溶菌酶的研究进展 被引量：39

1

作者 贾向志 李元 马文煜 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期374-377,共4页

溶菌酶在自然界中广泛存在,是一种与单核-巨噬细胞系统有关的非特异防御机制。人溶菌酶在临床上具有潜在的使用价值。由于来源有限,利用基因工程技术从细菌或酵母中生产人溶菌酶实现产业化,是解决其供需矛盾的有效途径。有关溶菌酶抗菌... 溶菌酶在自然界中广泛存在,是一种与单核-巨噬细胞系统有关的非特异防御机制。人溶菌酶在临床上具有潜在的使用价值。由于来源有限,利用基因工程技术从细菌或酵母中生产人溶菌酶实现产业化,是解决其供需矛盾的有效途径。有关溶菌酶抗菌功能以外的其它未知生物学作用,也是当前研究的热点。 展开更多

关键词 溶菌酶 研究进展 模型 基因克隆 表达

下载PDF 职称材料

人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达 被引量：14

2

作者 矫庆华 钱世钧 +1 位作者 叶军 郭伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期102-104,共3页

人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达矫庆华钱世钧叶军郭伟（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）利用ＤＮＡ重组技术生产自然界不能或难以得到的多肽产品用于医药、农业、食品工业等领域，目前在生物领域已有了很大的进展。... 人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达矫庆华钱世钧叶军郭伟（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）利用ＤＮＡ重组技术生产自然界不能或难以得到的多肽产品用于医药、农业、食品工业等领域，目前在生物领域已有了很大的进展。近年来，科学工作者经体外合成人溶菌... 展开更多

关键词 溶菌酶 溶菌酶基因 人工合成 基因表达

下载PDF 职称材料

两种沼虾溶菌酶基因ORF的克隆和罗氏沼虾溶菌酶基因的组织表达(英文) 被引量：15

3

作者 高风英 叶星 +2 位作者 白俊杰 劳海华 吴锐全 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期615-620,共6页

分别提取罗氏沼虾和日本沼虾血细胞总RNA,RT-PCR扩增获得特异性cDNA片段,纯化后克隆到T载体上。序列测定表明所克隆的两种沼虾溶菌酶基因的开放阅读框(ORF)为477bp,共编码158个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽140个氨基酸残基和信号肽18个氨基... 分别提取罗氏沼虾和日本沼虾血细胞总RNA,RT-PCR扩增获得特异性cDNA片段,纯化后克隆到T载体上。序列测定表明所克隆的两种沼虾溶菌酶基因的开放阅读框(ORF)为477bp,共编码158个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽140个氨基酸残基和信号肽18个氨基酸残基。同源性分析表明,罗氏沼虾和日本沼虾溶菌酶基因的碱基序列及推测氨基酸序列高度同源,分别为99.4%和98.1%。两种沼虾溶菌酶基因的碱基序列和推测氨基酸序列与Gen-Bank上其他对虾溶菌酶的同源性达83.0%和80.0%以上。两种沼虾溶菌酶都具有c-型溶菌酶典型的两个酶活性位点(Glu51)和(Asp68),以及8个保守结构氨基酸残基Cys,且在101、106和107位上缺少Asp,因而推测本实验所克隆的两种沼虾溶菌酶基因属c-型溶菌酶基因的非钙结合亚型。以PCR法制备罗氏沼虾溶菌酶基因的生物素标记探针,斑点杂交检测感染弧菌后溶菌酶基因mRNA在各组织中的转录水平,结果表明受感染6h后在眼、肌肉、鳃、肝胰腺、肠管中的表达量均有升高,其中在肝胰腺中的表达量最高,约为对照组的560%。在不同感染时间里,肝胰腺中该基因表达量有较大的变化:感染后3h表达量最低,24h后表达量升至最高,大约为对照组的430%,48h时的表达量又有所下降,但仍明显高于对照组(约为330%)。受弧菌感染后罗氏沼虾溶菌酶基因转录的上调证明溶菌酶基因在非特异性免疫中的直接作用,同时表明肝胰腺可能在沼虾的免疫防御过程起重要作用。 展开更多

