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Identification of differentially expressed microRNAs by microarray: a possible role for microRNAs gene in medulloblastomas 被引量:15
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作者 LIU Wei GONG Yan-hua +5 位作者 CHAO Teng-fei PENG Xiao-zhong YUAN Jian-gang MA Zhen-yu JIA Ge ZHAO Ji-zong 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2009年第20期2405-2411,共7页
Background MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding regulatory RNAs whose aberrant expression may be observed in many malignancies. However, few data are yet available on human primary medulloblastomas. This work aime... Background MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding regulatory RNAs whose aberrant expression may be observed in many malignancies. However, few data are yet available on human primary medulloblastomas. This work aimed to identify that whether miRNAs would be aberrantly expressed in tumor tissues compared with non-tumorous cerebellum tissues from same patients, and to explore a possible role during carcinogenesis. Methods A high throughput microRNA microarray was performed in human primary medulloblastoma specimens to investigate differentially expressed miRNAs, and some miRNAs were validated using real-time quantitative RT-PCR method. In addition, the predicted target genes for the most significantly downor up-regulated miRNAs were analyzed by using a newly modified ensemble algorithm. Results Nine miRNA species were differentially expressed in medulloblastoma specimens versus normal non-tumorous cerebellum tissues. Of these, 4 were over expressed and 5 were under expressed. The changes ranged from 0.02-fold to 6.61-fold. These findings were confirmed using real-time quantitative RT-PCR for most significant deregulated miRNAs (miR-17, miR-100, miR-106b, and miR-218) which are novel and have not been previously published. Interestingly, most of the predicted target genes for these miRNAs were involved in medulloblastoma carcinogenesis. Conclusions MJRNAs are differentially expressed between human medulloblastoma and non-tumorous cerebellum tissue. MiRNAs may play a role in the tumorigenesis of medulloblastoma and maybe serve as potential targets for novel therapeutic strategies in future. 展开更多
关键词 MICRORNA ONCOGENES MEDULLOBLASTOMA target mrna CARCINOGENESIS
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基因药物研究现状和对策 被引量:9
2
作者 毛建平 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期143-148,共6页
