CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选 被引量：19

1

作者 王瑾 马肖容 张王刚 《中国医药导报》 CAS 2018年第23期13-16,182,共4页

目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺... 目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺激指数进行方差分析。结果 CCK-8检测人PBMC增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为2.5×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h;检测小鼠脾细胞增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为5.0×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h。结论 CCK-8法便捷、灵敏、重复性好,可作为检测淋巴细胞增殖的稳定方法。本研究建立的CCK-8最佳实验条件可为免疫调节作用的药物体外筛选和免疫药理学作用的研究提供依据。 展开更多

关键词 CCK-8 PBMC 淋巴细胞增殖 正交实验

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强化胎盘因子对细胞因子产生的影响 被引量：6

2

作者 张京田 丁晓红 李选社 《西安医科大学学报》 CSCD 1995年第3期238-240,共3页

在观察了强化胎盘因子对淋巴细胞增殖试验影响的基础上,应用CTLL-2和7TD_1两种细胞株对强化胎盘因子刺激后的小鼠脾脏细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平分别进行了实验研究。结果表明,强化胎盘因子促进T淋巴细胞增殖... 在观察了强化胎盘因子对淋巴细胞增殖试验影响的基础上,应用CTLL-2和7TD_1两种细胞株对强化胎盘因子刺激后的小鼠脾脏细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平分别进行了实验研究。结果表明,强化胎盘因子促进T淋巴细胞增殖,使小鼠脾脏细胞分泌IL-2和IL-6水牛均明显提高,有增强机体免疫功能的作用。 展开更多

关键词 强化胎盘因子 淋巴细胞增殖 白细胞介素

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医用重组人源胶原蛋白功能敷料体外免疫原性评价

3

作者 王国伟 侯丽 +3 位作者 秦越 王焱 王鸾鸾 刘成虎 《食品与药品》 CAS 2024年第2期153-157,共5页

目的对一种医用重组人源胶原蛋白功能敷料的体外免疫原性进行评价。方法以细胞培养液为浸提介质,按0.2 g/ml的比例浸提制备试验液,进行体外淋巴细胞增殖试验、人细胞系激活试验(h-CLAT)、细胞炎症因子含量检测。结果体外淋巴细胞增殖试... 目的对一种医用重组人源胶原蛋白功能敷料的体外免疫原性进行评价。方法以细胞培养液为浸提介质,按0.2 g/ml的比例浸提制备试验液,进行体外淋巴细胞增殖试验、人细胞系激活试验(h-CLAT)、细胞炎症因子含量检测。结果体外淋巴细胞增殖试验中,100%,50%,25%3种浓度试验液的淋巴细胞增殖率分别为105%,111%,86.3%,与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。h-CLAT结果显示,试验组THP-1细胞表面分子CD54 RFI值<200,CD86 RFI值<150,判定为阴性结果。试验组细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)的含量与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论医用重组人源胶原蛋白功能敷料有良好的生物相容性。 展开更多

关键词 医用重组人源胶原蛋白 生物相容性 淋巴细胞增殖试验 免疫原性 人细胞系激活试验(h-CLAT)

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动物源性生物材料体外淋巴细胞增殖试验方法的建立 被引量：5

4

作者 陈亮 穆钰峰 +3 位作者 邵安良 魏丽娜 屈树新 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1337-1346,共10页

目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法。方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞... 目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法。方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞增殖试验方法。采用牛心包组织(原材料)的浸提液和匀浆液,作为抗原特异性的阳性对照组考察样品前处理方式对试验体系的影响,并用流式细胞仪分析增殖后的淋巴细胞亚型百分比,考察样品制备方式对淋巴细胞亚型增殖影响的差异。结果:本试验中小鼠脾淋巴细胞体外增殖试验条件确定为每孔接种6×105个淋巴细胞,阳性对照孔Con A浓度为2.5μg·mL-1,培养时间为3 d。牛心包浸提液和匀浆液的淋巴细胞增殖率均约为细胞对照组的2倍,两者的淋巴细胞亚型百分比变化不同于Con A组,未出现T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比的增加。浸提液组与匀浆液组的活化NK细胞和NKT细胞百分比与对照组相比均明显升高,但浸提液组的升高幅度数倍高于匀浆液组,且仅浸提液组NK细胞百分比与对照相比出现了明显倍增。结论:本研究建立了以动物组织(原材料)为抗原特异性阳性对照的体外淋巴细胞增殖试验方法。动物组织(原材料)浸提和匀浆样品均可以产生淋巴细胞增殖阳性结果,其促进淋巴细胞增殖的机理(亚型分类)不同于Con A等有丝分裂原,提示使用作为动物组织(原材料)阳性对照更能反映试验体系的敏感性。 展开更多