关键词 罗氏沼虾 日本沼虾 溶菌酶 基因克隆 基因表达

下载PDF 职称材料

青蛤(Cyclina sinensis)溶菌酶基因在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激下的表达 被引量：14

4

作者 潘宝平 宋欣 +2 位作者 罗凯娅 葛端阳 高玮玮 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期901-906,共6页

利用构建的SMART cDNA文库和高通量测序方法,得到了青蛤溶菌酶相关基因的全长,采用荧光定量RT-PCR方法分析了c型溶菌酶基因在鳗弧菌刺激下的表达变化。结果表明,青蛤有c型溶菌酶和i型溶菌酶基因,分别编码155和182个氨基酸,c型溶菌酶信... 利用构建的SMART cDNA文库和高通量测序方法,得到了青蛤溶菌酶相关基因的全长,采用荧光定量RT-PCR方法分析了c型溶菌酶基因在鳗弧菌刺激下的表达变化。结果表明,青蛤有c型溶菌酶和i型溶菌酶基因,分别编码155和182个氨基酸,c型溶菌酶信号肽为21个氨基酸并具有典型的LYZ1结构域,i型溶菌酶信号肽为19个氨基酸,其结构域为Destabilase domain结构,用于识别和切断谷氨酰胺-甲酰胺与赖氨酸ε-氨基之间的肽键。荧光定量PCR结果显示,在鳗弧菌刺激后6—24h,青蛤血细胞中c型溶菌酶的表达量出现明显上调的趋势,与对照组有显著性差异(P<0.05),说明c型溶菌酶基因在青蛤的免疫应答中起重要的作用。 展开更多

关键词 青蛤 c型溶菌酶 i型溶菌酶 基因表达

下载PDF 职称材料

斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测 被引量：11

5

作者 郑清梅 叶星 +3 位作者 白俊杰 吴锐全 劳海华 罗建仁 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-24,共5页

采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造,并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220 lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS PAGE电泳表明,表达产物中有16kD左右的... 采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造,并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220 lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS PAGE电泳表明,表达产物中有16kD左右的特异性条带,与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符。薄层扫描显示,重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32%,纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的90%左右。比浊法检测复性后产物的生物活性,结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适pH为6.0,最适温度为40℃。测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力,结果表明,重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌、溶藻弧菌和鳗弧菌有较强的溶菌活力,对爱德华氏菌有一定的溶菌活力,对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和大肠杆菌DH5α溶菌活力较弱。 展开更多

关键词 斑节对虾 溶菌酶基因 原核表达 溶菌活性

下载PDF 职称材料

凡纳滨对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达和活性检测 被引量：13

6

作者 张海波 谭洪新 +4 位作者 王兴强 吴嘉敏 秦松 陈华新 阎斌伦 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期48-53,共6页

将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序。用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-2... 将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序。用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-28(a+)/LvLys,转移到BL21(DE3)中诱导表达。经亲和纯化得到凡纳滨对虾重组溶菌酶。抑菌活性检测表明重组溶菌酶对大肠杆菌TOP10有一定抑制作用。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) 溶菌酶基因 原核表达 溶菌活性

下载PDF 职称材料

玉米蛋白粉替代鱼粉对暗纹东方鲀溶菌酶活性及c型溶菌酶mRNA表达的影响 被引量：11

7

作者 钟国防 钱曦 +1 位作者 华雪铭 周洪琪 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1121-1128,共8页