生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标 ,基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 .mRNA从结构上考虑是研发核酸药物的最理想靶标和策略之一 .反义寡核苷酸、特... 生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标 ,基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 .mRNA从结构上考虑是研发核酸药物的最理想靶标和策略之一 .反义寡核苷酸、特异水解基因mRNA的核酸酶(ribozyme和DNAzyme)以及具有干扰作用的双链RNA(siRNA)是药物设计的策略之二 .mRNA结构靶点研究是研发反mRNA基因药物的基础 ,mRNA分子具有高度折叠的二级及三级结构 ,阐明其可及性位点 ,筛选其结构靶位点序列是关键 .近年研究报道的靶点筛选有约 7种mRNA的实测新技术 ,以及计算机辅助软件预测分析 .但发展分子生物学实验新技术以分析、确认靶点是药物研发策略之三 . 展开更多
关键词 基因药物 生物技术药物 mrna 可及性 靶点 致病基因 基因转录本 生物大分子
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蜜蜂球囊菌菌丝和孢子中微小RNA及其靶mRNA的比较分析 被引量:9
3
作者 陈华枝 祝智威 +10 位作者 蒋海宾 王杰 范元婵 范小雪 万洁琦 卢家轩 熊翠玲 郑燕珍 付中民 陈大福 郭睿 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期3606-3619,共14页
【目的】蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis,球囊菌)专性侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病。本研究旨在通过small RNA-seq(sRNA-seq)技术和生物信息学方法对球囊菌纯化菌丝(AaM)和纯化孢子(AaS)进行深度测序和比较分析,明确球囊菌菌丝miRNA和孢子mi... 【目的】蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis,球囊菌)专性侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病。本研究旨在通过small RNA-seq(sRNA-seq)技术和生物信息学方法对球囊菌纯化菌丝(AaM)和纯化孢子(AaS)进行深度测序和比较分析,明确球囊菌菌丝miRNA和孢子miRNA的数量、结构和表达谱差异,并揭示菌丝和孢子共有miRNA、特有miRNA和差异表达miRNA(differentially expressed miRNA,DEmiRNA)及其靶mRNA与球囊菌菌丝和孢子生长、发育和病原致病性的潜在关系。【方法】实验室条件下获得纯培养的球囊菌,利用sRNA-seq技术对AaM和AaS分别进行测序,通过对原始读段(raw reads)进行过滤和质控获得有效标签序列(clean tags)。通过Venn分析筛选菌丝和孢子共有miRNA和特有miRNA。根据P≤0.05且|log2 fold change|≥1的标准筛选AaM vs AaS的DEmiRNA。对上述共有miRNA、特有miRNA和DEmiRNA的靶mRNA进行预测,并对靶mRNA进行GO及KEGG数据库注释。根据靶向结合关系构建DEmiRNA和靶mRNA的调控网络。利用RT-qPCR验证测序数据的可靠性。【结果】AaM和AaS中分别得到12982320和12708832条raw reads,经过滤和质控分别得到10800101和9888848条clean tags。AaM中miRNA的长度介于18-26 nt,AaS中miRNA的长度介于18-24 nt,分布miRNA数量最多的长度均为18 nt,AaM和AaS中首位碱基为U的miRNA数量最多。AaM和AaS中表达量最高的miRNA均为miR6478-x、miR10516-x和miR482-x。菌丝和孢子共有miRNA靶向结合5946个mRNA,二者特有miRNA分别靶向结合6141和6346个mRNA。共有miRNA的靶mRNA主要参与代谢进程、细胞进程和催化活性等42个功能条目,以及翻译、碳水化合物代谢和能量代谢等120条通路。AaM vs AaS比较组包含93个DEmiRNA,可靶向结合6090个mRNA,这些靶mRNA可注释到38个功能条目和120条通路。DEmiRNA与靶mRNA之间形成较为复杂的调控网络,miR-4968-y位于调控网络的中心且能够靶向结合多达118个mRNA。RT-qPCR结果显示5个DEmiRNA的表达趋� 展开更多
关键词 蜜蜂球囊菌 菌丝 孢子 微小RNA 信使RNA 靶向结合
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刺参补体AjC3活性相关miRNA的筛选与初步研究 被引量:7
4
作者 翟钰 曹雁惠 +1 位作者 张峰 常亚青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期585-591,共7页
为了从miRNA调控方面探索刺参Apostichopus japonicus的免疫机制,用脂多糖刺激刺参,在第0、6、12 h取样(记为样本A00、A06、A12),以海胆Strongylocentrotus purpuratus基因组为参照基因,运用高通量测序和相关生物信息学方法筛选与刺参补... 为了从miRNA调控方面探索刺参Apostichopus japonicus的免疫机制,用脂多糖刺激刺参,在第0、6、12 h取样(记为样本A00、A06、A12),以海胆Strongylocentrotus purpuratus基因组为参照基因,运用高通量测序和相关生物信息学方法筛选与刺参补体(AjC3)相关的miRNAs,并通过实时定量PCR验证相关miRNA和AjC3 mRNA的表达变化。结果表明:经比对筛选出刺参体腔细胞的miRNA共41个;通过靶基因预测和差异表达分析,共得到靶基因为补体AjC3的miRNA有3个,分别为spu-miR-133、spu-miR-137、spu-miR-2006;3种miRNA和AjC3 mRNA实时定量PCR显示,spu-miR-133表达量呈先升高后降低的趋势,12 h达到最高值,spu-miR-137表达量呈先降低后升高的趋势,9 h达到最低值,12 h达到最高值,spu-miR-2006表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值,AjC3 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值。研究表明,spu-miR-133、spu-miR-137可能共同抑制调控补体AjC3基因表达,spu-miR-2006在免疫反应中对其他靶基因进行调控。 展开更多
