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基于磁珠的细菌基因组DNA快速提取方法 被引量：8
1
作者 高秋月 景奉香 +3 位作者 李海燕 陈季武 金庆辉 赵建龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第21期11071-11074,共4页
[目的]为临床上大肠杆菌O157∶H7的快速检测提供参考。[方法]依据高盐离子浓度下多聚核苷酸与羧基修饰的磁珠表面可发生非特异性吸附,而蛋白、单糖、多糖和脂类等细胞成分不被吸附的原理,建立了一种以磁性微珠为载体的细菌基因组DNA纯... [目的]为临床上大肠杆菌O157∶H7的快速检测提供参考。[方法]依据高盐离子浓度下多聚核苷酸与羧基修饰的磁珠表面可发生非特异性吸附,而蛋白、单糖、多糖和脂类等细胞成分不被吸附的原理,建立了一种以磁性微珠为载体的细菌基因组DNA纯化方法—磁性DNA纯化法。[结果]该方法可在7min内完成对大肠杆菌O157∶H7基因组DNA的高效富集与纯化;与德国进口同类试剂盒gene-MAG-DNA/Bacteria及AxyPrep细菌基因组DNA纯化试剂盒相比,该方法操作简单、耗时短、不需要使用离心机和有机试剂,且无需常规快速提取法的沸水浴等步骤,安全、快速、成本低,在临床、食品、环境病原体快速检测领域具有巨大的推广价值。[结论]该研究成功建立了一种细菌基因组DNA的快速提取方法。 展开更多
关键词 磁珠 DNA纯化 大肠杆菌O157∶H7
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DNA计算机原理、进展及难点(V):DNA分子的固定技术 被引量：3
2
作者 许进 李菲 《计算机学报》 EI CSCD 北大核心 2009年第12期2283-2299,共17页
在DNA计算机的研制中,DNA分子的固定是首先需要处理的一个最为基本的技术问题.事实上,DNA分子的固定技术不仅是生物计算的一个基本技术,而且是整个基因工程、生物芯片、甚至某些疾病诊疗的基础.基于此,文中将对DNA分子的固定技术给予较... 在DNA计算机的研制中,DNA分子的固定是首先需要处理的一个最为基本的技术问题.事实上,DNA分子的固定技术不仅是生物计算的一个基本技术,而且是整个基因工程、生物芯片、甚至某些疾病诊疗的基础.基于此,文中将对DNA分子的固定技术给予较为系统的研讨,包括基本原理、具体方法等.文中引入了"DNA分子固定系统"的结构体系,并对该结构体系中载体子系统、固定剂子系统、标记子系统这3个主要子系统进行了详细的论述. 展开更多
关键词 DNA计算机 DNA固定技术 固定系统 固定剂 载体 分子标记 磁珠分离技术 AcrditeTM技术
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不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究 被引量：2
3
作者 李文娇 阎俊 +2 位作者 杜娟 黄天娇 卢瑛 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 2017年第6期853-857,共5页
本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量... 本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量明显高于磁珠B。此外,免疫磁珠A对抗原的结合率和洗脱率分别为免疫磁珠B的1.5、1.8倍;免疫磁珠A对过敏原捕获率为47.9%,而免疫磁珠B仅为17.6%。对比两种磁珠的理化及其结构特点,发现粒径大、分散性差的磁珠在偶联过程会发生聚集,降低抗体偶联效率,从而影响纯化效果。结果显示,分散性好、抗体偶联率高的磁珠更适宜蛋白质的分离纯化。本研究为以后过敏原的纯化提供了一定的理论基础与实验依据。 展开更多
关键词 磁珠 过敏原纯化 原肌球蛋白 免疫磁分离技术
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融合蛋白Trx-T4 DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用 被引量：2
4
作者 付大伟 陈启蒙 徐伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期83-89,96,共8页
构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%... 构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Transetta(DE3)(p NBEVII-T4 DL)诱导表达的可溶性融合蛋白Trx-T4 DL的产量最多,经诱导培养条件优化后,Trx-T4 DL的可溶性大幅度提高,确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50 m L/250 m L、接种量2‰、p H7。分别用镍柱和Mag Ni磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Trx-T4 DL,结果显示后者纯化效率更高,最终获得的融合蛋白浓度为1700.462 mg/L。与其他公司T4 DL活性进行比较,检测其酶活性约为500 U/μL,并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中,为融合蛋白Trx-T4 DL的生产及应用提供理论基础。 展开更多