以初重为(41.26±1.09)g的暗纹东方鲀为实验鱼,配制5种玉米蛋白粉使用量为0%、5%、10%、15%、20%的实验饲料,玉米蛋白粉对饲料中鱼粉的替代水平分别为0%、7.4%、14.8%、22.2%和29.6%。用实验饲料饲养暗纹东方鲀60d,研究玉米蛋白粉... 以初重为(41.26±1.09)g的暗纹东方鲀为实验鱼,配制5种玉米蛋白粉使用量为0%、5%、10%、15%、20%的实验饲料,玉米蛋白粉对饲料中鱼粉的替代水平分别为0%、7.4%、14.8%、22.2%和29.6%。用实验饲料饲养暗纹东方鲀60d,研究玉米蛋白粉替代鱼粉对暗纹东方鲀肝胰脏、头肾和脾脏组织的溶菌酶活性及其c-型溶菌酶mRNA相对表达量的影响。结果表明,(1)暗纹东方鲀肝胰脏、头肾和脾脏的溶菌酶比活力分别为9.14、42.12和40.49U/mgprot,头肾和脾脏组织中c-型溶菌酶mRNA相对表达量分别是肝胰脏的3.76和3.24倍。(2)玉米蛋白粉替代鱼粉显著影响暗纹东方鲀溶菌酶比活力。5%和10%组的肝胰脏和头肾组织溶菌酶比活力显著高于对照组(P<0.05),而15%和20%组肝胰脏和头肾组织溶菌酶比活力则显著低于对照组(P<0.05);5%和10%组的脾脏组织溶菌酶活力与对照组无显著性差异(P>0.05),而15%和20%组显著低于对照组和5%组(P<0.05)。(3)玉米蛋白粉对暗纹东方鲀c型溶菌酶基因mRNA相对表达量有显著影响(P<0.05)。肝胰脏组织中5%和10%组表达量显著高于对照组,而15%和20%组则显著低于对照;头肾组织中5%组与对照组无显著性差异,10%组显著高于对照组,而15%和20%组则显著低于对照组。脾脏组织中5%、10%组表达量与对照组无显著性差异,而15%和20%组则显著低于对照组。综上所述,适量使用玉米蛋白粉能提高暗纹东方鲀溶菌酶比活力及其c-型溶菌酶基因mRNA相对表达量,两者都在玉米蛋白粉使用量为10%时达到峰值。 展开更多

关键词 暗纹东方鲀 玉米蛋白粉 溶菌酶活性 溶菌酶基因mRNA表达

下载PDF 职称材料

黄芪多糖对仿刺参体腔细胞中溶菌酶基因表达量的影响 被引量：11

8

作者 孙永欣 徐永平 +5 位作者 汪婷婷 李亚洁 孟楠 米锐 李树英 都兴范 《水产科学》 CAS 北大核心 2009年第10期572-574,共3页

为研究黄芪多糖诱导仿刺参体腔细胞中溶菌酶基因表达的影响,从体质量(10±1.22)g的仿刺参体腔细胞中克隆出长度为395 bp的-βactin基因部分片段作为内参,利用半定量PCR法考察体内注射不同剂量黄芪多糖(APS)后仿刺参体腔细胞中i型溶... 为研究黄芪多糖诱导仿刺参体腔细胞中溶菌酶基因表达的影响,从体质量(10±1.22)g的仿刺参体腔细胞中克隆出长度为395 bp的-βactin基因部分片段作为内参,利用半定量PCR法考察体内注射不同剂量黄芪多糖(APS)后仿刺参体腔细胞中i型溶菌酶mRNA表达量变化。研究发现,5、10mg/kg剂量的APS可提高体细胞中溶菌酶mRNA表达量,其中5 mg/kg剂量组达显著水平,剂量为20 mg/kg时基本无效。 展开更多

