
针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种... 针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 ELISA CFP10-ESAT-6 MPB83 MPB70 结核 检疫
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牛结核体外免疫诊断技术 被引量:5
11
作者 路伟 张秀华 +1 位作者 刘思国 沈国顺 《畜牧兽医杂志》 2005年第3期15-17,共3页
牛分支杆菌感染的主要特征是引起细胞内免疫反应。现在针对牛结核的诊断试验是以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最近,发现了牛结核r干扰素试验是一种... 牛分支杆菌感染的主要特征是引起细胞内免疫反应。现在针对牛结核的诊断试验是以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最近,发现了牛结核r干扰素试验是一种快速的(24小时)惟一使用全血的体外试验,该方法在澳大利亚地区应用发现,该方法要比传统的结核菌素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特性,设动物对牛PPD和禽PPD的r干扰素反应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用,但是它们可能因牛对结核分支杆菌感染的免疫反应的遗传多样性而受到限制。 展开更多
关键词 分支杆菌 ELISA r干扰素 结核 体外免疫诊断
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结核分枝杆菌复合群四重PCR检测方法的建立及应用 被引量:8
12
作者 程实 陈伟 +3 位作者 陈颖钰 陈军 苗北平 郭爱珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期333-337,共5页
目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条... 目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条件。结果扩增产物的大小分别为824bp、621bp、418bp和254bp,能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824bp 1条带)、卡介苗(824bp和621bp 2条带)、牛分枝杆菌(824bp、621bp和254bp 3条带)和结核分枝杆菌(4条带)。检测灵敏度达到125fg。对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测,其检出率或准确率明显高于传统方法。结论成功建立了多重PCR方法,能快速、准确地对结核分枝杆菌群进行种、型鉴别。 展开更多
关键词 结核 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 多重PCR 鉴别诊断
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牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化 被引量:6
13
作者 鲁俊鹏 罗满林 +1 位作者 宋延华 邹潍力 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期366-370,共5页
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-M... 从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 牛分支杆菌 MPT83基因 克隆 原核表达 蛋白纯化
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结核杆菌多位点环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:5
14
作者 王正荣 陈创夫 +4 位作者 杨明锋 孟茹 曹旭东 张辉 乔军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期267-271,共5页
为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中... 为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较。实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性。可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应。另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%,LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%。LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 鉴别诊断
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牛分枝杆菌MPB51基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:6
15
作者 姜秀云 王春凤 +1 位作者 王春芳 何昭阳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期298-300,共3页
以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板 ,以MPB5 1成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增 ,获得约80 0bp的DNA片段。通过T- A克隆技术 ,将PCR产物克隆至pGEM TVector中 ,成功地构建出克隆质粒pGEM T -5 1。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM T- ... 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板 ,以MPB5 1成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增 ,获得约80 0bp的DNA片段。通过T- A克隆技术 ,将PCR产物克隆至pGEM TVector中 ,成功地构建出克隆质粒pGEM T -5 1。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM T- 5 1和pET2 8a(+) ,并将纯化的MPB5 1基因亚克隆至pET2 8a (+)中 ,构建出原核表达质粒pET2 8a- 5 1。将pET2 8a- 5 1转化至感受态E .coliBL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导和SDS PAGE分析 ,可见约30kD外源蛋白带。Westernblot分析发现 ,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性 ,从而为进一步研究MPB5 1的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 MPB51基因 克隆 原核表达
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用小鼠模型分析表达牛结核分枝杆菌Ag85B重组腺病毒的细胞免疫特性 被引量:6
16
作者 周海霞 陈祥 +5 位作者 季琰 周卫东 胡茂志 黄金林 潘志明 焦新安 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期811-816,共6页
