广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响 被引量：12

1

作者 王萌皓 郝正祺 +3 位作者 常明昌 孟俊龙 刘靖宇 冯翠萍 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期907-916,共10页

确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。... 确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。用筛选出的β-D-葡聚糖浓度作用巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.71h,再用含有β-D-葡聚糖的细胞培养液培养。收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量;提取细胞内总RNA,采用RT-PCR测定巨噬细胞TLR4 mRNA表达量;提取巨噬细胞总蛋白,采用蛋白免疫印迹western blot测定TLR4的蛋白表达。广叶绣球菌β-D-葡聚糖能够促进巨噬细胞RAW264.7增殖,增加NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量,提高TLR4 mRNA表达和蛋白表达,差异极显著(P<0.01)。TLR4抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量明显下降,差异极显著(P<0.01)。TLR2抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量下降,但差异不显著。广叶绣球菌β-D-葡聚糖可以通过细胞表面受体TLR4激活信号转导通路,增强下游细胞因子的释放,从而调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。TLR2可能不是广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫受体。 展开更多

关键词 广叶绣球菌β-D-葡聚糖 巨噬细胞raw264.7 免疫受体 TLR4抗体 TLR2抗体

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桂皮醛通过下调mPGES-1和COX-2抑制IL-1β诱导的RAW264.7细胞PGE_2分泌 被引量：11

2

作者 张畅斌 李沧海 +6 位作者 隋峰 陆茵 李兰芳 郭淑英 杨娜 耿代涛 姜廷良 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1274-1278,共5页

目的:在明确桂皮醛通过下调COX-2抑制PGE2生成的基础上,进一步探讨其抑制PGE2生成的机制。方法:采用IL-1β刺激的方法,构建炎症模型,并用ELISA法检测PGE2的分泌量,用Real-time PCR法检测mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,用Western blotting... 目的:在明确桂皮醛通过下调COX-2抑制PGE2生成的基础上,进一步探讨其抑制PGE2生成的机制。方法:采用IL-1β刺激的方法,构建炎症模型,并用ELISA法检测PGE2的分泌量,用Real-time PCR法检测mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,用Western blotting法检测mPGES-1蛋白,以观测桂皮醛对上述指标的影响。结果:桂皮醛能显著抑制PGE2的分泌,同时,也能显著下调mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,及mPGES-1蛋白的表达。结论:桂皮醛对RAW264.7细胞PGE2生成的影响,除通过对COX-2的抑制作用外,也要归因于其对mPGES-1的抑制作用。 展开更多

关键词 桂皮醛 前列腺素E2 前列腺素合酶 环氧化酶 raw264.7 IL-1Β

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广叶绣球菌水溶性多糖结构表征及其对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响 被引量：10

3

作者 谢添 郝正祺 +3 位作者 常明昌 孟俊龙 刘靖宇 冯翠萍 《山西农业科学》 2021年第2期150-155,共6页

试验采用超声波辅助水提醇沉法结合DEAE-52和Sephadex G-100柱从广叶绣球菌子实体中提取纯化得到水溶性多糖组分SLP-a和SLP-b,之后运用高效凝胶渗透色谱法和离子色谱法分析SLP-a和SLP-b分子质量及单糖组成,以傅里叶红外色谱法、扫描电... 试验采用超声波辅助水提醇沉法结合DEAE-52和Sephadex G-100柱从广叶绣球菌子实体中提取纯化得到水溶性多糖组分SLP-a和SLP-b,之后运用高效凝胶渗透色谱法和离子色谱法分析SLP-a和SLP-b分子质量及单糖组成,以傅里叶红外色谱法、扫描电镜和原子力显微镜对SLP-a和SLP-b红外光谱特征和形貌特征进行结构表征,最后通过噻唑兰比色法(MTT)研究SLP-a和SLP-b对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响。结果表明,SLP-a和SLP-b分子质量分别为6346 u~125 ku和217 u~196 ku;SLP-a由摩尔比为64∶1∶19的果糖、木糖、甘露糖组成,SLP-b由摩尔比为12∶1∶6∶3的葡萄糖、木糖、半乳糖、甘露糖组成;SLP-a分子呈现为少分支及单链状构象,SLP-b分子呈现为球形及大小不一短链构象;SLP-a和SLP-b表观均为簇状堆积,交织,结构规律性不强,具有一定粗糙、紧密、集中的网状结构;SLP-a与SLP-b均能促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,具有潜在的免疫调节能力。 展开更多