关键词 黄芪多糖 仿刺参 溶菌酶 基因表达

下载PDF 职称材料

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及发酵条件的优化 被引量：5

9

作者 唐存多 高金湖 邬敏辰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期953-956,共4页

目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化。方法将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵... 目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化。方法将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵液上清进行SDS-PAGE分析及酶活性检测,并对培养基初始pH值、甲醇添加量、诱导温度和时间进行优化。结果人工合成的hly测序结果与GenBank中报道的核酸序列完全一致;GS115/hly经PCR鉴定,hly基因已整合入GS115基因组内;经甲醇诱导表达的GS115/hly发酵液上清具有溶菌活性,活性达30U/ml;经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15200处可见目的蛋白条带;GS115/hly的最佳诱导条件为:培养基初始pH5.0,甲醇添加量2.0%,26℃诱导108h。结论在毕赤酵母GS115中表达了具有较高酶活性的hLY,并对发酵条件进行了初步优化。 展开更多

关键词 人溶菌酶 毕赤酵母 基因表达 抗菌活性

原文传递

团头鲂g型溶菌酶基因全长cDNA的克隆与表达分析 被引量：5

10

作者 章琼 孙盛明 +3 位作者 李冰 蒋高中 朱健 戈贤平 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期41-49,共9页

为了解g型溶菌酶基因序列特征及其在团头鲂(Megahbrama amblycephala)氨氮胁迫过程中的作用,应用末端快速扩增(rapid amplication of c DNA ends,RACE)技术克隆了团头鲂的g型溶菌酶基因c DNA序列,得到全长719 bp的c DNA序列,包括71 bp的... 为了解g型溶菌酶基因序列特征及其在团头鲂(Megahbrama amblycephala)氨氮胁迫过程中的作用,应用末端快速扩增(rapid amplication of c DNA ends,RACE)技术克隆了团头鲂的g型溶菌酶基因c DNA序列,得到全长719 bp的c DNA序列,包括71 bp的5'末端非翻译区(untranslated regions,UTR)、90 bp的3'UTR和558 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF);氨基酸相似度比对显示,不同鱼类g型溶菌酶的氨基酸序列之间具有较高的保守性,系统进化树分析表明,该基因与草鱼(Ctenopharyngodon idella)g型溶菌酶亲缘关系较近。荧光定量PCR结果显示g型溶菌酶基因在团头鲂各组织中均有表达,肠道中表达量最高,同时在胁迫和恢复过程中该基因在肝和脑中的表达规律相似,均在胁迫时表达量上调,恢复后表达量相对下降,而g型溶菌酶在鳃中的表达有所不同,可推测g型溶菌酶基因参与了氨氮应激分子过程。 展开更多

关键词 团头鲂 溶菌酶 基因克隆 氨氮胁迫 组织表达

下载PDF 职称材料

虾夷马粪海胆溶菌酶基因全长cDNA的克隆与表达分析 被引量：5

11

作者 姬南京 杨芸菲 +1 位作者 丁君 常亚青 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期950-957,共8页

本实验采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到了虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)溶菌酶(LYZ)基因的全长cDNA序列。结果表明,虾夷马粪海胆LYZ基因全长为912 bp,含有1个480 bp的开放阅读框(ORF),编码159个氨基酸... 本实验采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到了虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)溶菌酶(LYZ)基因的全长cDNA序列。结果表明,虾夷马粪海胆LYZ基因全长为912 bp,含有1个480 bp的开放阅读框(ORF),编码159个氨基酸,其中第1 20个氨基酸为信号肽,蛋白计算分子量为17.69 kD,等电点为7.75。氨基酸比对分析表明,虾夷马粪海胆LYZ基因与紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)和刺参(Apostichopus japonicus)的i型LYZ基因相似百分比分别为91.4%和59.3%,并且含有i型LYZ基因的保守序列DVGSLSCGP(Y)Y(F)QIK,所以推断本实验克隆的溶菌酶为i型。采用实时定量PCR方法,以β-actin为内标,对其在虾夷马粪海胆各组织中的表达进行研究,发现LYZ基因在围口膜中表达量最高,其次是齿间肌、管足、肠、体腔液、雄性性腺和雌性性腺。利用脂多糖(LPS)刺激虾夷马粪海胆,取刺激后不同时间的海胆体腔液,对该基因的表达差异进行分析。结果表明,虾夷马粪海胆的LYZ基因在LPS刺激后8 h时表达量最高,12 h时开始逐步回落,至36 h时回落至对照组相近水平。本结果可为虾夷马粪海胆免疫学研究及抗病相关分子标记的开发提供参考依据。 展开更多

