芍药舒筋片通过miRNA-140对骨关节炎大鼠软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用 被引量：9

1

作者 徐海涛 高宁阳 +5 位作者 顾新丰 张琥 杜炯 谈绎文 王学宗 郑昱新 《陕西中医》 2020年第9期1184-1187,共4页

目的:研究芍药舒筋片通过miRNA-140对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨芍药舒筋片对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞的保护作用。方法:取SD大鼠45只,随机分为假手术组、OA对照组、OA治疗组,每组各15只。OA对照组和OA治疗组采用改良Hult... 目的:研究芍药舒筋片通过miRNA-140对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨芍药舒筋片对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞的保护作用。方法:取SD大鼠45只,随机分为假手术组、OA对照组、OA治疗组,每组各15只。OA对照组和OA治疗组采用改良Hulth造模法建模,假手术组和OA对照组在建模2周后开始生理盐水灌胃,OA治疗组等量芍药舒筋片灌胃。采用CCK-8溶液检测药物对细胞增殖的影响;软骨组织学采用Mankin评分;检测各组软骨细胞miRNA-140、Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达。结果:OA对照组中软骨细胞的增殖速率、miRNA-140相对表达量均明显低于假手术组,而OA治疗组均明显高于OA对照组(P<0.05)。OA对照组中Mankin评分、细胞Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达水平均明显高于假手术组,而OA治疗组均明显低于OA对照组(P<0.05)。结论:芍药舒筋片能够增加OA大鼠软骨细胞中miRNA-140的相对表达量和软骨细胞的增殖速率,降低Mankin评分,且能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路活性来发挥其对关节软骨细胞的保护作用。 展开更多

关键词 软骨细胞 骨关节炎 mirna-140 WNT/Β-CATENIN信号通路 芍药舒筋片 调控作用

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miRNA-140在骨性关节炎中的研究进展 被引量：6

2

作者 赵振国 鲍同柱 《安徽医药》 CAS 2012年第8期1053-1055,共3页

骨性关节炎(OA)是伴随疼痛和关节运动障碍的一种以关节软骨退变和关节周围形成骨质增生为病理特征的慢性进行性骨关节病。临床治疗往往不能令人满意。在OA治疗新进展中基因网络得到广泛研究,尤其是MicroRNA在OA的发病机制过程中有所表... 骨性关节炎(OA)是伴随疼痛和关节运动障碍的一种以关节软骨退变和关节周围形成骨质增生为病理特征的慢性进行性骨关节病。临床治疗往往不能令人满意。在OA治疗新进展中基因网络得到广泛研究,尤其是MicroRNA在OA的发病机制过程中有所表达并具有调控降解和修复等作用。该文通过miRNA结构功能;miRNA-140在OA的发病中调控机制、作用靶点以及miRNA-140在骨生长板的作用机制结合近几年的国内外研究做一综述。 展开更多

关键词 骨关节炎 mirna mirna-140 关节软骨

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miRNA-140在早期骨关节炎软骨细胞中的表达规律及功能 被引量：7

3

作者 周新华 王敏 +2 位作者 姬颜辉 蒋毅 刘庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期610-615,共6页

目的观察早期骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中miRNA-140的表达规律以及转染ds-miRNA-140对软骨细胞功能的影响。方法建立兔OA模型,获得正常软骨细胞(A组)和4周(B组)、8周(C组)OA软骨细胞,应用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组m... 目的观察早期骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中miRNA-140的表达规律以及转染ds-miRNA-140对软骨细胞功能的影响。方法建立兔OA模型,获得正常软骨细胞(A组)和4周(B组)、8周(C组)OA软骨细胞,应用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组miRNA-140相对表达量以及Ⅱ型胶原蛋白(Col2a1)和金属蛋白酶13(MMP-13)的表达情况。各组软骨细胞转染ds-miRNA-140后,观察细胞Col2a1、MMP-13的表达情况。结果 B组、C组软骨细胞miRNA-140的表达和A组相比分别下降到63%和57%(P<0.01),而B组和C组软骨细胞miRNA-140的表达差异无统计学意义(P>0.05);B、C两组细胞Col2a1mRNA的表达和A组相比分别减少了52%和63%(P<0.01),B、C两组软骨细胞MMP-13mRNA的表达和A组相比分别升高了3.01倍和4.15倍(P<0.01)。转染ds-miRNA-140后,B、C两组细胞Col2a1mRNA的表达分别增加了60%和127%(P<0.01),B、C两组MMP-13mRNA的表达在转染后是转染前的54.53%和42.61%(P<0.01)。Col2a1和MMP-13蛋白表达水平变化趋势与mRNA一致。结论 OA早期关节软骨miRNA-140的表达显著减少;转染ds-miRNA-140可增加软骨细胞Col2a1表达,同时降低MMP-13的表达。 展开更多