关键词 广叶绣球菌 水溶性多糖 分离纯化 高效凝胶渗透色谱法 离子色谱法 结构表征 巨噬细胞raw264.7

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恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探 被引量：9

4

作者 热孜亚木.吾甫尔 李月红 海力茜.陶尔大洪 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期15-20,共6页

初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多... 初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素-6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNF-α及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。 展开更多

关键词 恰麻古 多糖 巨噬细胞raw264.7 免疫调节

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苦瓜挥发油超临界二氧化碳萃取工艺优化及其抗炎活性研究 被引量：8

5

作者 王靖 刘东波 张志旭 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第4期153-158,共6页

本文研究了苦瓜挥发油的超临界CO_2萃取工艺、分析了挥发油的成分及其对炎症因子一氧化氮(NO)释放的影响。以苦瓜挥发油得率为评价指标,用响应面分析法研究了CO_2流体的萃取压力、萃取温度、萃取时间在萃取苦瓜挥发油过程的影响;用气相... 本文研究了苦瓜挥发油的超临界CO_2萃取工艺、分析了挥发油的成分及其对炎症因子一氧化氮(NO)释放的影响。以苦瓜挥发油得率为评价指标,用响应面分析法研究了CO_2流体的萃取压力、萃取温度、萃取时间在萃取苦瓜挥发油过程的影响;用气相色谱-质谱(GC-MS)分析挥发油的成分;用格里斯试剂比色法评价了苦瓜挥发油对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放NO水平的影响。结果表明:苦瓜挥发油最优得率条件是:萃取压力27 MPa,萃取温度50℃,萃取时间90 min,此条件下苦瓜挥发油得率为2.56%。GC-MS分析结果显示苦瓜挥发油的主要成分为酚类、酯类、烯烃及烷烃类等成分,其中酚类含量最高,相对百分含量达到了67.33%。抗炎分析结果表明苦瓜挥发油能够抑制LPS诱导的小鼠264.7巨噬细胞释放炎症因子NO,并且呈浓度依懒型。综上,超临界CO_2萃取技术科高效萃取苦瓜挥发油,挥发油主要成分为酚类,能够抑制LPS诱导的巨噬细胞释放NO。 展开更多

关键词 苦瓜 挥发油 超临界CO2 巨噬细胞raw264.7

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水芹多糖的提取及其对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的初步研究 被引量：4

6

作者 程雷 崔明晓 +1 位作者 刘可玉 刘克海 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期79-85,共7页

多糖是水芹中重要功能性成分,其分离和活性的相关研究尚未报道。该研究基于超声波辅助法从水芹中成功分离获得功能性多糖成分——水芹多糖(Oenanthe javanica polysaccharide,OJP),利用响应面法优化了OJP的分离条件,并考察了OJP对巨噬细... 多糖是水芹中重要功能性成分,其分离和活性的相关研究尚未报道。该研究基于超声波辅助法从水芹中成功分离获得功能性多糖成分——水芹多糖(Oenanthe javanica polysaccharide,OJP),利用响应面法优化了OJP的分离条件,并考察了OJP对巨噬细胞RAW264.7的激活作用。响应面优化结果显示,OJP最佳分离条件为超声温度83.6℃、超声时间51 min、料液比1∶29.7(g∶mL),提取率为13.81%。单糖组成结果显示OJP由阿拉伯糖(29.94%)、半乳糖(52.48%)、葡萄糖(11.32%)以及微量木糖(2.22%)、半乳糖醛酸(3.5%)和葡萄糖醛酸(0.53%)组成。细胞实验结果表明,OJP可促进RAW264.7巨噬细胞增殖及NO产生并增强RAW264.7细胞的吞噬能力。该研究为OJP的开发与应用提供了实验基础。 展开更多

关键词 水芹 多糖 响应面法 单糖组成 巨噬细胞raw264.7

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不同剂量异鼠李素对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响及其机制探讨 被引量：7

