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稳转oHSV2主要衣壳蛋白VP5人宫颈癌细胞系的构建
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作者 范嘉琦 张慧 +4 位作者 李乐 周芹 汪洋 胡翰 刘滨磊 《湖北工业大学学报》 2024年第4期50-56,共7页
为建立稳定表达溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒主要衣壳蛋白(VP5)的人子宫颈癌HeLa-VP5细胞系,探究VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)的细胞毒性。运用piggyBac转座系统,通过lipofectamine 3000^(TM)脂质体转染法,将pPBDP-UL19和pSPBT质粒转入HeL... 为建立稳定表达溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒主要衣壳蛋白(VP5)的人子宫颈癌HeLa-VP5细胞系,探究VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)的细胞毒性。运用piggyBac转座系统,通过lipofectamine 3000^(TM)脂质体转染法,将pPBDP-UL19和pSPBT质粒转入HeLa细胞,利用嘌呤霉素(Puro)筛选稳定细胞株,用有限稀释法得到单克隆细胞,利用western blot鉴定HeLa-VP5细胞系中VP5蛋白的表达,以及利用流式细胞术检测HeLa-VP5中GFP的表达,最后实时监测法比较改造前后细胞系的生长活性变化。通过嘌呤霉素抗性筛选和有限稀释挑取单克隆,获得3株HeLa-VP5单克隆细胞;western blot鉴定发现3株HeLa-VP5细胞系VP5蛋白均有表达;流式检测单克隆细胞系GFP阳性率均达到99%;活细胞实时监测法检测发现HeLa-VP5细胞系与亲本细胞HeLa细胞具有一致的生长活性。HeLa-VP5稳转细胞系构建成功,作为评估VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)细胞毒性的靶细胞,为揭示oHSV2发挥抗肿瘤作用机制提供理论基础。 展开更多
关键词 溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒 主要衣壳蛋白 稳转细胞系
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斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白抗体的制备 被引量:3
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作者 陈晓艳 何建国 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期841-844,共4页
将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱... 将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用柱层析纯化表达的融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗MCP融合蛋白的血清。用ELISA方法检测抗血清的效价,用Western-blot检测抗血清的特异性。结果显示,获得的抗血清稀释1∶22 000倍时仍呈阳性,并能有效中和OGNNV,实验组的相对存活率达54.50%。这说明,本研究用纯化的MCP融合蛋白制备兔抗OGNNVMCP抗体是成功的,并证实了OGNNV主衣壳蛋白的免疫原性。本研究旨为重组表达主衣壳蛋白基因制备抗OGNNV疫苗提供科学依据,并为进一步研究提供重要的实验材料。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 神经坏死病毒 主衣壳蛋白 抗体
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抗HPV16L1IgY抗体的制备及活性检测 被引量:8
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作者 杨军 张明娟 +3 位作者 强磊 苏宝山 王一理 司履生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期324-327,332,共5页
目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法... 目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性。结果3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1结合。结论采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据。 展开更多
关键词 人头瘤病毒16型 鸡蛋黄 IGY
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