关键词 骨关节炎 mirna-140 软骨细胞 胶原Ⅱ型 基质金属蛋白酶13

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独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞表达miRNA-140的影响 被引量：5

4

作者 陈俊 叶锦霞 +4 位作者 林洁 林婧 林秋祥 刘献祥 吴广文 《风湿病与关节炎》 2017年第9期5-9,共5页

目的:观察独活寄生汤含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达miRNA-140的影响,探讨独活寄生汤防治骨关节炎的作用机制。方法:4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代(F3)软骨细胞进行鉴定。用10... 目的:观察独活寄生汤含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达miRNA-140的影响,探讨独活寄生汤防治骨关节炎的作用机制。方法:4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代(F3)软骨细胞进行鉴定。用10 ng·mL^(-1)白细胞介素-1β诱导F3软骨细胞,复制退变软骨细胞模型。成功后随机分为模型组和独活寄生汤含药血清组,分别在培养24,48,72 h后采用Taq Man real-time PCR法检测各组miRNA-140表达。结果:独活寄生汤含药血清组miRNA-140相对表达量随着干预时间的延长逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:独活寄生汤治疗骨关节炎的部分作用机制是有效促进退变软骨细胞miRNA-140的表达。 展开更多

关键词 骨关节炎 独活寄生汤 含药血清 软骨细胞 mirna-140

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miRNA-140靶向结合自噬相关基因ULK1的验证 被引量：5

5

作者 卢岩岩 姚楠 +5 位作者 许学猛 刘文刚 蔡大可 黄丹娥 赵传喜 陈国材 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第24期3831-3836,共6页

背景:自噬可以通过抑制凋亡来缓解膝骨关节炎,miR-140是否可以调节自噬关键基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(uncoordinated 51 like kinase-1,ULK1)基因未见报道。目的:探索miRNA-140对ULK1基因的调控关系。方法:通过miRNA靶... 背景:自噬可以通过抑制凋亡来缓解膝骨关节炎,miR-140是否可以调节自噬关键基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(uncoordinated 51 like kinase-1,ULK1)基因未见报道。目的:探索miRNA-140对ULK1基因的调控关系。方法:通过miRNA靶基因预测网站预测ULK1基因是否为miRNA-140的靶基因;将ULK1基因的3'端非翻译区全长序列载入海肾荧光素酶基因的下游,通过构建结合位点的突变序列,得到野生型和突变型载体,分别用野生型和突变型海肾荧光素酶载体转染293T细胞,检测每种转染细胞海肾荧光素酶的表达活性;运用miRNA-140 inhibitor对293T细胞进行干预,Western blot检测ULK1蛋白表达水平。结果与结论:与野生型载体组细胞相比,加入miR-140 mimics后荧光素酶的表达活性明显降低(P<0.01);当抑制miRNA-140后,ULK1蛋白的表达明显升高(P<0.01)。结果证实,miRNA-140可以与ULK1基因靶向结合从而调控其表达。 展开更多