【目的】构建表达牛结核分枝杆菌抗原Ag85B重组腺病毒rAd-Ag85B,并用小鼠模型分析其细胞免疫特点。【方法】采用PCR方法,扩增结核分枝杆菌Ag85B的编码基因fbpB,测序后构建pDC516-Ag85B重组质粒。利用脂质体将pDC516-Ag85B与pBHGfrtΔE1,... 【目的】构建表达牛结核分枝杆菌抗原Ag85B重组腺病毒rAd-Ag85B,并用小鼠模型分析其细胞免疫特点。【方法】采用PCR方法,扩增结核分枝杆菌Ag85B的编码基因fbpB,测序后构建pDC516-Ag85B重组质粒。利用脂质体将pDC516-Ag85B与pBHGfrtΔE1,3FLP共转染Ad293细胞包装成重组病毒rAd-Ag85B。空斑纯化后用电镜负染、目的基因转录和蛋白表达进行rAd-Ag85B验证。同时将rAd-Ag85B和rAd(wtAd)分别经皮下注射免疫BALB/c小鼠,二免二周后取小鼠脾脏细胞,进行CD69表面分子表达、淋巴细胞增殖和ELISPOT实验分析。【结果】在电镜下能观察到包装的重组病毒粒子,且在转录和蛋白水平上验证了rAd-Ag85B构建成功。免疫试验结果显示,rAd-Ag85B能激活CD4+T和CD8+T细胞表面分子CD69的表达,并引起淋巴细胞增殖。ELISPOT表明rAd-Ag85B呈现Th1免疫特点。【结论】成功构建的rAd-Ag85B能引起机体针对PPD蛋白或Ag85B多肽的Th1免疫应答。 展开更多
关键词 抗原Ag85B 牛结核分枝杆菌 重组腺病毒 Γ干扰素 CD69
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Molecular Identification of Mycobacterium Strains Responsible of Bovine Tuberculosis Cases in Bobo-Dioulasso Slaughterhouse, Burkina Faso
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作者 Mariétou Konate Aminata Fofana# +2 位作者 Yacouba Kouadima Aboubacar Sidiki Ouattara Adama Sanou 《Advances in Microbiology》 CAS 2024年第2期105-114,共10页
Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are co... Bovine tuberculosis (bTB) is an endemic zoonosis significantly affects animal health in Burkina Faso. The primary causative agent is Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex, mainly M. bovis. Cattle are considered as natural reservoir of M. bovis. However, in Burkina Faso, the circulation of these strains remains poorly understood and documented. This study aimed to identify and characterize Mycobacterium strains from suspected carcasses during routine meat inspection at Bobo-Dioulasso refrigerated slaughterhouse. A prospective cross-sectional study was conducted from January 2021 to December 2022 on cases of seizures linked to suspected bovine tuberculosis. Microbiological and molecular analyzes were used for mycobacterial strain isolation and characterization. Out of 50 samples, 24% tested positive by microscopy and 12% by culture. Molecular analysis identified 6 strains of Mycobacteria, exclusively Mycobacterium bovis specifically the subspecies bovis (Mycobacterium bovis subsp bovis). In conclusion, M. bovis subsp bovis is the primary agent responsible for bovine tuberculosis in Bobo-Dioulasso. Continuous monitoring of mycobacterial strains is therefore necessary for the effective control of this pathology in the local cattle population. 展开更多
关键词 Bovine Tuberculosis mycobacterium bovis Molecular Identification Cattle Population Burkina Faso
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应用TaqMan荧光定量PCR检测牛分枝杆菌 被引量:6
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作者 王春雨 王振国 +4 位作者 刘金华 宋战昀 周亮 高宏伟 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期133-136,共4页
为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最... 为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最低检测值可达1 pg/mL;对20阳性临床样品进行荧光定量PCR检测,均为阳性;而对培养为阴性的20份临床样品进行检测,6份为阳性。该研究结果表明,建立的方法特异性强,敏感性高,稳定性好,能够用于M.bovis的鉴别检测,对牛分枝杆菌病的快速检测和早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌病 鉴别检测 牛型结核杆菌 荧光定量PCR
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牛分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:6
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作者 姜秀云 王春凤 +1 位作者 王春芳 何昭阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期486-489,共4页
本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-70... 本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-70和pET28a(+),并将纯化的MPB70基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-70。将pET28a-70转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约25 Ku外源蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB70的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 MPBTO基因 克隆 原核表达
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牛结核病诊断与防控的研究进展 被引量:2
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作者 关佳宁 《现代畜牧兽医》 2024年第2期83-87,共5页
牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就... 牛结核病(bovine tuberculosis)是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,在全球范围内造成了严重的经济损失,危害公共卫生安全。对于牛结核病的防控,除了要加强饲养管理之外,还应及时地诊断并隔离患病动物,并为易感动物接种疫苗。文章就牛结核病的诊断技术和防治措施进行了综述,以期为牛结核病的诊断与防控提供参考。 展开更多
关键词 牛结核病 结核分枝杆菌 分子生物学诊断 免疫学诊断
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