关键词 MIRNA 靶基因 补体AjC3 mrna
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基于生物信息学构建骨肉瘤miRNA-mRNA的调控网络 被引量:7
5
作者 袁长深 容伟明 +3 位作者 卢智贤 段戡 郭锦荣 梅其杰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第17期2740-2746,共7页
背景:骨肉瘤是常见的原发性恶性肿瘤,其极易转移及预后较差;miRNA调控基因的表达参与骨肉瘤的发生与发展,但其潜在的miRNA-mRNA调控网络尚未全面建立。目的:通过生物学分析方法,构建骨肉瘤发病机制中潜在miRNA-mRNA调控网络,以便更全面... 背景:骨肉瘤是常见的原发性恶性肿瘤,其极易转移及预后较差;miRNA调控基因的表达参与骨肉瘤的发生与发展,但其潜在的miRNA-mRNA调控网络尚未全面建立。目的:通过生物学分析方法,构建骨肉瘤发病机制中潜在miRNA-mRNA调控网络,以便更全面地阐明骨肉瘤的发病机制。方法:从GEO数据库获取miRNA微阵列数据集(GSE65071),利用GEO2R对20个骨肉瘤血浆样本和15个健康者血浆样本的数据进行差异表达分析,筛选出在骨中有靶向基因的差异表达miRNA,并预测差异表达miRNA潜在转录因子。同时,从GEO数据库获得GSE16088数据集并在线分析获取差异表达基因,将靶基因与差异表达基因交集获得目标基因。最后,对目标基因进行GO注释和KEGG通路富集分析,构建PPI网络和筛选出关键基因,进一步评估关键基因的表达。结果与结论:共筛选出8个上调差异表达miRNA和14个下调差异表达miRNA,其主要转录因子有EGR1、POU2F1、SP1、SP4、NFIC、LHX3。22个差异表达miRNA靶基因与差异表达基因交集共获得110个目标基因。KEGG途径分析显示目标基因主要涉及细胞衰老、Apelin信号通路和癌症中的蛋白聚糖等途径。PPI网络分析显示CCNB1、AURKA、CD44较为重要。结果显示,通过构建骨肉瘤发病相关潜在miRNA-mRNA调控网络,为深入研究骨肉瘤分子机制提供理论基础,也为开发新的治疗靶标提供科学依据。 展开更多
关键词 骨肉瘤 生物学分析 RNA MIRNA mrna 基因 蛋白 靶向
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雌二醇、双酚A和苯并[a]芘对食蚊鱼目标基因表达的影响 被引量:6
6
作者 熊甜甜 方展强 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期19-24,共6页
比较雌二醇(E2)、双酚A(BPA)、苯并[a]芘(B[a]P)和他莫昔芬(TAM)暴露对食蚊鱼(Gambusia affinis)卵黄蛋白原基因(VTGα)、雌激素受体基因(ERα)和细胞色素P4501A基因(CYP4501A)表达的影响。结果显示,低浓度E2单独暴露诱导VTGα和ERα表... 比较雌二醇(E2)、双酚A(BPA)、苯并[a]芘(B[a]P)和他莫昔芬(TAM)暴露对食蚊鱼(Gambusia affinis)卵黄蛋白原基因(VTGα)、雌激素受体基因(ERα)和细胞色素P4501A基因(CYP4501A)表达的影响。结果显示,低浓度E2单独暴露诱导VTGα和ERα表达量显著上调,但高浓度E2极显著抑制VTGα、ERα和CYP4501A表达。高浓度B[a]P明显抑制VTGα表达;B[a]P对ERa表达无明显抑制作用,但致CYP4501A表达量显著上升。BPA显著上调VTGα和ERα的表达,但低浓度BPA致CYP4501A表达显著下降。B[a]P+高浓度E2联合暴露,致VTGα和ERα表达量显著提高,但B[a]P+低浓度E2联合暴露抑制ERα的表达。B[a]P+E2不同浓度组均致CYP4501A表达水平呈极显著上升;B[a]P+E2+TAM联合暴露均致VTGα、ERα和CYP4501A表达量显著或极显著增加。不同浓度组(B[a]P+BPA)均致VTGα、ERα和CYP4501A表达量显著上调;B[a]P+BPA+TAM暴露,VTGα表达量呈极显著下降,相反,均致ERα和CYP4501A的表达量显著增加。单一毒物实验与联合毒物实验的比较表明,ERα和AhR介导的生理过程机制十分复杂,通过这两个途径对外来污染物的调控跟化合物的效应浓度有关,不是单独暴露效应的简单相加或相减。另外还进行E2/BPA+B[a]P+TAM联合暴露实验,来研究TAM对ERα受体途径和AhR受体途径的影响,结果显示TAM对两个途径均有抑制作用。 展开更多
关键词 内分泌干扰物 目标基因 单独及联合暴露 mrna表达 食蚊鱼
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益气活血解毒方治疗晚期上皮性卵巢癌疗效相关靶基因筛选 被引量:6
7
作者 李娟 翁洁琼 卢雯平 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2020年第4期28-34,共7页
