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PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定 被引量：3
1
作者 周斌 刘晓东 +2 位作者 王凤鹃 刘珂 陈溥言 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第5期1-4,共4页
以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞膜蛋白,... 以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞膜蛋白,经SDS-PAGE后转印NC膜,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定CSFV病毒的细胞受体。结果发现,PK-15细胞膜上有3种能与CSFV结合的蛋白质,分子量在90～100 ku之间,暗示这些蛋白可能是CSFV受体或者受体复合物。 展开更多
关键词 PK-15细胞 膜蛋白提取 猪瘟 病毒受体
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使用不同组织裂解液提取人心房组织膜蛋白的研究 被引量：1
2
作者 李涛 毛亮 +3 位作者 黄文俊 谭晓秋 杨艳 曾晓荣 《泸州医学院学报》 2012年第3期245-247,共3页
目的:寻找一种适用于Western boltting实验的提取人心房组织膜蛋白的组织裂解液的配制方法。方法:配制两种不同的组织裂解液A、B。应用组织裂解液A、B及Bio-Rad公司提取膜蛋白的试剂盒,分别对人右心耳组织进行膜蛋白提取,聚丙烯酰胺凝... 目的:寻找一种适用于Western boltting实验的提取人心房组织膜蛋白的组织裂解液的配制方法。方法:配制两种不同的组织裂解液A、B。应用组织裂解液A、B及Bio-Rad公司提取膜蛋白的试剂盒,分别对人右心耳组织进行膜蛋白提取,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测SK2膜蛋白的表达,比较三种裂解方法的裂解效果。结果:三种不同的裂解方法提取的膜蛋白,其中用组织裂解液A和组织裂解液B提取的膜蛋白能满足Western blotting的实验要求,比用试剂盒提取的方法实验效果好。结论:组织裂解液A和组织裂解液B可作为人心房组织提取SK2膜蛋白的组织裂解液。 展开更多
关键词 组织裂解液 膜蛋白提取 WESTERN BLOTTING
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昆虫离体细胞总膜蛋白的提取及双向电泳分析
3
作者 蒋才富 刘凯余 +3 位作者 洪华珠 彭蓉 郑进 彭建新 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期37-38,共2页
探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体... 探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体细胞总膜蛋白 ,SDS -PAGE及双向电泳结果表明Sigma公司试剂盒提取的总膜蛋白效果较好 ,并且适用于双向电泳分析 ;比较了两种蛋白银染方法 ,确定并优化了一种灵敏度较高适于双向电泳的银染方法 ,得到了理想的膜蛋白 2 -DE图谱。 展开更多
关键词 膜蛋白 提取 双向电泳 银染技术 昆虫 离体细胞
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龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备 被引量：4
4
作者 沈嘉森 苏永昌 +4 位作者 陈晓婷 刘淑集 许旻 刘智禹 林河通 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第4期1232-1239,共8页
目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影... 目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。 展开更多
关键词 龙须菜 酶解 超滤膜分离 蛋白提取率 血管紧张素转换酶抑制肽
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乳鼠及成年大鼠脑皮质膜蛋白差异的分析
5
作者 田晓琳 张赛航 +1 位作者 孔德志 任雷鸣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1179-1184,共6页
目的建立基于Novagen Proteo Extract提取、NanoLC-MS/MS鉴定Sprague-Dawley大鼠脑皮层膜蛋白的组学方法,并用本法研究大鼠乳鼠及成年鼠皮层的差异膜蛋白。方法分离大鼠皮层后,通过Novagen Proteo Extract跨膜蛋白抽提试剂盒(简称TM-PEK... 目的建立基于Novagen Proteo Extract提取、NanoLC-MS/MS鉴定Sprague-Dawley大鼠脑皮层膜蛋白的组学方法,并用本法研究大鼠乳鼠及成年鼠皮层的差异膜蛋白。方法分离大鼠皮层后,通过Novagen Proteo Extract跨膜蛋白抽提试剂盒(简称TM-PEK)中的不同提取液(提取缓冲液2A与提取缓冲液2B)抽提蛋白,经Filter Aided Proteome Preparation(FASP)酶解、Nano LC分离、Orbitrap Fusion高分辨质谱采集数据,通过Proteome Discover软件解析所提取到的蛋白,并对这些蛋白的疏水性、跨膜情况及生物信息学进行分析。结果提取缓冲液2B可以鉴定出疏水性蛋白(GRAVY值>0)618个,具有跨膜区域(TMDs>1)的蛋白304个,而缓冲液2A仅能鉴定出48个疏水性蛋白和21个具有跨膜区域的蛋白,且Gene Ontology分析显示,提取液2B所抽提到的蛋白在膜(membrane)、膜部分(membrane part)和拟核(nucleoid)中明显富集。从新生大鼠和成年大鼠皮质的不同皮质蛋白中可以清楚地看到,大量涉及细胞间相互作用的突触蛋白在成年大鼠中明显富集,而新生大鼠中涉及蛋白质合成的蛋白明显高于成年鼠。结论本研究建立了基于TMPEK试剂盒提取、NanoLC-MS/MS分析鉴定大鼠皮层膜蛋白的方法,并研究了大鼠乳鼠及成年鼠皮层的差异膜蛋白,成年鼠以突触为代表的细胞间的联系发生了明显变化,而乳鼠蛋白的合成较成年鼠旺盛。 展开更多
关键词 脑皮质组织 膜蛋白 跨膜蛋白提取 ORBITRAP Fusion质谱仪 大鼠 乳鼠
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副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2的提取及鉴定
6
作者 罗银珠 徐成刚 +5 位作者 周素明 冯赛祥 贺现辉 樊惠英 廖明 辛朝安 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期225-230,共6页
为简化副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白中的单一蛋白外膜蛋白P2(OmpP2)的分离步骤,降低膜蛋白分离的设备要求,本试验用Hps标准3型(SW114)、5型(Nagasaki)菌株作为试验材料,选用溶菌酶、核酸酶对Hps进行酶解以获得其完... 为简化副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白中的单一蛋白外膜蛋白P2(OmpP2)的分离步骤,降低膜蛋白分离的设备要求,本试验用Hps标准3型(SW114)、5型(Nagasaki)菌株作为试验材料,选用溶菌酶、核酸酶对Hps进行酶解以获得其完整外膜,然后利用含有2%tritonX-100缓冲液对外膜进行进一步解离,最后利用适量浓度的胰酶对强疏水蛋白进行酶解,实现了Hps高纯度OmpP2的体外快速提取。SDS-PAGE结果显示,上述2株菌OmpP2大小分别约为43和38ku;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定结果显示,从上述蛋白酶解下来的肽段经比对与Hps的OmpP2完全吻合。斑点杂交(Dot-blot)显示采自Hps患病猪血清在点有5型菌株(Nagasaki)OmpP2和点有3型菌株(SW114)OmpP2NC膜上均发生杂交显色反应,该结果暗示OmpP2是一个具有免疫活性的抗原。本研究为OmpP2功能及免疫保护性研究奠定了基础,也为副猪嗜血杆菌病免疫学诊断提供新的参考。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P2 提取 鉴定
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