关键词 虾夷马粪海胆 溶菌酶 基因表达 脂多糖(LPs)

下载PDF 职称材料

黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达 被引量：4

12

作者 张元臣 蔡新 +2 位作者 张国强 董丽丽 王景顺 《河南农业科学》 北大核心 2019年第5期70-77,共8页

为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制,以黏虫为试验材料,利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因 Mswly的全长序列,同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达。克隆、测序后分析表明,Mswly 基因的cDNA全长为... 为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制,以黏虫为试验材料,利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因 Mswly的全长序列,同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达。克隆、测序后分析表明,Mswly 基因的cDNA全长为652 bp(GenBank登录号为MG692501),开放阅读框序列长度为426 bp,编码141个氨基酸。其编码蛋白质分子质量为 16.26 ku ,理论等电点为6.57;含有信号肽,剪切位点在第20个和21个氨基酸之间;含有溶菌酶活性所需要的谷氨酸和天冬氨酸活性位点。系统进化树分析表明,Mswly与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起,说明Mswly为C型溶菌酶。Western blotting 结果显示,Mswly重组蛋白大小约17 ku,与预期分子质量大小一致,说明 Mswly 基因在昆虫Sf9细胞系能够高效表达。综上,从黏虫脂肪体中克隆得到了1个C型溶菌酶基因 Mswly 的完整cDNA序列,并将其在草地贪夜蛾细胞系Sf9中进行了高效表达。 展开更多

关键词 黏虫 溶菌酶 基因克隆 RACE 系统发育 真核表达

下载PDF 职称材料

东方黏虫溶菌酶基因MseLYS的克隆与表达分析

13

作者 张元臣 苏圣盈 +2 位作者 张家祺 薛爽 王景顺 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期206-214,共9页

克隆东方黏虫C型溶菌酶基因MseLYS,构建MseLYS基因的原核表达载体,检测该基因在东方黏虫不同龄期和组织的表达情况,旨在为探究MseLYS基因的功能和结构提供理论参考,也为进一步研究该基因的抗菌功能和生理机制奠定基础。以东方黏虫为研... 克隆东方黏虫C型溶菌酶基因MseLYS,构建MseLYS基因的原核表达载体,检测该基因在东方黏虫不同龄期和组织的表达情况,旨在为探究MseLYS基因的功能和结构提供理论参考,也为进一步研究该基因的抗菌功能和生理机制奠定基础。以东方黏虫为研究对象,通过反转录PCR(RT-PCR)和末端快速扩增技术(RACE),获得了溶菌酶基因MseLYS的全长核苷酸序列,之后将去掉信号肽的开放阅读框架(ORF)序列连接到表达载体pET-30a(+)上,并用IPTG进行了诱导表达,最后用荧光定量PCR明确了该基因的时空表达模式。序列分析表明,此基因全长729 bp,ORF全长426 bp,5′和3′非编码区分别为75,228 bp,共编码141个氨基酸残基,其蛋白质的等电点和分子质量分别为7.72,16.13 ku。系统进化树分析结果表明,MseLYS与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起,且与其他昆虫的氨基酸序列具有高度一致性,表明MseLYS为C型溶菌酶。SDS-PAGE电泳结果表明,MseLYS在表达菌BL21(DE3)内表达的蛋白质分子质量与预期大小一致,约20 ku,说明MseLYS在大肠杆菌中能够高效表达。龄期表达谱分析表明,MseLYS基因在东方黏虫幼虫、雄虫和雌虫不同发育阶段表达量显著不同,在末龄幼虫、蛹中表达量较高,其他发育时期表达水平较低。组织表达分析结果表明,MseLYS基因在雄虫不同组织表达量存在着显著差异,其中脂肪体和胸内表达量较高;在雌虫不同组织表达量也存在显著差异,其中触角、翅和体壁中表达量较高。综上,成功克隆了东方黏虫C型溶菌酶MseLYS基因的全长序列,构建了该基因的原核表达载体并能够高效表达蛋白质,明确了该基因在不同组织和不同龄期的表达模式。 展开更多

