农杆菌介导法转化大豆最佳条件的研究 被引量：1

1

作者 刘尚前 王罡 +1 位作者 季静 王萍 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期44-47,60,共5页

以球形期的大豆体细胞胚为转基因受体，以抗性体细胞胚筛选率为转化率指标，用农杆菌介导法进行遗传转化，对转化的最佳条件进行了初步研究。结果表明：大豆体细胞胚预培养2d，菌液浓度OD600=0．5-0．7，AS浓度为50，100μmol/L，侵染时... 以球形期的大豆体细胞胚为转基因受体，以抗性体细胞胚筛选率为转化率指标，用农杆菌介导法进行遗传转化，对转化的最佳条件进行了初步研究。结果表明：大豆体细胞胚预培养2d，菌液浓度OD600=0．5-0．7，AS浓度为50，100μmol/L，侵染时间10min，共培养时间2-3d有利于提高转化率；对不同筛选代数观察结果表明，转化率在3个月以前较低，而在3个月以后则基本稳定在8％。 展开更多

关键词 大豆 农杆菌介导 体细胞胚 遗传转化

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根癌农杆菌介导白细胞介素-4基因转化甘蓝(Brassica oleracea L.)研究 被引量：2

2

作者 李然红 于丽杰 +1 位作者 陶雷 王雷 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第1期47-53,共7页

利用根癌农杆菌介导法，以白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）基因转化中甘11号甘蓝。本研究对可能影响il-4转化率的外植体类型、外植体的预培养时间、农杆菌的侵染时间以及外植体与农杆菌的共培养时间进行了优化。试验结果表明：il-... 利用根癌农杆菌介导法，以白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）基因转化中甘11号甘蓝。本研究对可能影响il-4转化率的外植体类型、外植体的预培养时间、农杆菌的侵染时间以及外植体与农杆菌的共培养时间进行了优化。试验结果表明：il-4基因对带1-2mm子叶柄的子叶的转化率显著高于下胚轴；带柄子叶在预培养1d、侵染3min、共培养1d时，转化效果最好，转化率达23．3%;下胚轴在预培养1-3d，侵染3～5min，共培养1-2d时，转化效果较好，转化率最高可达13．3％。经PCR检测及PCR-Southem杂交，初步证明目的基因il-4已经转入甘蓝的再生植株。转il-4基因甘蓝的PCR阳性再生植株已经开花并产生了后代。 展开更多

关键词 甘蓝(Brassica OLERACEA L.) il-4基因 转基因 根癌农杆菌介导

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拟南芥钾吸收调控基因AtCIPK23、AtCBL9和AtAKT1农杆菌介导共转化甘蔗 被引量：3

3

作者 樊丽娜 曾巧英 +6 位作者 何慧怡 李昱 罗青文 劳方业 邓海华 李奇伟 齐永文 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期361-366,共6页

本研究通过农杆菌介导方法将拟南芥调控钾离子吸收的三个重要基因At AKT1、At CBL9和At CIPK23共转化到甘蔗品种粤糖00-236中,以期提高甘蔗耐低钾能力。PCR分析结果表明共获得36份携带At CBL9、At CIPK23和At AKT1三个基因的转基因无性... 本研究通过农杆菌介导方法将拟南芥调控钾离子吸收的三个重要基因At AKT1、At CBL9和At CIPK23共转化到甘蔗品种粤糖00-236中,以期提高甘蔗耐低钾能力。PCR分析结果表明共获得36份携带At CBL9、At CIPK23和At AKT1三个基因的转基因无性系;Southern blot分析结果表明外源At CBL9基因在甘蔗基因组中的拷贝数为2~5个;在钾离子浓度为200μmol/L的营养液中进行低钾胁迫试验,转基因品系的根系和地上部的平均钾含量分别比对照高37%和23%,叶片平均相对电导率比对照低6%,说明超表达At CIPK23、At CBL9和At AKT1显著提高了甘蔗耐低钾胁迫能力,降低了因低钾胁迫造成的质膜伤害,是创制耐低钾甘蔗种质的有效途径。 展开更多