7

作者 王科 庞辉 +5 位作者 梁春梅 罗创才 黄海珠 周玉权 吴青燕 韦娇 《山东医药》 CAS 2018年第39期48-51,共4页

目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期RAW264. 7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/m L脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/m... 目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期RAW264. 7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/m L脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/m L)的溶液,模型组加入含10μg/m L LPS的1640培养基(含10%FBS),对照组加入含10%溶剂对照的1640完全培养基。测算各组细胞增殖指数,检测各组一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果与对照组比较,模型组细胞12、24、36、48 h细胞增殖指数增加(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组24、36 h及中剂量组和高剂量组12、24、36、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组24 h及高剂量组24、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05)。与对照组比较,模型组NO、TNF-α水平升高(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组NO水平及中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05)。结论 ISO可抑制RAW 264. 7细胞增殖能力,且呈剂量依赖性,高剂量作用最大;机制可能与抑制NO、TNF-α有关。 展开更多

关键词 异鼠李素 炎症损伤 巨噬细胞raw264.7 细胞增殖能力 一氧化氮 肿瘤坏死因子

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不同食用菌多糖复配物对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用 被引量：7

8

作者 谌淑平 李明智 +6 位作者 董楠 徐德昌 陈晓敏 胡婕伦 钟虹光 尧梅香 聂少平 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第17期366-372,共7页

目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖(Tremella fuciformis polysaccharide)、茯苓多糖(Poriacocos polysaccharide)、香菇多糖(Lentinan)、猴头菇多糖(Hericium edodes polysaccharide)和竹荪多糖(Dictyophora indusiata polysacchari... 目的:探究5种食用菌多糖,包括银耳多糖(Tremella fuciformis polysaccharide)、茯苓多糖(Poriacocos polysaccharide)、香菇多糖(Lentinan)、猴头菇多糖(Hericium edodes polysaccharide)和竹荪多糖(Dictyophora indusiata polysaccharide)任意3种多糖复配得到的多糖复配物的免疫调节活性。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的复配物对巨噬细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法测定复配物处理后细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,以及流式细胞仪分析复配物处理后细胞吞噬能力。结果:与正常对照组相比,除了浓度为320μg/mL的茯苓多糖、香菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物,茯苓多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物以及香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖的多糖复配物外,在检测浓度范围内10种多糖复配物可明显促进巨噬细胞的增殖,增强吞噬能力,提高细胞因子TNF-α的分泌量。其中,10μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和竹荪多糖的复配物促进巨噬细胞增殖的效果最佳,160μg/mL的银耳多糖、茯苓多糖和香菇多糖的复配物能最好的促进TNF-α的分泌和增强RAW264.7的吞噬能力。结论:不同食用菌多糖的复配物均可调节巨噬细胞RAW264.7的免疫活性。本结果可为开发免疫调节功能的食用菌复配多糖产品提供数据参考。 展开更多

关键词 食用菌 多糖 复配 raw264.7巨噬细胞 免疫调节

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日本黄姑鱼鱼皮免疫活性肽的酶解制备工艺研究 被引量：6

9

作者 董晓泽 徐书敏 +5 位作者 王丽君 赵越 王世光 唐云平 余方苗 丁国芳 《浙江海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第2期110-116,共7页

为研究日本黄姑鱼鱼皮免疫活性肽酶解工艺,以日本黄姑鱼鱼皮为原料,以小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的相对增殖率为评价指标,筛选最优酶种并考察pH、温度、时间、加酶量、液料比对小鼠巨噬细胞RAW264.7相对增殖率的影响。再经单因素实验,响... 为研究日本黄姑鱼鱼皮免疫活性肽酶解工艺,以日本黄姑鱼鱼皮为原料,以小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的相对增殖率为评价指标,筛选最优酶种并考察pH、温度、时间、加酶量、液料比对小鼠巨噬细胞RAW264.7相对增殖率的影响。再经单因素实验,响应面分析法对其酶解工艺进行优化。结果表明,最优酶种和酶解条件为中性蛋白酶,pH 7.0,温度45.5℃,时间5.5 h,加酶量1500 U·g^-1,液料比10:1(mL·g^-1),所得酶解产物作用于RAW 264.7的相对增殖率为57.47%。本研究为日本黄姑鱼鱼皮的高附加值利用提供依据。 展开更多

