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人视黄醇结合蛋白4在杆状病毒系统中的表达及其多克隆抗体制备 被引量：4
1
作者 任玉莹 陈丹 +10 位作者 郭玉争 史洪娜 刘娟 班靖洋 刘亚宁 吴晓芳 王维龙 程海 李鼎锋 刘勇 王立良 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期974-985,共12页
旨在利用杆状病毒系统表达、制备人视黄醇结合蛋白(RBP4)并检测其免疫原性。将人RBP4基因片段及信号肽SS64片段亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-dual(pFBd)中,获得相应的重组转移质粒;转化大肠杆菌菌株DH10bac,转座后经筛选获得重组... 旨在利用杆状病毒系统表达、制备人视黄醇结合蛋白(RBP4)并检测其免疫原性。将人RBP4基因片段及信号肽SS64片段亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-dual(pFBd)中,获得相应的重组转移质粒;转化大肠杆菌菌株DH10bac,转座后经筛选获得重组穿梭质粒rbacmid,将重组穿梭质粒转染孔板培养的Sf9细胞,获得含人RBP4表达框的重组杆状病毒,经过扩增获得毒种。毒种感染对数生长期的Sf9细胞并表达人RBP4蛋白(I-RBP4),通过SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行检测和鉴定。用毒种感染悬浮培养的Sf9细胞制备一批RBP4蛋白,完成SDS、Western blotting的检测及少量的多抗制备。纯化重组蛋白并与E.coli重组人RBP4(E-RBP4)分别免疫家兔。实验结果,酶切鉴定及测序证实重组转移质粒构建正确;成功构建重组RBP4-bacmid;人RBP4蛋白在昆虫细胞获得高效表达。表达的RBP4蛋白可以分泌到培养基中,分子量约为23 kDa,经过计算表达量为100 mg/L;纯化蛋白免疫兔子制备了多抗血清,血清滴度为1∶100 000,高于原核表达的抗体滴度(1∶10 000),与人体提纯蛋白制备的抗体滴度相近。杆状病毒系统高效表达了人的RBP4蛋白,具有较好的抗原性,并获得高亲和力的抗血清,为下一步的人血RBP4检测试剂盒的制备打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 视黄醇结合蛋4(RBP4) 杆状病毒表达系统 基因表达 蛋白纯化 多抗制备
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兔抗吗啡多克隆抗体制备 被引量：1
2
作者 张益鹄 徐艳娟 +2 位作者 王央共 崔武任 沈关心 《中国法医学杂志》 CSCD 2000年第2期89-91,共3页
先将吗啡在 6 -羟基位改造为 6 -琥珀酰吗啡 ,再通过碳二亚胺将其与牛血清白蛋白或卵蛋白胶连分别制备免疫原和检测原 ,免疫新西兰大白兔制备出高效价 (1∶ 12 80 0 )抗吗啡多克隆抗体 。
关键词 吗啡 多克隆抗体 抗血清制备
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