关键词 T4DNA连接酶 融合标签 自诱导 磁珠法 纯化 低背景克隆载体 连接
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小鼠核糖核酸酶抑制剂异源高效可溶性表达、纯化及活性研究
5
作者 付大伟 孙莹莹 徐伟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第10期174-178,183,共6页
为获得高效可溶性表达的小鼠核糖核酸酶抑制剂(MRNI),本文通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,利用MagNi磁珠检测及电泳分析MRNI... 为获得高效可溶性表达的小鼠核糖核酸酶抑制剂(MRNI),本文通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,利用MagNi磁珠检测及电泳分析MRNI的表达状况,并对其培养温度及时间进行优化,同时,与其他公司核糖核酸酶抑制剂(RI)活性进行对比。结果表明,重组菌BL21(DE3)(pNBEII-MRNI)诱导表达的可溶性融合蛋白IF2-MRNI的产量最高,最适诱导条件为37℃,诱导培养6 h,20℃培养24 h。磁珠纯化后获得的融合蛋白IF2-MRNI浓度为3621.3 mg/L,检测其酶活性约为40 U/μL。该酶具有抑制RNase A活性,防止RNA被降解的作用,为RI的生产及应用提供理论基础。 展开更多
关键词 核糖核酸酶抑制剂 融合标签 诱导表达 磁珠纯化
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基于双富集微流控技术的食品中蜡样芽孢杆菌快速检测
6
作者 唐璎 周春红 +3 位作者 杨晓楠 黄佳 邓展瑞 马婷婷 《中国测试》 CAS 北大核心 2023年第11期53-59,90,共8页
为实现食源性致病菌多场景即时检验,替换常规检验及快检技术中耗时的增菌培养过程,以缩短检验时间和降低实验环境及设备要求。研究以蜡样芽孢杆菌为研究对象,采用双层膜富集样品中菌体,磁珠提取纯化微量DNA的方式,取代增菌培养过程,同... 为实现食源性致病菌多场景即时检验,替换常规检验及快检技术中耗时的增菌培养过程,以缩短检验时间和降低实验环境及设备要求。研究以蜡样芽孢杆菌为研究对象,采用双层膜富集样品中菌体,磁珠提取纯化微量DNA的方式,取代增菌培养过程,同时将环介导等温扩增反应与微流控芯片相结合,有效避免扩增中气溶胶污染问题。实验结果显示:使用双富集微流控技术检测食品中蜡样芽孢杆菌,可将现行国标的检验时间由5~7 d缩短至1 h内,方法特异性良好,检出限为10 CFU/g(mL)等同于现行国标,Ct值变异系数<5%,显示重复性好。研究建立的双富集微流控技术快速检测食品中蜡样芽孢杆菌方法可实现食源性致病菌即时快速检验,为食源性致病菌引起的食品安全事件和舆情风险防控快速反应提供技术支撑。 展开更多
关键词 食源性致病菌快检 蜡样芽孢杆菌 膜富集 磁珠纯化DNA 环介导等温扩增 微流控芯片
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应用磁珠免疫亲和层析法从猪卵泡液中提纯抑制素 被引量：1
7
作者 张红琳 杨利国 王诚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期72-75,共4页
采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一... 采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一条相对分子质量为 32 0 0 0的带 ,SDS PAGE电泳分析发现有两条相对分子质量分别为 14 0 0 0～ 15 0 0 0和 170 0 0～ 180 0 0的带 ,即β、α亚基。 展开更多
关键词 猪 卵泡液 抑制素 磁珠免疫亲和层析 纯化
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氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量 被引量：1
8
作者 朱传红 郑道利 +4 位作者 倪尧志 王海生 宁平 方慧 刘艳 《法医学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期188-190,共3页
目的探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法 10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30min、1h、3h、6h、12h、24h共6个实验组,并采用... 目的探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法 10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30min、1h、3h、6h、12h、24h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。 展开更多
关键词 法医遗传学 氨基比林预试验 磁珠法 QIAcube DNA纯化法 Chelex-100法
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