关键词 日本黄姑鱼鱼皮 免疫活性肽 小鼠巨噬细胞raw264.7 响应面实验

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5种食用菌水提物生物活性的比较 被引量：2

10

作者 韩明月 李俐 +7 位作者 郝利民 王小龙 江庆伍 李雪 刘可可 刘永奇 伊娟娟 鲁吉珂 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期146-154,共9页

目的:探究并对比草菇、灰树花、红菇、鸡腿菇、树舌5种食用菌水提物的抗氧化、免疫及辐射防护作用,为食用菌的开发利用提供理论依据。方法:采用苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、福林-酚法及氯化铝法分别检测5种食用菌水提物中总糖和粗多糖、... 目的:探究并对比草菇、灰树花、红菇、鸡腿菇、树舌5种食用菌水提物的抗氧化、免疫及辐射防护作用,为食用菌的开发利用提供理论依据。方法:采用苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、福林-酚法及氯化铝法分别检测5种食用菌水提物中总糖和粗多糖、总蛋白、总酚、总黄酮的质量分数;以2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二胺盐(2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力、2,2-联苯基-1-苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、羟自由基清除能力、总还原力4种抗氧化活性指标研究食用菌水提物的体外抗氧化能力;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测食用菌水提物对巨噬细胞RAW264.7的促增殖活性;并以60Coγ辐射氧化损伤小鼠肝细胞AML-12为模型,探究5种食用菌水提物的体外辐射防护作用。结果:草菇、灰树花、红菇、鸡腿菇、树舌5种食用菌水提物的主要成分中总糖含量占比最高,相应的总糖质量分数分别为(80.90±1.20)%、(67.00±2.48)%、(55.31±0.55)%、(84.87±7.31)%和(58.19±1.50)%。粗多糖质量分数结果显示,灰树花提取物粗多糖含量最高,其粗多糖质量分数为(61.28±2.95)%。5种食用菌水提物均具有良好的抗氧化能力,其中树舌水提物的抗氧化活性最佳。此外,不同质量浓度(10~200μg/mL)的5种食用菌水提物均能一定程度促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,相比之下,低质量浓度树舌水提物对巨噬细胞的增殖促进作用更显著。体外辐射防护作用结果表明,在实验质量浓度范围内(10~200μg/mL),草菇水提物对60Coγ辐射所致的AML-12细胞存活率下降具有明显的改善作用,而树舌水提物在低质量浓度时也同样具有显著的辐射防护作用。结论:5种食用菌水提物具有不同的生物活性,综合比较树舌水提物的抗氧化活性、免疫调节作用和抗辐射功能均较好,� 展开更多

关键词 食用菌水提物 抗氧化活性 巨噬细胞raw264.7 免疫调节 肝细胞AML-12 抗辐射活性

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刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响研究 被引量：6

11

作者 韩曾姣 贺家勇 常军民 《新疆医科大学学报》 CAS 2017年第3期361-365,共5页

目的探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法以正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7为正常对照组,小鼠巨噬细胞加入1 mg/mL脂多糖(LPS)为LPS组,采用刺糖精多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用巨噬细胞RAW264.7 ... 目的探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法以正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7为正常对照组,小鼠巨噬细胞加入1 mg/mL脂多糖(LPS)为LPS组,采用刺糖精多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用巨噬细胞RAW264.7 24h和48h为实验组,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖。以刺糖精多糖及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24、48h,收集细胞培养上清液,用Griess试剂盒检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)含量。采用中性红吞噬实验检测吞噬活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测刺糖精多糖不同浓度(12.5、25、50、100、200μg/mL)及不同作用时间(24h和48h)培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7作用24、48h后,与空白对照组比较,质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖和1mg/mL LPS作用于巨噬细胞RAW264.7 24h和48h后,NO生成量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。当多糖质量浓度为100、200μg/mL时,NO生成量高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。在一定浓度范围,多糖作用巨噬细胞后NO的生成量随刺糖精多糖浓度的增加而增加,线性回归方程为:Y=0.0108 X+0.0777,R2=0.997。刺糖精多糖浓度在12.5、25、50、100、200μg/mL时,能明显地增强RAW264.7细胞的吞噬能力(P<0.05),且刺糖精多糖促进细胞吞噬的能力明显强于LPS(P<0.05)。刺糖精多糖各剂量组能刺激小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子TNF-α,并随着刺糖精多糖剂量的增加,TNF-α的分泌量逐渐升高。除正常对照组外,各组48h时TNF-α的含量高于24h。结论不同浓度的刺糖精多糖和LPS作用巨噬细胞RAW264.7后,刺糖精多糖能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖和吞噬功能及其产生NO,分泌TNF-α呈剂量相关性,对其免疫活性起� 展开更多