关键词 甘蔗 耐低钾 转基因 At CIPK23-At CBL9-At AKT1 农杆菌介导

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大麦β-1,3-葡聚糖酶基因表达载体的构建及其对马铃薯的遗传转化 被引量：6

4

作者 罗小英 侯磊 +1 位作者 李德谋 裴炎 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期1-5,共5页

在获得经大麦白粉病诱导的 β 1 ,3 葡聚糖酶cDNA基因的基础上 ,构建了该基因的植物表达载体 pBinh Glu ,采用农杆菌介导的方法将其转化进入马铃薯 ,获得了经含有卡那霉素的选择培养基筛选的转基因植株 ,通过PCR扩增验证 ,马铃薯基因组... 在获得经大麦白粉病诱导的 β 1 ,3 葡聚糖酶cDNA基因的基础上 ,构建了该基因的植物表达载体 pBinh Glu ,采用农杆菌介导的方法将其转化进入马铃薯 ,获得了经含有卡那霉素的选择培养基筛选的转基因植株 ,通过PCR扩增验证 ,马铃薯基因组中含有大麦的β 1 ,3 葡聚糖酶cDNA基因。 展开更多

关键词 Β-1 3-葡聚糖酶 马铃薯 表达载体构建 农杆菌介导 遗传转化

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农杆菌介导AFP1基因转化小麦获得转基因植株 被引量：5

5

作者 支大英 徐春晖 +3 位作者 薛哲勇 刘庆忠 姜鸿鸣 夏光敏 《山东农业科学》 2004年第3期14-16,19,共4页

以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6... 以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6株,AFP1基因阳性植株分别为1株和4株。 展开更多

关键词 普通小麦 农杆菌介导转化 转基因植株 Rs-AFP1

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农杆菌介导转化甘蓝型油菜大田植株小孢子 被引量：9

6

作者 林良斌 刘雅婷 +2 位作者 董娜 祁永琼 肖关丽 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第5期554-559,共6页

以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号大田植株的小孢子为受体,进行了农杆菌介导转化,PCR检测证明获得了转基因植株。侵染比例为1.0,共培养时间为24 h,植株生长阶段选择(植株再生后),农杆菌介导转化甘蓝型油菜小孢子的频率最高,花油3号为1.21... 以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号大田植株的小孢子为受体,进行了农杆菌介导转化,PCR检测证明获得了转基因植株。侵染比例为1.0,共培养时间为24 h,植株生长阶段选择(植株再生后),农杆菌介导转化甘蓝型油菜小孢子的频率最高,花油3号为1.21株转基因植株/花蕾,湘油15号为0.51株转基因植株/花蕾。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 小孢子 遗传转化

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百脉根高频再生体系的建立及兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的转化 被引量：10

7

作者 唐广立 李传山 +2 位作者 陈明利 张忠品 郭蔼光 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第4期593-600,共8页

以MS为基本培养基,通过调整激素种类与浓度等培养条件,按正交试验设计的原则,建立了百脉根高频再生体系。结果表明MS+2,4-D2.0mg/L+KT2.0mg/L培养基可高效诱导愈伤组织的形成,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基可高效诱导芽的分化,MS+NAA... 以MS为基本培养基,通过调整激素种类与浓度等培养条件,按正交试验设计的原则,建立了百脉根高频再生体系。结果表明MS+2,4-D2.0mg/L+KT2.0mg/L培养基可高效诱导愈伤组织的形成,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基可高效诱导芽的分化,MS+NAA0.1mg/L培养基可快速诱导根的生成,形成再生植株。通过构建植物表达载体VP60-pBI121,研究了根癌农杆菌介导的兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60基因对百脉根遗传转化的影响因素,建立了百脉根快速高效遗传转化体系,结果表明,以农杆菌LBA4404为介导菌株、以下胚轴为外植体,预培养3d,在OD600为0.6的菌夜中浸染20min,共培养3d,以及300mg/L羧苄青霉素脱菌浓度和50mg/L卡那霉素筛选浓度为最佳转化条件。为利用百脉根生产动物口服型疫苗建立了技术基础。 展开更多

