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稳转oHSV2主要衣壳蛋白VP5人宫颈癌细胞系的构建
1
作者
范嘉琦
张慧
+4 位作者
李乐
周芹
汪洋
胡翰
刘滨磊
《湖北工业大学学报》
2024年第4期50-56,共7页
为建立稳定表达溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒主要衣壳蛋白(VP5)的人子宫颈癌HeLa-VP5细胞系,探究VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)的细胞毒性。运用piggyBac转座系统,通过lipofectamine 3000^(TM)脂质体转染法,将pPBDP-UL19和pSPBT质粒转入HeL...
为建立稳定表达溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒主要衣壳蛋白(VP5)的人子宫颈癌HeLa-VP5细胞系,探究VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)的细胞毒性。运用piggyBac转座系统,通过lipofectamine 3000^(TM)脂质体转染法,将pPBDP-UL19和pSPBT质粒转入HeLa细胞,利用嘌呤霉素(Puro)筛选稳定细胞株,用有限稀释法得到单克隆细胞,利用western blot鉴定HeLa-VP5细胞系中VP5蛋白的表达,以及利用流式细胞术检测HeLa-VP5中GFP的表达,最后实时监测法比较改造前后细胞系的生长活性变化。通过嘌呤霉素抗性筛选和有限稀释挑取单克隆,获得3株HeLa-VP5单克隆细胞;western blot鉴定发现3株HeLa-VP5细胞系VP5蛋白均有表达;流式检测单克隆细胞系GFP阳性率均达到99%;活细胞实时监测法检测发现HeLa-VP5细胞系与亲本细胞HeLa细胞具有一致的生长活性。HeLa-VP5稳转细胞系构建成功,作为评估VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)细胞毒性的靶细胞,为揭示oHSV2发挥抗肿瘤作用机制提供理论基础。
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关键词
溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒
主要衣壳蛋白
稳转细胞系
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职称材料
斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白抗体的制备
被引量:
3
2
作者
陈晓艳
何建国
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期841-844,共4页
将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱...
将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用柱层析纯化表达的融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗MCP融合蛋白的血清。用ELISA方法检测抗血清的效价,用Western-blot检测抗血清的特异性。结果显示,获得的抗血清稀释1∶22 000倍时仍呈阳性,并能有效中和OGNNV,实验组的相对存活率达54.50%。这说明,本研究用纯化的MCP融合蛋白制备兔抗OGNNVMCP抗体是成功的,并证实了OGNNV主衣壳蛋白的免疫原性。本研究旨为重组表达主衣壳蛋白基因制备抗OGNNV疫苗提供科学依据,并为进一步研究提供重要的实验材料。
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关键词
斜带石斑鱼
神经坏死病毒
主衣壳蛋白
抗体
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职称材料
抗HPV16L1IgY抗体的制备及活性检测
被引量:
8
3
作者
杨军
张明娟
+3 位作者
强磊
苏宝山
王一理
司履生
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期324-327,332,共5页
目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法...
目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性。结果3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1结合。结论采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据。
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关键词
人头瘤病毒16型
鸡蛋黄
IGY
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职称材料
题名
稳转oHSV2主要衣壳蛋白VP5人宫颈癌细胞系的构建
1
作者
范嘉琦
张慧
李乐
周芹
汪洋
胡翰
刘滨磊
机构
湖北工业大学生物工程与食品学院
出处
《湖北工业大学学报》
2024年第4期50-56,共7页
文摘
为建立稳定表达溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒主要衣壳蛋白(VP5)的人子宫颈癌HeLa-VP5细胞系,探究VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)的细胞毒性。运用piggyBac转座系统,通过lipofectamine 3000^(TM)脂质体转染法,将pPBDP-UL19和pSPBT质粒转入HeLa细胞,利用嘌呤霉素(Puro)筛选稳定细胞株,用有限稀释法得到单克隆细胞,利用western blot鉴定HeLa-VP5细胞系中VP5蛋白的表达,以及利用流式细胞术检测HeLa-VP5中GFP的表达,最后实时监测法比较改造前后细胞系的生长活性变化。通过嘌呤霉素抗性筛选和有限稀释挑取单克隆,获得3株HeLa-VP5单克隆细胞;western blot鉴定发现3株HeLa-VP5细胞系VP5蛋白均有表达;流式检测单克隆细胞系GFP阳性率均达到99%;活细胞实时监测法检测发现HeLa-VP5细胞系与亲本细胞HeLa细胞具有一致的生长活性。HeLa-VP5稳转细胞系构建成功,作为评估VP5蛋白是否调控自然杀伤细胞(NK)细胞毒性的靶细胞,为揭示oHSV2发挥抗肿瘤作用机制提供理论基础。
关键词
溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒
主要衣壳蛋白
稳转细胞系
Keywords
oncolytic
herpes
simplex
virus
typeⅡ
main
capsid
protein
Stable
cell
line
分类号
R153 [医药卫生—营养与食品卫生学]
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职称材料
题名
斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白抗体的制备
被引量:
3
2
作者
陈晓艳
何建国
机构
中山大学生命科学学院
出处
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期841-844,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2003AA603011)
暨南大学校内博士启动基金(51204062)
文摘
将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用柱层析纯化表达的融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗MCP融合蛋白的血清。用ELISA方法检测抗血清的效价,用Western-blot检测抗血清的特异性。结果显示,获得的抗血清稀释1∶22 000倍时仍呈阳性,并能有效中和OGNNV,实验组的相对存活率达54.50%。这说明,本研究用纯化的MCP融合蛋白制备兔抗OGNNVMCP抗体是成功的,并证实了OGNNV主衣壳蛋白的免疫原性。本研究旨为重组表达主衣壳蛋白基因制备抗OGNNV疫苗提供科学依据,并为进一步研究提供重要的实验材料。
关键词
斜带石斑鱼
神经坏死病毒
主衣壳蛋白
抗体
Keywords
orange-spotted
grouper
nervous
necrosis
virus
main
capsid
protein
antibodies
分类号
S943.334 [农业科学—水产养殖]
下载PDF
职称材料
题名
抗HPV16L1IgY抗体的制备及活性检测
被引量:
8
3
作者
杨军
张明娟
强磊
苏宝山
王一理
司履生
机构
西安交通大学医学院第二附属医院病理科
西安交通大学心内科
生物医学信息工程教育部重点实验室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期324-327,332,共5页
基金
国家自然科学基金(30300305)~~
文摘
目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性。结果3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1结合。结论采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据。
关键词
人头瘤病毒16型
鸡蛋黄
IGY
Keywords
human
papillomavirus
16
type
L1
main
capsid
protein
egg
yolk
IgY
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳转oHSV2主要衣壳蛋白VP5人宫颈癌细胞系的构建
范嘉琦
张慧
李乐
周芹
汪洋
胡翰
刘滨磊
《湖北工业大学学报》
2024
0
下载PDF
职称材料
2
斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白抗体的制备
陈晓艳
何建国
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
下载PDF
职称材料
3
抗HPV16L1IgY抗体的制备及活性检测
杨军
张明娟
强磊
苏宝山
王一理
司履生
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
8
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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