关键词 刺糖 多糖 巨噬细胞raw264.7 免疫活性

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文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响

12

作者 冯嫣 《粮食与油脂》 北大核心 2024年第2期141-143,154,共4页

通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子... 通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。 展开更多

关键词 文冠果叶黄酮 巨噬细胞raw264.7 细胞因子 TLR2受体

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TLR4抗体对姬松茸多糖作用巨噬细胞产生细胞因子的影响 被引量：6

13

作者 李晨光 冯翠萍 +2 位作者 常明昌 孟俊龙 欧阳玉倩 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期490-494,共5页

目的研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子--α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法相同浓度ABPS及脂多糖(LPS,阳性对照... 目的研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子--α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法相同浓度ABPS及脂多糖(LPS,阳性对照)作用巨噬细胞RAW264.7 3 h、6 h、12 h、18 h和36 h;不同浓度ABPS及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h;TLR4抗体作用巨噬细胞RAW264.7 1 h后,更换含有ABPS和LPS的细胞培养液作用24h。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量。结果 ABPS作用巨噬细胞RWA264.7 24 h后,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β含量明显高于阴性对照,差异有统计学意义(P<0.01),但显著低于LPS组。在一定浓度范围内,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量随ABPS浓度增大而增大,浓度为1000μg/ml时IL-1β、TNF-α、IFN-β含量达到最大。TLR4抗体处理的巨噬细胞RAW264.7经ABPS和LPS作用,IL-1β、TNF-α、IFN-β含量低于未处理组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TLR4抗体能够一定程度抑制ABPS作用巨噬细胞RAW264.7产生IL-1β、TNF-α、IFN-β,推测ABPS可能通过TLR4受体信号转导通路影响三种细胞因子的释放。 展开更多

关键词 巴氏蘑菇多糖 巨噬细胞raw264.7 TLR4抗体 细胞因子

原文传递

谷氨酰胺对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞凋亡的调控作用 被引量：2

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作者 安琪 于嘉霖 +1 位作者 吴晓玲 邓光存 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期3054-3063,共10页

旨在探讨谷氨酰胺在牛分枝杆菌卡介苗(Bacille Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染巨噬细胞过程中对凋亡的调控作用。本文采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,首先建立了BCG感染致细胞凋亡的细胞模型,采用Western blotting检测凋亡关键因子的... 旨在探讨谷氨酰胺在牛分枝杆菌卡介苗(Bacille Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染巨噬细胞过程中对凋亡的调控作用。本文采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,首先建立了BCG感染致细胞凋亡的细胞模型,采用Western blotting检测凋亡关键因子的表达变化,确定最佳感染条件;进而利用无谷氨酰胺培养基构建谷氨酰胺剥夺模型并结合BCG感染,采用ELISA、免疫印迹、免疫荧光和流式细胞术等技术检测了细胞内谷氨酰胺关键代谢指标的差异变化。通过上述研究,阐明谷氨酰胺对BCG诱导的巨噬细胞凋亡的调控作用,并初步探讨其机制。结果表明,BCG感染显著上调了小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中Caspase 3和PARP的蛋白表达(P<0.001),最佳感染时间为12 h,最佳感染复数为10 MOI,同时BCG感染促进了RAW264.7细胞内谷氨酰胺的分解代谢。剥夺谷氨酰胺后能极显著降低BCG感染后巨噬细胞中谷氨酸(P<0.001)和谷胱甘肽(P<0.01)的含量,极显著增加了细胞内ROS的含量(P<0.001)。同时,抑制谷氨酰胺代谢促进了RAW264.7细胞内促凋亡蛋白Caspase 3、PARP、Cytc和Bax的表达(P<0.001),极显著下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.001)。综上表明,在BCG感染RAW264.7细胞的过程中,抑制谷氨酰胺代谢可以降低细胞内谷胱甘肽的含量,造成ROS的累积,进而通过内源性途径促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 BCG 谷氨酰胺 巨噬细胞raw264.7 细胞凋亡