目的采用mRNA芯片探究益气活血解毒方维持治疗晚期上皮性卵巢癌(AEOC)气虚血瘀证疗效相关基因靶点,明确其有效作用机制。方法观察AEOC气虚血瘀证患者服用益气活血解毒方维持治疗后的无进展生存期(PFS),选取PFS最长的8例为敏感组,PFS最短... 目的采用mRNA芯片探究益气活血解毒方维持治疗晚期上皮性卵巢癌(AEOC)气虚血瘀证疗效相关基因靶点,明确其有效作用机制。方法观察AEOC气虚血瘀证患者服用益气活血解毒方维持治疗后的无进展生存期(PFS),选取PFS最长的8例为敏感组,PFS最短的8例为不敏感组。采用mRNA芯片检测2组患者治疗后血液mRNA表达情况,并对差异表达基因进行GO、KEGG、singal-net、path-net生物信息学分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果益气活血解毒方疗效相关差异表达基因共1157个(P<0.05),其中上调基因497个,下调基因660个。qRT-PCR显示,MAPK3、HLA-DOA、CD40、KIR2DL3差异表达有统计学意义(P<0.05)。结论益气活血解毒方治疗AEOC气虚血瘀证患者的疗效机制可能在于抑制MAPK3及与免疫通路相关的HLA-DOA、CD40、KIR2DL3靶基因。通过对益气活血解毒方作用靶基因的探究,可为AEOC气虚血瘀证微观辨证及中医精准治疗提供依据。 展开更多
关键词 晚期上皮性卵巢癌 mrna芯片 益气活血解毒方 气虚血瘀证 靶基因
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miRNAs及其靶基因的识别 被引量:6
8
作者 宋宝 宋现让 +1 位作者 刘杰 魏玲 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第9期1063-1065,共3页
microRNAs(miRNAs)是人类新发现的一类非编码小分子RNA,广泛分布于真核细胞内。miRNAs通过与靶基因互补位点配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达,参与生长发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等生命过程。据推测,大约1%... microRNAs(miRNAs)是人类新发现的一类非编码小分子RNA,广泛分布于真核细胞内。miRNAs通过与靶基因互补位点配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达,参与生长发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等生命过程。据推测,大约1%的人类已知基因编码miRNAs,而miRNAs可调控人类基因组中10%-30%的基因。本文就如何识别miRNAs及其靶基因作一简要介绍。 展开更多
关键词 microRNAs(miRNAs) 非编码RNA mrna
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绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用 被引量:6
9
作者 毛建平 王全会 +4 位作者 施水兰 袁国刚 左刚 崔玉芳 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期529-536,共8页
基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的... 基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值. 展开更多
关键词 mrna 反义寡核苷酸 靶点 PARASS GFP
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乳腺癌筛选差异表达的miRNAs-mRNA及其与靶基因的关系 被引量:6
10
作者 刘海英 陈峰 +1 位作者 王梅 姚嘉 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期532-537,共6页
目的筛选乳腺癌差异表达的miRNAs-mRNA,探讨差异miRNAs的表达及与靶基因的关系。方法利用肿瘤基因组图谱(TCGA)筛选乳腺癌中差异表达的4种miRNAs;利用qRT-PCR验证4种miRNAs在多种细胞株中的表达;结合GO和KEGG确定4种miRNAs的靶基因。利... 目的筛选乳腺癌差异表达的miRNAs-mRNA,探讨差异miRNAs的表达及与靶基因的关系。方法利用肿瘤基因组图谱(TCGA)筛选乳腺癌中差异表达的4种miRNAs;利用qRT-PCR验证4种miRNAs在多种细胞株中的表达;结合GO和KEGG确定4种miRNAs的靶基因。利用CCK-8法检测各组细胞的活力;利用双荧光素酶报告基因验证miRNAs与对应靶基因的作用关系。结果通过TCGA结合文献筛选差异的miRNAs分别为hsa-miR-122、hsa-miR-133b、hsa-miR-449a和hsa-miR-767。根据GO和KEGG分析hsa-miR-122-5p、hsa-miR-133b-5p、hsa-miR-449a-5p和hsa-miR-767-5p的靶基因分别为ESR1、EGFR、HMGB1和IGF-1。与mimics-NC组(1.52±0.01)比较,mimics hsa-miR-122组(1.75±0.01)、mimics hsa-miR-767组(1.87±0)和mimics hsa-miR-449a组(1.71±0.01)的细胞活力显著升高(P<0.01)。转染miR-122-5p(0.80±0.03)可降低ESR13′-UTR野生型MCF-7细胞的相对荧光活性比值(P<0.0001),转染miR-133b-5p(0.96±0.03)可降低EGFR 3′-UTR野生型MCF-7细胞的相对荧光活性比值(P<0.0001),转染miR-499a-5p(0.77±0.03)可降低HMGB13′-UTR野生型MCF-7细胞的相对荧光活性比值(P<0.0001),转染miR-767-5p(0.62±0.03)可显著降低IGF-13′-UTR野生型MCF-7细胞的相对荧光活性比值(P<0.0001);IGF-1表达与患者年龄、原发肿瘤分期有相关性(P<0.05)。结论乳腺癌细胞株中4种差异表达的miRNAs分别与ESR1、EGFR、HMGB1和IGF-1靶向结合,IGF-1表达与患者年龄、原发肿瘤分期有相关性。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 miRNAs-mrna 靶基因 双荧光素酶