关键词 mirna-140 ULK1基因 软骨 自噬 凋亡 点突变 组织工程 骨关节炎 质粒 载体 转染 双荧光素酶报告法

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骨伤三方对膝骨关节炎软骨退变的影响研究

6

作者 李森 黄伟刚 杨秀梅 《现代医学与健康研究电子杂志》 2024年第21期14-17,共4页

目的探讨骨伤三方治疗膝骨关节炎(KOA)对软骨退变的影响及其作用机制。方法选取2021年1月至2023年8月于广州市番禺区中医院进行膝关节置换手术的42例患者的关节负重区退变软骨,所有标本放于液氮中保存,以随机数字表法分为对照组和骨伤... 目的探讨骨伤三方治疗膝骨关节炎(KOA)对软骨退变的影响及其作用机制。方法选取2021年1月至2023年8月于广州市番禺区中医院进行膝关节置换手术的42例患者的关节负重区退变软骨,所有标本放于液氮中保存,以随机数字表法分为对照组和骨伤三方组,各21例。分离、提取并培养KOA患者软骨细胞,骨伤三方组软骨细胞培养时加入骨伤三方提取物400μL干预,对照组软骨细胞培养时则加入等量的生理盐水,均培养72 h,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组软骨细胞miRNA-140基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测两组软骨细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达水平;采用MTT检测两组软骨细胞24、48、72 h的活性。结果干预后,骨伤三方组的miRNA-140表达水平高于对照组(P<0.05);干预后,骨伤三方组PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量均低于对照组(均P<0.05),且骨伤三方组PI3K、AKT、mTOR荧光检查蛋白印迹灰度比明显低于对照组。培养24~72 h,两组软骨细胞组织的吸光度值(OD)均逐渐升高,且各时间点骨伤三方组均高于对照组(均P<0.05)。结论骨伤三方可上调关节软骨细胞miRNA-140的表达量,降低PI3K/AKT/mTOR通道相关蛋白表达量,继而增强软骨细胞活性,以抑制关节软骨退变,延缓KOA的发展。 展开更多

关键词 膝骨关节炎 软骨细胞 mirna-140 磷脂酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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miRNA-140过表达腺病毒载体的构建及鉴定 被引量：2

7

作者 贺鹏 段莉 《东南大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第1期6-10,共5页

目的:构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体。方法:从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒p DC316-m CMV-EGFP,进一步将带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒Ad Easy,并将重组质粒转染到A... 目的:构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体。方法:从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒p DC316-m CMV-EGFP,进一步将带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒Ad Easy,并将重组质粒转染到AAV-293细胞中包装成腺病毒载体,经过二次扩增之后获得高滴度的腺病毒,并且检测其包装效率及感染滴度。最后,用目的腺病毒感染骨肉瘤细胞,通过荧光定量PCR方法检测miRNA-140表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果均表明,miRNA-140成功克隆入p DC316-m CMV-EGFP载体中。与Ad Easy重组后,包装纯化具有感染性的腺病毒miRNA-140,通过荧光定量PCR检测,软骨肉瘤细胞中miRNA-140升高4.2±0.2倍。结论:成功构建了成熟miRNA-140的腺病毒表达载体。 展开更多

关键词 mirna-140 AD Easy系统 荧光定量PCR 骨肉瘤细胞

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miRNA-140作用于肺癌研究进展综述

8

作者 王小玉 周文文 +3 位作者 王真真 赵子舒 王海霞 杨雁鸿 《临床医学进展》 2018年第6期514-524,共11页

miRNA在癌症发生发展中扮演着重要的角色,现有研究表明,miRNAs的异常表达与多种癌症有关,而miRNAs可作为促肿瘤生长因子和肿瘤抑制因子存在。本文从miRNA-140相关信号通路着手,介绍了miRNA-140作为肿瘤抑制因子或致癌基因与肺癌相关性... miRNA在癌症发生发展中扮演着重要的角色,现有研究表明,miRNAs的异常表达与多种癌症有关,而miRNAs可作为促肿瘤生长因子和肿瘤抑制因子存在。本文从miRNA-140相关信号通路着手,介绍了miRNA-140作为肿瘤抑制因子或致癌基因与肺癌相关性及治疗前景的相关研究,逐步展开miRNA-140在肺癌治疗领域的应用前景。 展开更多

关键词 mirna-140 LUNG CANCER 肺癌 信号通路

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微小核糖核酸140在机体疾病中的作用研究进展

9

作者 王清坚 陈雅璐 +1 位作者 王兵 王明刚 《广西医学》 CAS 2019年第20期2622-2625,共4页

微小核糖核酸(miRNA)是一类非编码小分子RNA,主要通过与靶基因3′非翻译区结合来调控基因的表达。miRNA不仅在发挥生物学功能过程中扮演着重要角色,还参与包括肿瘤在内的多种疾病的致病机制。本文就miRNA-140在机体疾病致病中的作用研... 微小核糖核酸(miRNA)是一类非编码小分子RNA,主要通过与靶基因3′非翻译区结合来调控基因的表达。miRNA不仅在发挥生物学功能过程中扮演着重要角色,还参与包括肿瘤在内的多种疾病的致病机制。本文就miRNA-140在机体疾病致病中的作用研究进展进行综述。 展开更多