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刺糖多糖调控Toll样受体4对免疫抑制活性的影响

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作者 吕志远 宋建忠 +3 位作者 曲真真 李进发 李改茹 常军民 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1393-1400,1384,共9页

揭示刺糖多糖对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的调控机制。构建C57BL/6J免疫抑制小鼠模型及TAK-242抑制剂诱导的RAW 264.7模型,小鼠模型给予刺糖多糖组800 mg/kg以及RAW 264.7模型给予不同浓度的刺糖多糖(25、50、75、100μg/... 揭示刺糖多糖对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的调控机制。构建C57BL/6J免疫抑制小鼠模型及TAK-242抑制剂诱导的RAW 264.7模型,小鼠模型给予刺糖多糖组800 mg/kg以及RAW 264.7模型给予不同浓度的刺糖多糖(25、50、75、100μg/mL)进行干预。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别测定小鼠血清中细胞因子、RAW 264.7细胞因子分泌水平。蛋白免疫印迹(Western blot)与实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法检测TLR4和髓样分化因子88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)与肿瘤坏死因子相关的分子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)在相关组织和细胞中的表达。结果表明刺糖多糖显著提高了免疫抑制小鼠的脾脏指数、胸腺指数,以及血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)和免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)的含量。在TAK-242抑制剂诱导的细胞模型中,刺糖多糖增加了白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、TNF-α、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的分泌。此外,刺糖多糖逆转了TLR4和MyD88/TRAF6的表达下调。刺糖多糖可以通过调节MyD88途径激活TLR4受体的免疫应答。 展开更多

关键词 刺糖多糖 TOLL样受体4 巨噬细胞raw 264.7 免疫抑制

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脂肪分化相关蛋白2对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞自噬的调控作用 被引量：1

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作者 王崇年 于嘉霖 +2 位作者 宫照乾 吴晓玲 邓光存 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2134-2146,共13页

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞RAW264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、... 本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞RAW264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光等技术,检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化。结果显示:BCG感染显著上调巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达(P<0.05),极显著上调自噬相关蛋白ATG5(P<0.01)、ATG12(P<0.001)及LC3(P<0.001)的表达,并伴随着细胞内中性脂质的蓄积。敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中自噬相关蛋白ATG5(P<0.05)和ATG12(P<0.05)显著下调以及LC3(P<0.001)极显著下调,细胞自噬率极显著降低(P<0.001),并极显著降低细胞内中性脂质的含量(P<0.001)。同时,敲减PLIN2显著下调CHOP(P<0.05),并极显著下调ATF4(P<0.001)内质网应激相关蛋白表达,细胞内Ca^(2+)浓度极显著降低(P<0.001)。此外,利用内质网应激激动剂Tunicamycin持续激活内质网应激通路后,无论是否敲减PLIN2,BCG感染的巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异(P>0.05)。BCG感染巨噬细胞上调了PLIN2的表达,而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量,进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网应激信号通路,诱导细胞自噬发生。 展开更多

关键词 PLIN2 BCG 小鼠巨噬细胞raw264.7 内质网应激 细胞自噬

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丹皮酚通过TLR4/MAPK/NF-κB通路对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用 被引量：1

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作者 刘玉龙 孙敏 +1 位作者 刘科 颜贵明 《海南医学院学报》 CAS 2023年第3期183-189,197,共8页

