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油菜BnROP1同源基因沉默导致拟南芥雄性不育 被引量:1
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作者 王琢玉 李振波 +3 位作者 阳永学 黄军艳 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-8,共8页
基于油菜杂合双显性雄性核不育系和拟南芥全基因组芯片的表达谱分析结果,选择了一个油菜差异表达基因,其对应的拟南芥同源基因为At3G51300(AtROP1),采用荧光定量PCR方法,对油菜中该基因(BnROP1)在根、茎、叶、花、雌蕊、雄蕊、角果中的... 基于油菜杂合双显性雄性核不育系和拟南芥全基因组芯片的表达谱分析结果,选择了一个油菜差异表达基因,其对应的拟南芥同源基因为At3G51300(AtROP1),采用荧光定量PCR方法,对油菜中该基因(BnROP1)在根、茎、叶、花、雌蕊、雄蕊、角果中的表达模式进行了分析,在此基础上构建了AtROP1基因的microRNA干扰载体,通过农杆菌介导的拟南芥转化,获得12株转基因苗。T1转基因植株大多出现角果数量减少或不结实、无花粉、花药萎缩以及小孢子数量大大减少的表型。对转基因T2多个株系的荧光定量PCR分析说明,目标基因的干扰是有效的,靶基因的表达水平都显著下调。说明转基因植株的雄性不育表型和ROP1基因的表达沉默有关,ROP1基因不仅控制了花粉管的极性和伸长,还和小孢子的正常发育密切相关。 展开更多
关键词 拟南芥 雄性不育 BnROP1 microRNA干扰
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人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响 被引量:3
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作者 张桓瑜 梁铸林 +2 位作者 郑丽端 童强松 董继华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期571-573,共3页
目的构建人微小RNAl45(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lip... 目的构建人微小RNAl45(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR.145表达水平,黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配;重组质粒转染SGC.7901细胞后,miR-145表达分别上调20.45倍(P〈0.01),细胞黏附能力分别下降51.5%(P〈0.01),细胞侵袭能力分别下降30.4%(P〈0.01)。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。 展开更多
关键词 微小RNA145 胃癌 表达载体
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