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几种外源基因真核表达体系研究进展 被引量：3
1
作者 李成伟 贾孟 +2 位作者 张怡 周庆峰 张红绪 《商丘师范学院学报》 CAS 2008年第9期88-91,共4页
随着分子生物学的飞速发展,进入到后基因组时代后,人们对蛋白质的结构和功能研究越加深入,对蛋白质表达载体的研究也逐渐丰富.本文主要综述了几种常见的真核表达载体以及影响外源基因在这些载体中表达效率的一些因素,旨在对研究者有所启发.
关键词 酵母表达系统 杆状病毒表达系统 哺乳动物细胞表达系统 杜氏盐藻表达系统 转基因植物表达系统
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哺乳动物细胞表达系统研究进展 被引量：1
2
作者 蔡美娜 王佑春 《中国医药生物技术》 2024年第3期254-259,共6页
哺乳动物细胞表达系统具有强大的翻译后修饰功能,表达的重组蛋白更接近人源构象,因此被广泛用于治疗性重组蛋白的生产,其中应用最广泛的是中华仓鼠卵巢细胞。基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等研究的不断深入促进了哺乳动... 哺乳动物细胞表达系统具有强大的翻译后修饰功能,表达的重组蛋白更接近人源构象,因此被广泛用于治疗性重组蛋白的生产,其中应用最广泛的是中华仓鼠卵巢细胞。基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等研究的不断深入促进了哺乳动物细胞表达系统的不断完善。本文立足于哺乳动物细胞表达系统的研究现状,对表达载体的优化、宿主细胞和位点特异性重组等方面的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 重组蛋白 哺乳动物细胞表达系统 中华仓鼠卵巢细胞 UCOE 位点特异性整合
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B型流感病毒血凝素的表达及免疫原性测定 被引量：2
3
作者 杨晨 耿小宇 +2 位作者 原恺 张娟琨 校海霞 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期1112-1123,共12页
B型流感病毒是引起季节性流感的原因之一,严重时会造成重大疾病或死亡。为了检测B型流感病毒2个疫苗候选毒株的血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白胞外段在哺乳动物细胞中的表达及在小鼠体内的免疫原性,本研究将带有三聚体标签的HA胞外段(HA-... B型流感病毒是引起季节性流感的原因之一,严重时会造成重大疾病或死亡。为了检测B型流感病毒2个疫苗候选毒株的血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白胞外段在哺乳动物细胞中的表达及在小鼠体内的免疫原性,本研究将带有三聚体标签的HA胞外段(HA-ectodomain,HA-ecto)序列及神经氨酸酶(neuraminidase,NA)全长编码框经密码子优化后构建至pCAGGS载体中,通过线性聚乙烯亚胺将pCAGGS-HA-ecto与pCAGGS-NA共转染293T细胞。收集转染后96h的上清,通过镍离子亲和层析及分子筛层析获得三聚体形式的HA-ecto蛋白,然后将HA-ecto三聚体蛋白免疫小鼠,进行酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及血凝抑制实验(hemagglutination inhibition,HAI)检测HA-ecto蛋白诱导小鼠后产生的抗体水平。纯化结果显示,通过哺乳动物细胞表达系统能够得到分泌型表达的三聚体HA-ecto蛋白。ELISA及HAI结果显示,三聚体HA-ecto蛋白二次免疫小鼠后,能诱导小鼠产生较高水平的同源和异源交叉抗体。以上结果表明,哺乳动物细胞表达的B型流感病毒HA蛋白可作为亚单位重组流感疫苗的候选。 展开更多
关键词 B型流感病毒 血凝素蛋白 哺乳动物细胞表达系统 疫苗候选毒株
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抗肿瘤人源化抗体药物的研究进展 被引量：2
4
作者 何远 张娟 +1 位作者 李致科 王旻 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1269-1274,共6页
随着单克隆抗体技术的发展,治疗性抗体药物逐渐占据全球市场,主要应用于肿瘤治疗、抗移植排斥、自身免疫性疾病的治疗等。抗体药物可根据人源化程度不同,分为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。本文着眼于目前治疗性抗体药... 随着单克隆抗体技术的发展,治疗性抗体药物逐渐占据全球市场,主要应用于肿瘤治疗、抗移植排斥、自身免疫性疾病的治疗等。抗体药物可根据人源化程度不同,分为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。本文着眼于目前治疗性抗体药物研究热点,聚焦于抗肿瘤人源化抗体药物,结合已上市热点抗肿瘤人源化抗体药物实例,从抗体人源化技术以及人源化抗体生产的角度来阐述目前研究状况。同时,立足于国内外抗肿瘤人源化抗体药物的现状,分析未来发展趋势。 展开更多
关键词 抗肿瘤人源化抗体 人源化技术 动物细胞生产 抗体药物发展
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大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I cDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体系的构建
5
作者 牛勃 王智 +4 位作者 向前 余跃 曾赛英 王明生 李士谔 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 1994年第5期361-365,共5页
