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牛病毒性腹泻病毒、牛传染性支气管炎病毒和口蹄疫病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：17
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作者 宋爽 赵柏林 +6 位作者 曲萍 胡冬梅 孙雨 董浩 杨林 宋晓晖 潘树德 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期133-136,共4页
为建立同时快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性支气管炎病毒(IBRV)和口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据高度保守的BVDV的5'UTR基因、IBRV的g B基因和FMDV的3D基因,分别设计了3对对应的特异性引物和3种不同发光基团标记... 为建立同时快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性支气管炎病毒(IBRV)和口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据高度保守的BVDV的5'UTR基因、IBRV的g B基因和FMDV的3D基因,分别设计了3对对应的特异性引物和3种不同发光基团标记的Taq Man探针,建立了同时检测这3种病毒的多重荧光定量PCR的方法。并对其反应条件进行优化。结果表明,该多重荧光定量PCR方法能够特异性检测出BVDV、IBRV和FMDV,而对BTV等检测结果均为阴性,对BVDV、IBRV、FMDV的最低检测量分别为194拷贝/μL、208拷贝/μL和150拷贝/μL。而且组内和组间变异系数均低于0.85%。本研究所建立的多重荧光定量PCR具有方便、快速、特异性好、灵敏度高、重复性好等优点,能够用于BVDV、IBRV和FMDV的同时检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛传染性鼻气管炎病毒 口蹄疫病毒 多重荧光定量pcr
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2009甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究 被引量：4
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作者 王婷婷 朱汝南 +11 位作者 钱渊 孙宇 王芳 邓洁 曲东 李颖 任晓旭 沙莉 袁艺 王菲 李杰 张宝元 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2012年第1期25-30,共6页
目的了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。方法设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒(RSV)A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡... 目的了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。方法设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒(RSV)A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡病毒(HBoV)在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。结果新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10～300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%(331份),5岁以下占87.6%(290/331份)。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%(12份),RSV-B亚型8.4%(71份),PIV-1型8.2%(70份),PIV-2型0.5%(4份),PIV-3型3.9%(33份),ADV13.9%(118份),HBoV2.7%(23份)。RSV检出以B亚型为主(85.5%),流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率(平均为13.9%),HBoV的流行高峰在2009年9～12月。结论除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。 展开更多
关键词 2009甲型H1N1流感 儿童 北京 急性呼吸道感染 呼吸道病毒 多重实时定量pcr
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热厉螨多重实时荧光PCR种属鉴定方法研究
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作者 高志强 汪琳 +5 位作者 朱忠武 白子龙 赵相鹏 蒲静 张伟 刘环 《中国口岸科学技术》 2023年第9期82-90,共9页
热厉螨为蜂房内寄生虫,可严重侵害蜜蜂幼虫和蛹,及时检出并采取防治措施,可使蜂群免受毁灭性损害。本研究在序列比对分析的基础上,分别针对亮热厉螨、梅氏热厉螨、柯氏热厉螨COⅠ基因,以及蜂16S rRNA基因(内对照)设计4对引物和5条探针,... 热厉螨为蜂房内寄生虫,可严重侵害蜜蜂幼虫和蛹,及时检出并采取防治措施,可使蜂群免受毁灭性损害。本研究在序列比对分析的基础上,分别针对亮热厉螨、梅氏热厉螨、柯氏热厉螨COⅠ基因,以及蜂16S rRNA基因(内对照)设计4对引物和5条探针,经体系优化建立了可快速鉴别检测3种热厉螨的多重荧光PCR检测方法,并对方法的分析性能进行了评价。结果显示,本方法针对病原靶标的最低检测限(LOD)分别为6.07 copies、5.67 copies和6.21 copies,不与其他蜂病病原核酸发生交叉反应。应用建立的多重荧光PCR检测方法对201份蜂及蜂产品进行检测,分别检出亮热厉螨阳性样品1份和梅氏热厉螨阳性样品1份,经测序及序列比对确认为相应热厉螨特异序列。本研究建立的含蜂内参靶标的多重实时荧光PCR方法特异、灵敏,并可对采样、核酸提取及扩增进行全程质控,为热厉螨的快速筛查和种属鉴定提供了可靠方法。 展开更多
关键词 内参靶标 热厉螨 多重荧光pcr
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