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Prediction and Expression Analysis of miRNAs Associated with Heat Stress in Oryza sativa 被引量:5
11
作者 B.SAILAJA S.R.VOLETI +4 位作者 D.SUBRAHMANYAM N.SARLA V.VISHNU PRASANTH V.P.BHADANA S.K.MANGRAUTHIA 《Rice science》 SCIE 2014年第1期3-12,共10页
Computational prediction of potential microRNAs (miRNAs) and their target genes was performed to identify the miRNAs and genes associated with temperature response in rice. The data of temperature-responsive miRNAs ... Computational prediction of potential microRNAs (miRNAs) and their target genes was performed to identify the miRNAs and genes associated with temperature response in rice. The data of temperature-responsive miRNAs of Arabidopsis, and miRNAs and the whole genome data of rice were used to predict potential miRNAs in Oryza sativa involved in temperature response. A total of 55 miRNAs were common in both the species, and 27 miRNAs were predicted at the first time in rice. Target genes were searched for these 27 miRNAs in rice genome following stringent criteria. Real time PCR based on expression analysis of nine miRNAs showed that majority of the miRNAs were down regulated under heat stress for rice cultivar Nagina 22. Furthermore, miR169, miR1884 and miR160 showed differential expression in root and shoot tissues of rice. Identification and expression studies of miRNAs during heat stress will advance the understanding of gene regulation under stress in rice. 展开更多
关键词 miRNA Oryza sativa ARABIDOPSIS target mrna REGULATION
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miRNA与其靶mRNA的相互作用:绑定位点的质量与数量特征的整合计算分析(英文) 被引量:5
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作者 付聪 林魁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期608-615,共8页
miRNAs通过完全或不完全的碱基互补绑定到信使RNA(mRNA)上,通过抑制翻译或者直接导致mRNA降解的方式来调节靶基因的表达.为了研究miRNAs在转录水平上面的调控作用,两种人类基因组中组织特异的miRNAs(miR-1和miR-124)被转染到HeLa细胞中... miRNAs通过完全或不完全的碱基互补绑定到信使RNA(mRNA)上,通过抑制翻译或者直接导致mRNA降解的方式来调节靶基因的表达.为了研究miRNAs在转录水平上面的调控作用,两种人类基因组中组织特异的miRNAs(miR-1和miR-124)被转染到HeLa细胞中,微阵列(microarray)分析转染前后细胞中各基因mRNA表达水平变化情况的结果表明:动物基因组中靶基因与miRNAs不完全的碱基互补也会导致mRNA的直接降解.通过分析实验得到的mRNA表达水平变化数据,发现这相同miRNA的不同靶基因mRNA表达水平的下调倍数有着明显的差别,推测这些靶基因mRNA序列本身存在某些影响其受调节程度的因素.为此,提取和分析这些靶基因mRNA的序列特征,通过对这些序列特征与mRNA表达水平下调数据进行统计相关分析,最终发现,miRNA靶基因受调节的程度与以下几个因素相关联:mRNA序列中miRNA靶位点的个数,靶位点与miRNA序列碱基互补的程度,以及绑定后形成二级结构的稳定程度(即最低自由能的大小).在此基础上,初步建立起一个多因子作用下的miRNA靶基因mRNA表达水平下调程度模型,分析表明:该模型在一定程度上可以反映了部分序列特征对于miRNA靶基因mRNA表达水平下调程度的影响. 展开更多
关键词 MICRORNA 靶位点 mrna 下调
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10-23型DNA酶作为鉴定mRNA靶点有效性的新工具 被引量:4
13