观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ｐＳＶ＿２载体的重组质粒ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０５）和ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０７）在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２... 观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ｐＳＶ＿２载体的重组质粒ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０５）和ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０７）在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人肝癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞均能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表达过程及其癌变和分化的关系具有重要的意义。 展开更多
关键词 肝肿瘤 氨甲酰磷酸 合成酶 DNA
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外源基因表达系统的研究进展 被引量：38
6
作者 郭广君 吕素芳 王荣富 《科学技术与工程》 2006年第5期582-587,592,共7页
最近20多年来,随着重组DNA技术的迅速发展,对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入,并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统,它们各有优缺点,在选择时应衡量使用。
关键词 原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统
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外源基因表达系统的研究进展 被引量：13
7
作者 邓春梅 葛玉强 +2 位作者 刘丽 王也 林运鸿 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第19期3744-3746,共3页
随着DNA重组技术的发展,外源基因的表达问题受到越来越多的关注。常用的外源基因表达系统有原核表达系统和真核表达系统,两种表达系统各有优缺点。本文主要对这两类表达系统的研究进展、存在问题等做一概述。
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细胞表达系统
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构建稳定表达病毒相关RNA的真核细胞株及其对抗肿瘤免疫促凋亡分子的影响 被引量：1
8
作者 李昂 伦新新 +3 位作者 陈园坤 杨甜 杨安钢 阎博 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第3期367-371,共5页
目的:构建稳定表达病毒相关RNA(virus-associated RNA,VA RNA)的293F-VA细胞株,并探讨其对靶向HER2阳性肿瘤的免疫促凋亡分子表达水平的影响。方法:采用PCR方法,扩增含VA RNA的功能序列,克隆入Piggy Bac转座系统质粒,将VA RNA编码序列转... 目的:构建稳定表达病毒相关RNA(virus-associated RNA,VA RNA)的293F-VA细胞株,并探讨其对靶向HER2阳性肿瘤的免疫促凋亡分子表达水平的影响。方法:采用PCR方法,扩增含VA RNA的功能序列,克隆入Piggy Bac转座系统质粒,将VA RNA编码序列转入293F细胞中,经过抗性筛选和流式细胞仪鉴定,得到293F-VA细胞株。将萤光素酶、红色荧光蛋白及免疫促凋亡分子编码质粒分别转入293F-VA细胞株或亲本293F细胞株,通过萤光素酶活力检测和Western Blot实验,比较两种细胞株对外源目的蛋白表达水平的影响。结果:成功构建了Piggy Bac-VA质粒。共转染Piggy Bac-VA质粒可以明显提高细胞内Fluc蛋白的表达水平(P <0. 05)。VA RNA编码序列通过Piggy Bac转座系统转入293F细胞中,获得293F-VA细胞株。与293F亲本细胞相比,293F-VA细胞株将萤火虫萤光素酶Fluc蛋白的表达水平提高363. 9%(P<0. 05);对海肾萤光素酶Rluc蛋白及红色荧光蛋白m Cherry的表达均表现出3倍左右的提高(P <0. 05)。293F-VA细胞株不仅能够提高免疫促凋亡分子e23-Fc-Fdt-t Bid在细胞内的表达水平,并且显著增加目的蛋白向细胞外分泌的水平,较293F亲本细胞提高4. 2倍(P <0. 05)。结论:建立了稳定表达VA RNA的细胞株293F-VA,该细胞株能够显著提高抗肿瘤免疫促凋亡分子的表达水平。 展开更多
关键词 病毒相关RNA 哺乳动物细胞蛋白表达系统 293F细胞 肿瘤靶向治疗
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突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化
9
作者 张斯维 程浩 王旻 《药物生物技术》 CAS 2016年第2期95-98,共4页
为增强神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白的稳定性和表达量,以满足晶体学研究的要求。根据同源蛋白的氨基酸序列比对结果,设计了胞内5个切除位点,设计合适的引物,利用分子克隆的方法扩增出相应的改造后c DNA序列并构建到BacMam表达载体,... 为增强神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白的稳定性和表达量,以满足晶体学研究的要求。根据同源蛋白的氨基酸序列比对结果,设计了胞内5个切除位点,设计合适的引物,利用分子克隆的方法扩增出相应的改造后c DNA序列并构建到BacMam表达载体,最后利用BacMam杆状病毒表达系统构建表达突变型重组杆状病毒,并转染到HEK293F哺乳动物细胞中,诱导表达重组蛋白。采用免疫印迹法小规模表达检测后,选取合适突变型进行表达,并利用MBP亲和层析和分子排阻法进行两步纯化后,通过电子显微镜负染技术检测纯化后的蛋白质量。结果显示,成功克隆并表达了乙酰胆碱神经受体α7的5种不同的胞内区域突变型,且蛋白表达量与野生型相比均有所提高,其中P5突变型表达量最高。经表达纯化后,能够获得毫克级别的乙酰胆碱受体蛋白,并且电子显微镜观察的结果表明蛋白呈现出相对稳定的五聚体形貌,大小尺寸与理论相符。 展开更多
关键词 神经型乙酰胆碱受体 BacMam哺乳动物细胞表达 亲和纯化 电子显微镜
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