关键词 微小核糖核酸 mirna-140 肿瘤 炎症 综述

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miR-140-5p通过NF-κB通路调控人骨关节炎软骨细胞自噬的研究 被引量：7

10

作者 刘志刚 李琦军 +1 位作者 王飞 翟羽佳 《现代中西医结合杂志》 CAS 2020年第19期2089-2093,共5页

目的探讨miR-140-5p在正常和骨关节炎软骨细胞中的表达情况及其在骨关节炎发病机制中的作用。方法①通过定量实时聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中miR-140-5p和基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达水平。②将软骨... 目的探讨miR-140-5p在正常和骨关节炎软骨细胞中的表达情况及其在骨关节炎发病机制中的作用。方法①通过定量实时聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中miR-140-5p和基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达水平。②将软骨细胞分为3组,对照组加入白细胞介素-1β(IL-1β)培养,miR-140-5p mimic组同时转染miR-140-5p mimic,miR-140-5p inhibitor组同时转染miR-140-5p inhibitor。采用MTT法检测各组软骨细胞增殖情况,采用RT-qPCR和Western blot法检测各组MMP-13、Beclin-1、ATG7和NF-κB信号通路中NF-κBp65表达情况。结果骨关节炎软骨细胞中miR-140-5p相对表达水平较正常软骨细胞中显著降低(P<0.05),MMP-13相对表达水平较正常软骨细胞中显著增高(P<0.05)。与对照组比较,miR-140-5p mimic组软骨细胞增殖明显,miR-140-5p inhibitor组软骨细胞增殖明显受到抑制。与对照组比较,miR-140-5p mimic组软骨细胞中MMP-13、NF-κBp65mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),而miR-140-5p inhibitor组均明显升高(P均<0.05);miR-140-5p mimic组软骨细胞中Beclin-1和ATG7mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05),而miR-140-5p inhibitor组均明显降低(P均<0.05)。结论miR-140-5p能够通过抑制NF-κB信号通路促进骨关节炎软骨细胞的增殖和自噬,延缓骨关节炎的进展,为探索靶向miR-140-5p治疗骨关节炎提供了一定参考。 展开更多

关键词 骨关节炎 自噬 miR-140-5p NF-ΚB信号通路

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补肾活血方调节miRNA-140-5p表达干预人原代软骨细胞退变的研究 被引量：6

11

作者 姚楠 陈能 +4 位作者 刘文刚 许学猛 黄丹娥 蔡大可 赵传喜 《风湿病与关节炎》 2017年第9期10-14,共5页

目的:研究补肾活血方含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)刺激的人原代软骨细胞miRNA-1 40及其靶基因表达的影响。方法:通过采用生理盐水和补肾活血方分别灌胃雌性SD大鼠制备空白血清和含药血清。将人软骨细胞种植于6孔板并且分为3组。空... 目的:研究补肾活血方含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)刺激的人原代软骨细胞miRNA-1 40及其靶基因表达的影响。方法:通过采用生理盐水和补肾活血方分别灌胃雌性SD大鼠制备空白血清和含药血清。将人软骨细胞种植于6孔板并且分为3组。空白对照组和模型对照组细胞培养的血清采用大鼠空白血清,含药血清组细胞培养的血清采用大鼠含药血清。另外,模型对照组和含药血清组细胞加入10 ng·mL^(-1) IL-1β。以上各组细胞设3个复孔,继续培养细胞至IL-1β刺激后24 h收集各组细胞提取总RNA。采用RT-qPCR检测软骨细胞miRNA-140-5p以及聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组软骨细胞miRNA-140-5p表达和IGFBP5 m RN A表达明显降低(P<0.05),ADAMTS-5和MMP-13mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,补肾活血方含药血清显著升高了IL-1β刺激的软骨细胞miRNA-140-5p表达和IGFBP5 mRNA表达(P<0.05),并且显著降低ADAMTS-5和MMP-13 mRNA表达(P<0.05)。结论:补肾活血方含药血清可以抑制IL-1β导致的人原代软骨细胞退变,其作用机制与提高miRNA-140-5p和IGFBP5 mRNA表达,降低ADAMTS-5和MMP-13 mRNA表达有关。 展开更多