目的:探讨丹皮酚对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞炎症损伤的保护作用及其机制研究。方法:培养巨噬细胞RAW264.7,并分成空白组、LPS(1μg/mL)组、丹皮酚(240μmol/mL)组和TAK242(10μmol/mL)组。采用CCK8法检测细胞活性,倒置显微镜观察... 目的:探讨丹皮酚对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞炎症损伤的保护作用及其机制研究。方法:培养巨噬细胞RAW264.7,并分成空白组、LPS(1μg/mL)组、丹皮酚(240μmol/mL)组和TAK242(10μmol/mL)组。采用CCK8法检测细胞活性,倒置显微镜观察细胞形态,比色法测定细胞培养液中GSH、MDA含量,JC-1法检测线粒体膜电位,免疫荧光法检测F4/80及p-NF-κB蛋白表达分布,Western blotting检测细胞中TLR4/MAPK/NF-κB相关通路蛋白表达。结果:与空白组比较,1μg/mL LPS诱导的细胞活力为0.4972±0.061(P<0.01),接近半数抑制率。与LPS组比较,240μmol/mL丹皮酚预处理的细胞组下调p-NF-κB蛋白表达最显著(P<0.01),10μmol/mL TAK242预处理细胞组抑制TLR4蛋白表达最显著(P<0.01)。与LPS组比较,丹皮酚组细胞形态有所恢复;降低细胞培养液中MDA含量、增高GSH含量(P<0.01);线粒体膜电位结果中,丹皮酚组红光显著增强,绿光显著减弱(P<0.001);丹皮酚组F4/80及p-NF-κB蛋白表达分布显著降低(P<0.01),并下调了TLR4、p-IκB、p-p38、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达(P<0.05)。结论:丹皮酚可改善LPS诱导的RAW264.7细胞炎症损伤,其机制可能与TLR4/MAPK/NF-κB通路相关。 展开更多

关键词 丹皮酚 巨噬细胞raw264.7 TLR4 NF-ΚB

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藏荆芥乙醇提取物抗炎作用及机制研究 被引量：5

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作者 泽仁拉姆 袁瑞瑛 +5 位作者 李鑫宇 范成德 黄山 卓玛东智 王聚乐 普珍 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1632-1639,共8页

目的研究藏荆芥乙醇提取物对脂多糖(LPS)诱导的体内外炎症模型的作用及其作用机制。方法将小鼠随机分为空白对照组、脂多糖模型组、阳性药地塞米松(0.000 5 g·kg^(-1))组及藏荆芥乙醇提取物低、中、高剂量组(0.500、1.000、2.000 g... 目的研究藏荆芥乙醇提取物对脂多糖(LPS)诱导的体内外炎症模型的作用及其作用机制。方法将小鼠随机分为空白对照组、脂多糖模型组、阳性药地塞米松(0.000 5 g·kg^(-1))组及藏荆芥乙醇提取物低、中、高剂量组(0.500、1.000、2.000 g·kg^(-1)),每组10只。通过腹腔注射脂多糖(0.001 g·kg^(-1))建立小鼠急性腹膜炎模型,采用酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠腹腔灌洗液中炎症因子水平。另外,通过脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症模型,将RAW264.7细胞分为空白对照组、脂多糖模型组及不同浓度藏荆芥乙醇提取物组(25、50、100、200、400μg·mL^(-1)),检测细胞存活率以筛选给药浓度;ELISA法检测藏荆芥乙醇提取物对促炎因子一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的抑制作用;蛋白电泳法检测促炎介质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)的表达水平,并采用蛋白电泳法和免疫荧光法检测细胞中NF-κB通路相关蛋白(p65、p-IκBα、IκBα)的表达水平。结果体内实验中,与脂多糖模型组比,藏荆芥乙醇提取物中、高剂量组均不同程度降低了小鼠腹腔中TNF-α、IL-6、IL-1β的表达水平(P<0.05,P<0.01)。在体外实验中,根据实验结果,与空白对照组比,400μg·mL^(-1)的藏荆芥乙醇提取物表现出明显的细胞毒性(P<0.01),而25~200μg·mL^(-1)的藏荆芥乙醇提取物对细胞存活率无明显影响(P>0.05),用于进一步实验;与脂多糖模型组比,藏荆芥组NO、TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。蛋白电泳结果显示,与脂多糖模型组比,不同浓度(150、200μg·mL^(-1))的藏荆芥组明显抑制p65、p-IκBα的表达,逆转了IκBα的表达下降,且差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光结果显示,与脂多糖模型组比,藏荆芥乙醇提取物明显抑制了细胞核中的p65的表达。结论藏荆芥提取物具有明显的抗炎活性, 展开更多

关键词 藏荆芥 乙醇提取物 巨噬细胞raw264.7 小鼠 炎症 NF-ΚB

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植物乳杆菌NJAU-01体外抗氧化活性的研究 被引量：5