作者 毛建平 王全会 +4 位作者 韩慧明 袁国刚 左刚 邵世和 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期622-627,共6页
10-23DNA酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23DNA酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23DNA酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点... 10-23DNA酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23DNA酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23DNA酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点2的反义寡核苷酸突变2个碱基,对照组10-23DNA酶将靶点2的10-23DNA酶结合臂中央突变2个碱基.体外4条10-23DNA酶切割mRNA的结果和相应的4条反义寡核苷酸依赖的RNaseH降解结果完全相似,细胞内4条10-23DNA酶对绿色荧光蛋白的表达抑制作用与相应的4条反义寡核苷酸相似,表明10-23DNA酶显示的最佳作用靶点同样是最佳作用效果的反义寡核苷酸结合靶.10-23DNA酶可以作为评价mRNA结构靶点有效性的新工具. 展开更多
关键词 10-23 DNA酶 mrna 靶点 有效性 反义寡核苷酸 绿色荧光蛋白
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检测miRNA活性的双荧光素酶单载体 被引量:4
14
作者 毕延震 郑新民 +5 位作者 邵长伟 潘雯 姜黎 欧阳辉武 乔宪凤 刘西梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期775-780,共6页
本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体... 本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体的海肾荧光素酶基因(Renillaluc)和氨苄青霉素抗性基因之间,构建为两种荧光素酶基因表达框并置的单载体报告系统,命名为pMiSensor.在海肾荧光素酶基因的3'非翻译区引入多克隆位点Xba I和Apa I,便于克隆目的基因的3'UTR.海肾荧光素酶为报告基因,萤火虫荧光素酶为内参基因.多种哺乳动物细胞系的转染实验证实,pMiSensor可同时有效表达两种报告基因,其酶活显示出宽广的线性范围.通过构建pMiSensor-CCNE1报告载体,证明pMiSensor能够重现miR16对细胞周期蛋白CCNE1的调控作用.通过转染miR16抑制剂,证明pMiSensor-CCNE1可作为一种灵敏的生物感应器,探测细胞内微小RNA的活性变化.该双荧光素酶单载体具有重复性高、操作简便、定量准确的优点,适用于微小RNA靶分子的筛选、鉴定和确认,也适用于在细胞水平定量分析微小RNA的活性变化. 展开更多
关键词 微小RNA 荧光素酶 非连接酶依赖 mrna靶分子 单载体
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脂质纳米颗粒递送mRNA药物
15
作者 吴思凡 王红艳 《生命的化学》 CAS 2024年第9期1707-1713,共7页
在新冠病毒mRNA疫苗获得成功的同时,mRNA在各种疾病的预防和治疗中受到越来越多的关注。脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNPs)是目前最常用的mRNA药物递送方式之一。本文将简要介绍含LNPs在内的mRNA药物递送平台,总结LNPs的历史发展... 在新冠病毒mRNA疫苗获得成功的同时,mRNA在各种疾病的预防和治疗中受到越来越多的关注。脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNPs)是目前最常用的mRNA药物递送方式之一。本文将简要介绍含LNPs在内的mRNA药物递送平台,总结LNPs的历史发展,探讨LNPs优化策略以及靶向器官或细胞类型的特异性等问题,最后聚焦mRNA-LNPs药物的主要应用。 展开更多
关键词 脂质纳米颗粒 优化策略 靶向性 mrna药物
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miRNA与糖脂代谢 被引量:2
16
作者 陆康 李晔 《生命的化学》 CAS CSCD 2016年第3期347-353,共7页
糖类与脂肪是人体主要的能量物质,其代谢过程在人体发挥着重要作用,一旦它们代谢出现偏差,可能会引起多种疾病。miRNA是一类22~25个核苷酸长度的内源性非编码RNA,它与靶mRNA的3′UTR互补配对,可通过降解mRNA或抑制靶mRNA翻译调控基因表... 糖类与脂肪是人体主要的能量物质,其代谢过程在人体发挥着重要作用,一旦它们代谢出现偏差,可能会引起多种疾病。miRNA是一类22~25个核苷酸长度的内源性非编码RNA,它与靶mRNA的3′UTR互补配对,可通过降解mRNA或抑制靶mRNA翻译调控基因表达。研究发现,miRNA参与了糖和脂的代谢过程,并作为调控糖类和脂类代谢内稳态的重要调节因子在糖类以及脂肪酸和固醇的代谢过程中发挥了重要作用。本文旨在探讨miRNA与糖脂代谢的关系。 展开更多
关键词 MIRNA 糖脂代谢 mrna 内稳态
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永久性房颤的转录组分析及miRNA调控网络的建立 被引量:2
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作者 高杰 周建 +4 位作者 顾松 刘岩 安向光 张希涛 苏丕雄 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第9期1262-1267,共6页