关键词 百脉根(Lotus comiculatus Linn) 高频再生体系 兔出血症病毒(RHDV) 转化

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根癌农杆菌介导的甘蔗遗传转化 被引量：3

8

作者 吴转娣 刘新龙 +3 位作者 姚丽 苏火生 张敏 吴才文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期150-155,共6页

综述开展甘蔗基因工程育种工作20多年来,从最初的利用农杆菌介导法研究抗除草剂和抗虫转基因成功,到目前高转化效率的转基因方法应用过程中取得的成果,分析影响农杆菌转化甘蔗的关键因素,并对农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究前景作了展望。

关键词 根癌农杆菌介导法 甘蔗 遗传转化

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农杆菌介导小麦遗传转化影响因素的研究 被引量：3

9

作者 贺杰 胡海燕 +2 位作者 周岩 赵俊杰 魏琦超 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第2期41-44,共4页

选用河南科技学院近年来选育的小麦品种百农160的成熟胚愈伤组织和农杆菌菌株LBA4404,对农杆菌介导遗传转化中农杆菌浓度、感染时间、乙酰丁香酮浓度、头孢霉素质量浓度等几个重要影响因素进行了研究,建立小麦高效转化体系。结果表明,菌... 选用河南科技学院近年来选育的小麦品种百农160的成熟胚愈伤组织和农杆菌菌株LBA4404,对农杆菌介导遗传转化中农杆菌浓度、感染时间、乙酰丁香酮浓度、头孢霉素质量浓度等几个重要影响因素进行了研究,建立小麦高效转化体系。结果表明,菌液OD600=0.6,侵染时间30 min时对愈伤组织的生存和转化最有利;浓度为200μmol/L的乙酰丁香酮可显著提高抗性愈伤再生率;随着头孢霉素浓度的升高,愈伤组织出现褐化,生长缓慢,再生率低,所以在有效抑制农杆菌的浓度范围内,尽量采取较低的质量浓度。在后期的抑菌分化筛选中,在继代培养基中添加头孢霉素的质量浓度为500 mg/L,继代扩增筛选培养2个月,每10～15 d换一次培养基;而在分化培养基中添加200 mg/L头孢霉素,即可获得再生率高的抗性愈伤。最适条件下转化频率达2.36%。 展开更多

关键词 小麦 农杆菌转化 侵染时间 头孢霉素

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农杆菌介导转化油菜中几种影响玻璃化频率的因素 被引量：2

10

作者 张瑞熙 申敏 +1 位作者 殷家明 柴友荣 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期9-13,共5页

在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度... 在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度等.其中,激素6-BA和ZT体积质量分数对诱芽率和玻璃化率都有显著影响,随着体积质量分数的升高,玻璃化率升高,以6-BA体积质量分数为1mg/L,ZT体积质量分数为2mg/L时结果较为理想.蔗糖体积质量分数和琼脂体积质量分数对玻璃化率也有显著影响,当二者体积质量分数升高,玻璃化率降低,同时诱芽率也降低.综合分析,当蔗糖体积质量分数为50g/L,琼脂体积质量分数为10g/L时最适宜.接种密度对玻璃化的发生有显著影响,密度越高,玻璃化倾向越严重,而密度对诱芽率影响不明显.试验结果分析发现,接种密度为20～30个/皿最适宜. 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 农杆菌介导转化 玻璃化

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农杆菌介导的莴笋遗传转化体系初步研究 被引量：1

11

作者 丁建刚 胡定慧 《广西农业科学》 CSCD 2008年第2期123-126,共4页

为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植... 为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植体预培养2d,外植体芽分化率最高;共培养0、1、2d,外植体芽分化率差别不大;当农杆菌菌液OD600值为0.3、0.5,分别侵染1、3、5min,外植体致死率相差不大。因此,在莴笋遗传转化中,采用外植体预培养2d、共培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5、侵染时间5min的遗传转化体系能提高莴笋的遗传转化率。 展开更多

关键词 莴笋 遗传转化 农杆菌介导

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农杆菌介导的莴笋遗传转化体系的初步研究 被引量：1

12

作者 丁建刚 胡定慧 《安徽农学通报》 2008年第4期70-71,共2页

为了建立莴笋高效的遗传转化体系,对农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素进行了研究,结果表明,对莴笋外植体预培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5,侵染5min,共培养2d对莴笋的遗传转化效果较好,初步建立了莴笋遗传转化体系。