关键词 骨关节炎 膝 补肾活血方 mirna-140-5p 软骨细胞

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miRNA-140-5p在人骨髓间充质干细胞成脂分化中的表达及其靶基因的预测 被引量：5

12

作者 汪涛 颜瑞巧 +7 位作者 曹俊 曹玲玲 张铉浦 李兴暖 吴萍 周小鸥 吴建芳 许晓源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期199-203,共5页

目的筛选出人骨髓间充质干细胞(h MSCs)成脂分化中具有潜在价值的mi RNA及其靶基因,为人类成骨细胞与脂肪细胞分化平衡调控机制的深入研究提供有力实验依据。方法收集h MSCs成脂分化过程中的0、7、14、21 d的细胞样品,应用mi RNA芯片和... 目的筛选出人骨髓间充质干细胞(h MSCs)成脂分化中具有潜在价值的mi RNA及其靶基因,为人类成骨细胞与脂肪细胞分化平衡调控机制的深入研究提供有力实验依据。方法收集h MSCs成脂分化过程中的0、7、14、21 d的细胞样品,应用mi RNA芯片和转录组测序(m RNA-seq)技术,分析4个点细胞中mi RNA和m RNA的表达水平,并将mi RNA与m RNA的表达趋势进行关联分析,聚焦具有研究价值的mi RNA与m RNA相互调控关系,同时,采用Target Scan、Pic Tar和mi Randa等数据库进行靶基因的预测。结果发现mi R-140-5p在成脂分化中表达量呈逐渐下降的趋势,而白血病抑制因子受体(LIFR)表达量呈逐渐升高趋势,二者呈现负调控的对应关系。同时经3个靶基因数据库预测,LIFR为mi R-140-5p共有的靶基因。结论 mi RNA-140-5p可能与人骨髓间充质干细胞的成脂分化密切相关,且通过调控其靶基因LIFR的表达而参与成脂分化。 展开更多

关键词 人骨髓间充质干细胞 成脂分化 MI RNA-140-5p 白血病抑制因子受体

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miRNA-140-5P在甲状腺癌细胞TPC-1中的表达及对其增殖迁移侵袭能力的影响

13

作者 罗义 李阳敏 +3 位作者 鲜童丞 杨闵叶 王杰 苏强 《西部医学》 2024年第9期1277-1281,共5页

目的探讨miR-140-5p在甲状腺癌发展中的作用及其分子生物调节机制,miRNA-140-5P对甲状腺癌细胞TPC-1侵袭、迁移的调控作用机制。方法收集2021年1月—2022年1月南充市中心医院手术切除的甲状腺恶性肿瘤36例和良性肿瘤32例的肿瘤标本。qt-... 目的探讨miR-140-5p在甲状腺癌发展中的作用及其分子生物调节机制,miRNA-140-5P对甲状腺癌细胞TPC-1侵袭、迁移的调控作用机制。方法收集2021年1月—2022年1月南充市中心医院手术切除的甲状腺恶性肿瘤36例和良性肿瘤32例的肿瘤标本。qt-PCR检测miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤和良性肿瘤组织中mRNA的表达水平,外购甲状腺癌细胞TPC-1,WB实验检测miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤和良性肿瘤细胞中的蛋白表达水平,评估miRNA-140-5P在两种组织中的表达差异;实验引入miRNA-140-5Pmimics转染细胞,Transwell小室实验、CCK-8对甲状腺肿瘤细胞迁移、侵袭、增殖能力进行检测;实验对甲状腺癌细胞TPC-1中NLRP3炎性小体进行检测,并对NLRP3表达进行干预,评估甲状腺肿瘤细胞中miR-140-5P与NLRP3的调控关系。结果miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤组织和细胞中呈低表达(P<0.05)。而miRNA-140-5P mimics可增强甲状腺癌细胞TPC-1的增殖、迁移和侵袭能力,miRNA-140-5P可减弱甲状腺癌细胞中炎性介质NLRP3的表达。结论miRNA-140-5P可降低甲状腺癌细胞TPC-1的增殖、迁移和侵袭能力;并在甲状腺恶性肿瘤细胞中与NLRP3炎性小体存在交互调控,其可能降低了对NLRP3的抑制作用,从而激发了NLRP3参与的活化调控而诱发了甲状腺癌的发生发展。 展开更多