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作者 陈磊 刘瑞 +5 位作者 葛攀玮 杨搏 巫过玥 吴满刚 于海 葛庆丰 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2020年第1期37-43,共7页

为更全面和客观地评价植物乳杆菌NJAU-01的体外抗氧化活性,以商品化鼠李糖乳杆菌LGG为阳性对照,植物乳杆菌JMZ-12为阴性对照,对其体外自由基清除能力进行比较;采用电化学快速检测技术进一步评价乳酸菌缓解H2O2诱导巨噬细胞RAW264.7氧化... 为更全面和客观地评价植物乳杆菌NJAU-01的体外抗氧化活性,以商品化鼠李糖乳杆菌LGG为阳性对照,植物乳杆菌JMZ-12为阴性对照,对其体外自由基清除能力进行比较;采用电化学快速检测技术进一步评价乳酸菌缓解H2O2诱导巨噬细胞RAW264.7氧化损伤的能力。结果表明:109 CFU·mL-1 NJAU-01无细胞提取物的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率以及超氧阴离子自由基清除率和还原能力分别为24.20%、29.03%、18.21%和40.13μmol·L-1L-半胱氨酸,其自由基清除能力与阳性对照LGG相当。电化学结果显示NJAU-01无细胞提取物孵育后RAW264.7抗氧化能力最强,且胞内活性氧水平最低。这一研究提示, NJAU-01无细胞提取物是该菌株抗氧化能力最强的活性组分,可作为进一步解析乳酸菌抗氧化机制的研究基础。 展开更多

关键词 植物乳杆菌NJAU-01 体外抗氧化活性 电化学法 巨噬细胞raw264.7

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网络药理学预测结合实验验证探讨七龙天胶囊治疗急性肺损伤的机制

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作者 谢颖 苏雪蓉 +6 位作者 周彤 梁艺瑶 吴杨倩 万毅 陆兔林 赵晓莉 李争艳 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期4187-4200,共14页

基于网络药理学预测和体外细胞实验验证探讨七龙天胶囊治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制。首先采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析七龙天胶囊的主要化学成分,利用相关数据库获取化学成分作用靶点及ALI疾病靶点,使用STRING数据库... 基于网络药理学预测和体外细胞实验验证探讨七龙天胶囊治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制。首先采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析七龙天胶囊的主要化学成分,利用相关数据库获取化学成分作用靶点及ALI疾病靶点,使用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,Metascape数据库进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;采用AutoDock软件对主要活性成分与关键靶点进行分子对接验证。然后采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞模型进行体外细胞实验,以MTT法检测细胞活力,DCFH-DA法检测ROS水平,Griess法检测NO含量,RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达,通过研究七龙天胶囊对下游细胞因子的影响,初步验证上述预测的相关靶点。UPLC-Q-TOF-MS/MS共鉴定到84个化合物,数据库筛选出作用于ALI的有效成分44个,潜在目的基因589个,ALI疾病靶点560个,交集靶点65个。PPI网络拓扑分析得到与ALI相关的STAT3、JUN、VEGFA、CASP3、MMP9等10个核心靶点,KEGG富集分析结果显示七龙天胶囊主要通过调控癌症通路、AGE-RAGE、MAPK和JAK-STAT等信号通路发挥抗ALI作用。分子对接结果表明七龙天胶囊中主要活性成分大花红天素,人参皂苷F1、Rb_(1)、Rd、Rg_(1)、Rg_(3),三七皂苷Fe、G、R_(1)、R2、R_(3)与对应的蛋白靶点STAT3、JUN、VEGFA、CASP3、MMP9具有良好的结合能力。细胞实验表明0.1、0.25、0.5 mg·mL^(-1)的七龙天胶囊可以减少NO的释放,0.25、0.5 mg·mL^(-1)的七龙天胶囊可以降低ROS的产生,抑制IL^(-1)β、IL-6、TNF-α的mRNA表达,抑制炎症级联反应。综上,七龙天胶囊可能通过多成分、多靶点发挥治疗ALI的作用。 展开更多

关键词 七龙天胶囊 巨噬细胞raw264.7 急性肺损伤 UPLC-Q-TOF-MS/MS 网络药理学 分子对接

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