关键词 莴笋 遗传转化 农杆菌介导

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伪狂犬病毒gD基因转化马铃薯的初步研究

13

作者 舒曦 彭昶 +1 位作者 王亚琴 胡建广 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2153-2161,共9页

以可直接饲用的马铃薯作为伪狂犬病病毒糖蛋白基因gD的表达植物,探索用马铃薯茎段作为外植体的再生体系和遗传转化体系。结果表明：添加2 mg/L ZT和0.1 mg/L NAA的MS培养基,可使马铃薯茎段愈伤组织诱导率达70%,出芽率达38%;添加0.5 mg/... 以可直接饲用的马铃薯作为伪狂犬病病毒糖蛋白基因gD的表达植物,探索用马铃薯茎段作为外植体的再生体系和遗传转化体系。结果表明：添加2 mg/L ZT和0.1 mg/L NAA的MS培养基,可使马铃薯茎段愈伤组织诱导率达70%,出芽率达38%;添加0.5 mg/L的硝酸银可明显减少愈伤组织在继代过程中的褐化程度,并且促进其分化。在农杆菌的菌液OD600值为0.1-0.2,侵染茎段1 h,共培养3 d的条件下转化效果最好,抗性愈伤率达到52.3%。实验共获得21株转化植株,挑选7株进行RT-PCR检测,结果证明gD基因已被整合到马铃薯基因组中。 展开更多

关键词 马铃薯 伪狂犬病病毒 GD基因 根癌农杆菌介导 遗传转化

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农杆菌介导脂滴包被蛋白基因8-3转化烟草的研究

14

作者 牛伯庆 汪文静 +1 位作者 宋洪英 谢响明 《中国农学通报》 CSCD 2012年第3期240-244,共5页

为开发新的抗菌核病基因,针对抗病相关的脂滴包被蛋白基因8-3,设计了分别带有酶切位点XbaI和BamHI的1对引物,从克隆载体pMD19-T-8-3中扩增到基因8-3,双酶切8-3并连接到植物表达载体pBI121上;将重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tum... 为开发新的抗菌核病基因,针对抗病相关的脂滴包被蛋白基因8-3,设计了分别带有酶切位点XbaI和BamHI的1对引物,从克隆载体pMD19-T-8-3中扩增到基因8-3,双酶切8-3并连接到植物表达载体pBI121上;将重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中,通过其介导将8-3基因转化到烟草中;获得了35株抗性转化株,PCR及测序分析鉴定阳性植株为21株,RT-PCR检测到基因8-3在其中能够表达;通过接种核盘菌和草酸处理试验,表明8-3基因可使烟草提高了草酸耐受水平,从而对菌核病具备一定的抗性。本实验研究了潜在功能基因8-3的抗病性,为植物抗菌核病的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 脂滴包被蛋白 农杆菌介导的转化 转基因烟草 核盘菌 抗性

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农杆菌介导的大豆体细胞胚遗传转化影响因子的研究 被引量：15

15

作者 王晓春 王罡 +2 位作者 季静 王萍 刘尚前 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期21-25,共5页

　用大豆体细胞胚为外植体,以抗性体细胞胚筛选率为转化率的指标,研究了农杆菌介导的大豆体细胞胚遗传转化系统的几种影响因子。结果表明,用球形期的体细胞胚受伤处理作为转基因的受体、预培养1.5天有利于转化;筛选不同的代数,转化率在... 　用大豆体细胞胚为外植体,以抗性体细胞胚筛选率为转化率的指标,研究了农杆菌介导的大豆体细胞胚遗传转化系统的几种影响因子。结果表明,用球形期的体细胞胚受伤处理作为转基因的受体、预培养1.5天有利于转化;筛选不同的代数,转化率在3个月以前明显下降,而在3个月以后则基本稳定在8%左右。 展开更多

关键词 体细胞胚 大豆 农杆菌介导 遗传转化 预培养 外植体 影响因子 受体 筛选 左右

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