目的探索永久性房颤(p AF)发病相关的关键miRNAs及其调控的靶基因。方法联合应用表达谱芯片和miRNA芯片分析p AF患者(n=7)和健康成人(n=4)的左房组织,筛选p AF相关差异表达的miRNAs,进行靶基因预测后,与表达谱芯片的筛选结果进行负相关... 目的探索永久性房颤(p AF)发病相关的关键miRNAs及其调控的靶基因。方法联合应用表达谱芯片和miRNA芯片分析p AF患者(n=7)和健康成人(n=4)的左房组织,筛选p AF相关差异表达的miRNAs,进行靶基因预测后,与表达谱芯片的筛选结果进行负相关分析后的基因集合进行显著性功能分析(GO-analysis);利用miRNA与靶基因之间的靶向调控关系,构建差异miRNA与交集靶基因的调控网络(miRNA-gene-network),得到网络中起核心调控作用的miRNA和被调控的关键靶基因;采用RT-q PCR方法检验另一组p AF患者(n=5)和健康成人(n=4)的左房组织标本。结果表达谱基因芯片发现610个mRNA有显著性改变(fold change>2,P<0.05),miRNA-靶基因调节网络发现与p AF显著相关的20个miRNAs和107个靶基因,相关度最高的是miR-144、miR-1284、miR-1827、miR-1、miR-3613-3p和miR-101;其调控的重要靶基因包括CACNB2、EFNB1、PTEN、TAOK1、RUNX1和TPM3等;RT-q PCR验证结果显示这些miRNAs和靶基因密切相关。结论通过表达谱基因芯片与miRNAs芯片联合分析p AF左房组织标本,构建miRNA调控网络,发现p AF重要的miRNA-靶基因调控及功能,结果更加准确。 展开更多
关键词 永久性房颤 MICRORNA mrna 靶基因 网络调控
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Correlating Bladder Cancer Risk Genes with Their Targeting MicroRNAs Using MMiRNA-Tar 被引量:1
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作者 Yang Liu Steve Baker +2 位作者 Hui Jiang Gary Stuart Yongsheng Bai 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期177-182,共6页
The Cancer Genome Arias (TCGA) (http://cancergenome.nih.gov) is a valuable data resource focused on an increasing number of well-characterized cancer genomes. In part, TCGA provides detailed information about can... The Cancer Genome Arias (TCGA) (http://cancergenome.nih.gov) is a valuable data resource focused on an increasing number of well-characterized cancer genomes. In part, TCGA provides detailed information about cancer-dependent gene expression changes, including changes in the expression of transcription-regulating microRNAs. We developed a web interface tool MMiRNA-Tar (http:f/bioinfl.indstate.edufMMiRNA-Tar) that can calculate and plot the correlation of expression for mRNA-microRNA pairs across samples or over a time course for a list of pairs under different prediction confidence cutoff criteria. Prediction confidence was estab- lished by requiring that the proposed mRNA-microRNA pair appears in at least one of three target prediction databases: TargetProfiler, TargetScan, or miRanda. We have tested our MMiRNA-Tar tool through analyzing 53 tumor and 11 normal samples of bladder urothelial carcinoma (BLCA) datasets obtained from TCGA and identified 204 microRNAs. These microRNAs were correlated with the mRNAs of five previously-reported bladder cancer risk genes and these selected pairs exhib- ited correlations in opposite direction between the tumor and normal samples based on the cus- tomized cutoff criterion of prediction. Furthermore, we have identified additional 496 genes (830 