关键词 东方黏虫 溶菌酶 基因克隆 原核表达 定量PCR

下载PDF 职称材料

不同微生物诱导柞蚕溶菌酶基因的表达分析 被引量：4

14

作者 宋佳 姜义仁 +4 位作者 王勇 孙影 杨瑞生 石生林 秦利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期695-701,共7页

溶菌酶是昆虫体液免疫的重要抗菌蛋白质,在昆虫抵御外源物质入侵过程中发挥重要作用。以柞蚕蛹为材料,采用大肠杆菌(Escherichia coli)、蛹虫草菌(Cordyceps militaris)、柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)及无菌水为诱导源,测定不同外源物... 溶菌酶是昆虫体液免疫的重要抗菌蛋白质,在昆虫抵御外源物质入侵过程中发挥重要作用。以柞蚕蛹为材料,采用大肠杆菌(Escherichia coli)、蛹虫草菌(Cordyceps militaris)、柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)及无菌水为诱导源,测定不同外源物质诱导柞蚕蛹血淋巴对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)的抑制活性,并根据柞蚕溶菌酶基因(GenBank登录号:DQ353869)设计引物,利用荧光定量PCR技术分析不同外源物质诱导柞蚕蛹血淋巴中溶菌酶基因的表达变化。4个诱导处理组的柞蚕蛹血淋巴均可以产生抑菌活性,但抑菌效果具有显著差异:诱导后72 h柞蚕蛹血淋巴产生明显抑菌效应,抑菌圈直径由小到大依次为无菌水处理组、蛹虫草菌处理组、柞蚕微孢子虫处理组、大肠杆菌处理组,且雌蛹血淋巴的抑菌活性较强。4个诱导处理组柞蚕蛹血淋巴中溶菌酶基因的表达量在诱导后4～8 h内迅速上调,雌蛹和雄蛹中的表达量分别在诱导后24h、8～12 h达到最大,其中,大肠杆菌诱导溶菌酶基因表达上调迅速,但持续时间短,而蛹虫草菌和柞蚕微孢子虫诱导溶菌酶基因的表达量高。研究结果说明柞蚕的免疫应答时间和免疫相关基因的表达水平因诱导源而不同,雌雄个体之间也有差异。 展开更多

关键词 柞蚕 溶菌酶基因 诱导表达 实时荧光定量PCR 抑菌效果

下载PDF 职称材料

墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达 被引量：4

15

作者 史黎黎 周婷婷 +4 位作者 李逸群 曾坤辉 陈兆明 王成桂 章双 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第3期8-13,共6页

克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个L... 克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个LYZ1结构域和1个含18个氨基酸的信号肽。同源性分析发现,Fm-Lyz与斑节对虾(Penaeus monodon)溶菌酶同源性最高;进化树结果显示,Fm-Lyz与不同对虾的c型溶菌酶聚为一类。实时荧光定量PCR结果显示,Fm-Lyz在所测组织中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)感染后,Fm-Lyz表达量比对照组明显上调(P<0.05),最高表达量时间分别为感染后24、12 h,暗示Fm-Lyz参与了墨吉明对虾的抗菌免疫防御。 展开更多

关键词 墨吉明对虾 c型溶菌酶 基因 克隆 表达

下载PDF 职称材料

溶菌酶及在钉螺中表达的研究进展 被引量：3

16

作者 朱秀安 黄汉韬 +2 位作者 杜康 汪安云 赵劲松 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期108-110,共3页

