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隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体的免疫原性研究
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作者 谷明莉 钱 +4 位作者 周晔 陈波 陈孙孝 邓安梅 仲人前 《临床军医杂志》 CAS 2008年第2期169-171,共3页
目的探讨纯化的隐球菌抗原肽GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型隐球菌疫苗的研制打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的GMFDGLSGV单体... 目的探讨纯化的隐球菌抗原肽GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型隐球菌疫苗的研制打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的GMFDGLSGV单体、二聚体、四聚体、八聚体重组蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定重组多聚体的免疫原性。结果10例HLA-A*0201阳性个体PBMC对八聚体的平均SI为37.4±3.07;增殖反应明显高于四聚体(平均SI为20.1±1.37)、二聚体(平均SI为14.1±1.06)、单体(平均SI为11.4±0.68)以及阴性对照(平均SI为1±0.10)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在抗原肽诱导的CTL细胞毒活性中,HLA-A*0201阳性个体PBMC对八聚体、四聚体、二聚体、单体及阴性对照组均表现不同程度的杀伤活性,平均活性分别为48.1±4.28、23.9±2.20、16.3±1.27、13.1±1.10、1.0±0.1(P<0.01)。结论本研究得到的重组优化八聚体具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性,为进一步开发有效的隐球菌疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多聚体 疫苗
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隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体重组表达及鉴定
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作者 谷明莉 钱琤 +4 位作者 周晔 陈波 陈孙孝 邓安梅 仲人前 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第3期6-8,共3页
目的重组表达隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体,以进一步探讨其免疫效应。方法选取隐球菌抗原表位GMFDGLSGV,引入Th表位PADRE及木马肽序列(RKKRRQRRR),并以RVKR序列作为接头,分别合成隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二... 目的重组表达隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体,以进一步探讨其免疫效应。方法选取隐球菌抗原表位GMFDGLSGV,引入Th表位PADRE及木马肽序列(RKKRRQRRR),并以RVKR序列作为接头,分别合成隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体全基因序列,经PCR扩增后分别插入融合表达载体pGEX-4T-1,将重组质粒转入大肠埃希氏菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果成功构建了隐球菌保护性表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体的表达质粒,并经IPTG诱导表达了大小约为32000,36000,42000的融合蛋白。结论隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体的重组表达为进一步开发隐球菌疫苗提供有价值的依据。 展开更多
关键词 隐球菌 表位多聚体 重组表达
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