关键词 mirna-140-5P 甲状腺癌 增殖 迁移 侵袭

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微小RNA-140-5p靶向EGR-2基因调控胃癌细胞增殖凋亡的作用研究 被引量：3

14

作者 王兴 陈淑卿 《实用预防医学》 CAS 2019年第11期1391-1396,共6页

目的探讨microRNA-140-5p(miRNA-140-5p)在胃癌患者组织中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡的影响。方法收集2017年5月到2018年5月杭州市肿瘤医院住院的100例胃癌患者的组织样本,利用荧光定量PCR检测miRNA-140-5p在胃癌组织和癌旁组织中的... 目的探讨microRNA-140-5p(miRNA-140-5p)在胃癌患者组织中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡的影响。方法收集2017年5月到2018年5月杭州市肿瘤医院住院的100例胃癌患者的组织样本,利用荧光定量PCR检测miRNA-140-5p在胃癌组织和癌旁组织中的表达并分析其临床意义。采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法分析miRNA-140-mimics、miRNA-140-inhibitor对人胃癌细胞系BGC-823增殖和凋亡的影响,以及检测其对胃癌细胞TGF-β、ERK1、Smad2、IGF-1R、PI3K、Ras、AKT、MAPK、Ki67基因表达的影响。采用生物信息学、Western Blotting、双荧光素酶报告实验等方法预测并验证miRNA-140-5p的下游靶基因。结果胃癌患者癌组织中miRNA-140-5p的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001);ROC曲线示miRNA-140-5p诊断胃癌的曲线下面积为0.803(95%CI:0.723~0.851);与对照组相比,miRNA-140-mimics组中的细胞增殖率明显降低而凋亡率升高(均P<0.05);TGF-β,ERK1,Smad2,IGF-1R,PI3K,Ras,AKT,MAPK mRNA表达,以及Ki67蛋白表达明显下调(P<0.05);Targetscan数据库预测和双萤光素酶检验结果发现早期生长反应蛋白2(EGR2)是miRNA-140-5p的下游靶基因之一,较于空白对照组,miRNA-140-mimics组中EGR2含量降低(P<0.001)。结论 miRNA-140-5p在胃癌组织中表达下调,可能通过靶向EGR2来调控胃癌细胞的增殖与凋亡, miRNA-140-5p有可能成为胃癌诊断和新型生物治疗的靶点。 展开更多

关键词 mirna-140-5p 胃癌 EGR2

原文传递

miRNA-140-5p低表达促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化

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作者 刘正标 徐华 +1 位作者 周正宇 衣昕 《中国临床研究》 CAS 2022年第8期1041-1045,1050,共6页

目的探讨miRNA-140-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的相关机制。方法构建miRNA-140-5p模拟物(Mimic组)、抑制剂(Inhibitor组)、重组质粒pcDNA3.1-Wnt1及其相应的阴性对照并转染hBMSCs,应用CCK-8、茜素红染色、El... 目的探讨miRNA-140-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的相关机制。方法构建miRNA-140-5p模拟物(Mimic组)、抑制剂(Inhibitor组)、重组质粒pcDNA3.1-Wnt1及其相应的阴性对照并转染hBMSCs,应用CCK-8、茜素红染色、Elisa、qRT-PCR、Western blot等多种分子生物学技术检测hBMSCs的细胞活力和成骨分化情况,应用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-140-5p的靶基因。结果转染后,Mimic组miRNA-140-5p表达水平显著升高,Inhibitor组显著降低(P<0.05),而hBMSCs的细胞活力在两组均无明显变化(P>0.05)。茜素红染色和成骨分化标志物Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)蛋白检测结果显示Inhibitor组hBMSCs的成骨分化明显升高(P<0.05),Mimic组hBMSCs的成骨分化受到抑制(P<0.05)。双荧光素酶报告基因系统结果显示,Wnt1是miRNA-140-5p的靶基因。Western blot检测显示Wnt1和β-联蛋白(β-catenin)的表达水平在Mimic组降低(P<0.05),在Inhibitor组升高(P<0.05)。在hBMSCs中高表达Wnt1后,其成骨分化明显升高(P<0.05)。结论miRNA-140-5p的低表达可以通过靶向Wnt1/β-catenin信号通路促进hBMSCs的成骨分化。 展开更多

关键词 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 mirna-140-5p Wnt1/β-catenin信号通路 Runt相关转录因子2 碱性磷酸酶

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