溶菌酶普遍存在于自然界动物、植物、微生物体内,在动物体内可作为一种天然抗感染物质,是生物体内重要的非特异性免疫因子之一。本综述总结了近年来溶菌酶分类、基因结构及功能、在钉螺体内中的表达规律和影响溶菌酶活性的因素,为进一... 溶菌酶普遍存在于自然界动物、植物、微生物体内,在动物体内可作为一种天然抗感染物质,是生物体内重要的非特异性免疫因子之一。本综述总结了近年来溶菌酶分类、基因结构及功能、在钉螺体内中的表达规律和影响溶菌酶活性的因素,为进一步探讨其在钉螺体内分布提供了基础资料。 展开更多

关键词 钉螺 溶菌酶 基因表达 细胞定位

原文传递

斑马鱼个体发育过程中的溶菌酶表达模式及其对LPS处理的应答 被引量：3

17

作者 王志平 韩彦军 +1 位作者 李亚琳 陈媛媛 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期14-18,共5页

收集斑马鱼成鱼和不同发育阶段幼鱼,用LPS处理后提取总RNA,经反转录制备cDNA并检测溶菌酶的基因表达水平,利用实时定量PCR技术研究了斑马鱼个体发育过程中溶菌酶的表达模式及其对LPS处理的应答方式.结果表明:成鱼体内溶菌酶基因表达水... 收集斑马鱼成鱼和不同发育阶段幼鱼,用LPS处理后提取总RNA,经反转录制备cDNA并检测溶菌酶的基因表达水平,利用实时定量PCR技术研究了斑马鱼个体发育过程中溶菌酶的表达模式及其对LPS处理的应答方式.结果表明:成鱼体内溶菌酶基因表达水平显著高于各发育阶段幼鱼,而且LPS处理成鱼后溶菌酶表达水平呈现出先降低后升高的应答模式.在对照组幼鱼的不同发育阶段,溶菌酶基因表达水平变化不大.在个体发育早期(3d和7d),LPS处理可引起溶菌酶表达水平持续降低.14d和21d幼鱼中溶菌酶表达水平都在LPS处理后3h开始降低,并在6h开始回升,其中21d幼鱼回升到显著高于对照组的水平,表明溶菌酶已表现出对外界刺激作出有效应答的能力.另外,28d幼鱼受LPS处理后溶菌酶基因表达的变化趋势与成鱼相似,均为先降低后升高.以上结果说明,溶菌酶在斑马鱼个体发育到21d时可对外界刺激作出有效应答,在28d时则可能发育成熟. 展开更多

关键词 斑马鱼 溶菌酶 基因表达 个体发育

下载PDF 职称材料

九香虫溶菌酶基因CcLys的克隆与特征分析 被引量：3

18

作者 张振娟 齐小浪 +2 位作者 李尚伟 喻廷君 杜娟 《山地农业生物学报》 2019年第4期1-7,共7页

九香虫Coridius chinensis是我国一种重要的药食两用昆虫,溶菌酶是一种具有抗菌作用的糖苷水解酶。该研究从九香虫中克隆了一种溶菌酶基因CcLys,其cDNA长883 bp,包含一个669 bp的开放阅读框,编码222个氨基酸。九香虫溶菌酶CcLys的N-端... 九香虫Coridius chinensis是我国一种重要的药食两用昆虫,溶菌酶是一种具有抗菌作用的糖苷水解酶。该研究从九香虫中克隆了一种溶菌酶基因CcLys,其cDNA长883 bp,包含一个669 bp的开放阅读框,编码222个氨基酸。九香虫溶菌酶CcLys的N-端包含一段由18个氨基酸组成的信号肽,成熟CcLys形成7个α-螺旋,8个β-折叠片的三维结构。同源性和聚类分析显示CcLys与茶翅蝽Halyomorpha halys溶菌酶的亲缘关系最近。基因表达谱分析表明,CcLys在九香虫的整个发育阶段都有表达,在3龄若虫中表达水平最高;该基因在所检测的成虫组织中都有表达,在脂肪体中表达水平最高。成虫被细菌诱导后,CcLys的表达水平在12 h达到峰值。该研究为进一步明确CcLys基因的功能及开发新型抗菌药物奠定基础。 展开更多