pairs) potentially targeted by 79 significant microRNAs out of 204 using three cutoff criteria, i.e.,false discovery rate (FDR) 〈 0.1, opposite correlation coefficient between the tumor and normal samples, and predicted by at least one of three target prediction databases. Therefore, MMiRNA- Tar provides researchers a convenient tool to visualize the co-relationship between microRNAs and mRNAs and to predict their targeting relationship. We believe that correlating expression profiles for microRNAs and mRNAs offers a complementary approach for elucidating their interactions. 展开更多
关键词 The Cancer Genome Atlas Bladder cancer MicroRNA mrna Correlation target prediction
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丹苘软胶囊干预大鼠非酒精性脂肪肝细胞模型基因芯片的组学分析 被引量:2
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作者 刘锐 刘秀芳 +3 位作者 何嘉 李劲平 张玲 伍娟娟 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第5期1046-1050,I0002-I0004,共6页
目的:通过筛选mRNA(Clariom^(TM) S Assay)芯片及miRNA芯片的显著差异性基因,预测microRNA相关靶基因,探究丹苘软胶囊改善肝细胞脂肪代谢的调控机制。方法:提取丹苘软胶囊灌胃SD大鼠的含药血清,并对BRL大鼠肝细胞取对数生长期细胞进行实... 目的:通过筛选mRNA(Clariom^(TM) S Assay)芯片及miRNA芯片的显著差异性基因,预测microRNA相关靶基因,探究丹苘软胶囊改善肝细胞脂肪代谢的调控机制。方法:提取丹苘软胶囊灌胃SD大鼠的含药血清,并对BRL大鼠肝细胞取对数生长期细胞进行实验,以阴性对照血清做对照,提取细胞总RNAs,采用Clariom S表达谱芯片及microRNA芯片检测细胞mRNA及miRNA的表达水平。运用生物信息学方法预测miRNA的靶基因,对脂肪代谢相关基因进行富集分析和通路分析。结果:经筛选和预测得到5629个预测靶基因参与20种生物学过程,7种细胞成分,有20种分子作用,神经营养素信号通路、丙型肝炎、PI3K-Akt信号通路被富集;rno-miR-26b-5p、rno-miR-129b-5p、rno-miR-21b-5p为调控网络中心;IPA数据库共检出31个与实验有关的脂肪代谢基因。结论:丹苘软胶囊在治疗非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的机制可能与rno-miR-26b-5p、rno-miR-129b-5p、rno-miR-21b-5p,神经营养素信号通路、丙型肝炎、PI3K-Akt信号通路相关性较高。 展开更多
关键词 丹苘软胶囊 非酒精性脂肪肝 mrna miRNA 靶基因 生物信息学分析
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五指山猪皮下脂肪组织lncRNA和mRNA的鉴定与分析 被引量:2
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作者 晁哲 王林杰 +3 位作者 吴望军 孙瑞萍 刘海隆 王峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第4期7-14,共8页
为了鉴定和分析五指山猪背部和腹部皮下脂肪组织中差异表达的长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和信使RNA(messenger RNA, mRNA),采用RNA-Seq和生物信息学方法对五指山猪皮下脂肪组织中的lncRNA和mRNA进行分析筛选,运用DESeq... 为了鉴定和分析五指山猪背部和腹部皮下脂肪组织中差异表达的长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和信使RNA(messenger RNA, mRNA),采用RNA-Seq和生物信息学方法对五指山猪皮下脂肪组织中的lncRNA和mRNA进行分析筛选,运用DESeq鉴定背部和腹部皮下脂肪组织中差异表达的lncRNA和mRNA,并对差异表达的lncRNA进行靶基因预测分析。结果显示:在五指山猪皮下脂肪组织中共鉴定出12 875个lncRNA,其中正义型10 155个、反义型278个、内含子型246个、基因间型2 196个;在背部与腹部皮下脂肪间,存在184个差异表达的mRNA,其中前十位分别是ZIC1、ZIC4、HAND2、CCBE1、RPH3A、ISM1、ANXA8、SLITRK4、DSG2、EVPL,存在45个差异表达的lncRNA,其中6个只在背部皮下脂肪中表达、18个只在腹部皮下脂肪中表达;获得差异表达lncRNA的靶基因共109个,包括顺式作用的靶基因和反式作用的靶基因。本试验为进一步研究lncRNA和mRNA调控猪皮下脂肪发育的分子机制提供科学依据。 展开更多
关键词 五指山猪 脂肪组织 长链非编码RNA 信使RNA 靶基因
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