关键词 九香虫 溶菌酶 糖苷水解酶 基因表达模式

下载PDF 职称材料

低聚异麦芽糖和酵母细胞壁对中华鳖肝脏中溶菌酶基因表达的半定量分析 被引量：2

19

作者 刘凯 朱丽敏 +3 位作者 蔡丽娟 姚桂桂 许宝青 刘新轶 《安徽农业科学》 CAS 2012年第8期4582-4585,共4页

[目的]探讨低聚异麦芽糖和酵母细胞壁对中华鳖肝脏中溶菌酶基因表达的影响。[方法]利用CODEHOP设计简并引物,通过RT-PCR克隆中华鳖溶菌酶基因,然后通过半定量PCR分析低聚异麦芽糖和酵母细胞壁对中华鳖溶菌酶基因在肝脏中表达量的影响。... [目的]探讨低聚异麦芽糖和酵母细胞壁对中华鳖肝脏中溶菌酶基因表达的影响。[方法]利用CODEHOP设计简并引物,通过RT-PCR克隆中华鳖溶菌酶基因,然后通过半定量PCR分析低聚异麦芽糖和酵母细胞壁对中华鳖溶菌酶基因在肝脏中表达量的影响。[结果]通过克隆中华鳖溶菌酶基因,获得303 bp的溶菌酶基因片段,其GenBank登录号HQ437284,与GenBank登录号Q7LZQ1.3的中华鳖C型溶菌酶氨基酸序列同源性为75%。半定量分析结果表明,低聚异麦芽糖可显著提高中华鳖溶菌酶基因在肝脏中的表达量,而酵母细胞壁对中华鳖溶菌酶基因片段在肝脏中的表达量的影响不显著。[结论]该研究可为低聚异麦芽糖和酵母细胞壁在中华鳖养殖中的科学应用以及绿色环保添加剂的开发提供理论依据。 展开更多

关键词 中华鳖 溶菌酶 基因表达 低聚异麦芽糖 酵母细胞壁

下载PDF 职称材料

犬溶菌酶基因的克隆、原核表达及产物活性分析 被引量：2

20

作者 朱忠珂 王建华 +2 位作者 汪儆 张春雷 蔡青和 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期55-59,共5页

为了探讨重组犬溶菌酶的活性及临床应用前景,人工合成犬溶菌酶基因,构建其原核重组表达载体pPROHTa-rcLYZ,进行原核表达并对表达产物进行活性分析。结果表明,合成的犬溶菌酶基因全长396 bp,编码132 aa;构建的表达载体pPROHTa-rcLYZ含有... 为了探讨重组犬溶菌酶的活性及临床应用前景,人工合成犬溶菌酶基因,构建其原核重组表达载体pPROHTa-rcLYZ,进行原核表达并对表达产物进行活性分析。结果表明,合成的犬溶菌酶基因全长396 bp,编码132 aa;构建的表达载体pPROHTa-rcLYZ含有犬溶菌基因完整的ORF;重组犬溶菌酶的相对分子质量为16 ku;重组犬溶菌酶约占全菌总蛋白32％,纯化后占全菌可溶性蛋白的95％;重组犬溶菌酶最适pH值为6．2,最适温度为38℃,对溶壁微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有较强的溶菌活力,对铜绿假单胞菌、链球菌、枯草杆菌等有一定的抑制作用,对白色念珠菌无抑制作用,对人工感染的犬大肠杆菌病有治疗作用。表明本试验获得了有活性的、具有一定潜在应用价值的犬溶菌酶。 展开更多

关键词 犬溶菌酶基因 犬溶菌酶 原核表达

下载PDF 职称材料