关键词 动物组织(原材料) 动物源性生物材料 淋巴细胞增殖试验 抗原特异性 流式细胞术

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不同种属小鼠用于淋巴细胞增殖试验的比较研究 被引量：4

5

作者 陈亮 穆钰峰 +3 位作者 邵安良 魏丽娜 屈树新 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1347-1353,共7页

目的:对使用不同种属小鼠进行脾淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性进行研究。方法:分别获取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(简称C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴细胞,在确定脾淋巴细胞数量与CCK8吸收度的线性... 目的:对使用不同种属小鼠进行脾淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性进行研究。方法:分别获取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(简称C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴细胞,在确定脾淋巴细胞数量与CCK8吸收度的线性范围后,设立阳性对照组(刀豆蛋白A,Con A)、不同稀释度的动物原材料匀浆液和脱细胞生物材料匀浆液等试验组,使用CCK8检测淋巴细胞增殖,流式细胞术测定淋巴细胞亚型百分比,以确定BALB/c小鼠、野生型C57小鼠和Gal抗原缺失小鼠在体外淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性。结果:C57小鼠脾淋巴细胞数量和CCK8的吸收度的线性范围要明显大于BALB/c小鼠,而BALB/c小鼠线性曲线的斜率明显大于C57小鼠。从CCK8检测的淋巴细胞增殖结果看,BALB/c小鼠与C57小鼠相比,2.5μg·mL-1的Con A对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均出现明显刺激作用;牛跟腱(含低水平的Gal抗原)匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均显示刺激作用,并显示出量效关系;不同稀释度的胶原海绵(牛跟腱来源)匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均未显示刺激作用,表现了一致的结果,说明没有淋巴细胞促增殖作用。另外,来源于Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠的脾脏淋巴细胞对Con A、牛心包(含有高水平的Gal抗原)匀浆液均表现出强的增殖反应和相似的反应强度。流式细胞术检测结果显示牛心包匀浆原液组在Gal抗原缺失小鼠仅显示活化B细胞百分比与对照组相比有统计学显著性差异,而在野生型C57小鼠组其活化B细胞、活化T细胞、活化NK细胞、NKT细胞、CD4 T细胞百分比与对照组相比均有统计学显著性差异。结论:CCK8检测的各试验组淋巴细胞增殖率结果在C57小鼠与BALB/c小鼠、Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠间具有可比性,表明这些种属的小鼠均可用于体外淋巴细胞增殖试验。 展开更多

关键词 淋巴细胞增殖试验 BALB/C小鼠 C57BL/6小鼠 Gal抗原缺失小鼠 GGTA1基因敲除 动物源性生物材料

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犬红细胞培养上清液对淋巴细胞增殖转化的影响 被引量：2

6

作者 张佩君 白丽丽 +1 位作者 乔琦 陈德坤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期51-54,59,共5页

无菌采取犬血、肝素抗凝、分离出红细胞,制备不同浓度的红细胞悬液,接种24孔板中进行培养,在培养不同时间分别收集红细胞培养上清液,采用淋巴细胞增殖转化试验,检测其单独及协同不同丝裂原(PHA-P、ConA和LPS)对犬淋巴细胞增殖转化的影响... 无菌采取犬血、肝素抗凝、分离出红细胞,制备不同浓度的红细胞悬液,接种24孔板中进行培养,在培养不同时间分别收集红细胞培养上清液,采用淋巴细胞增殖转化试验,检测其单独及协同不同丝裂原(PHA-P、ConA和LPS)对犬淋巴细胞增殖转化的影响,淋转结果用MTT法测定。结果显示,无论单独或是协同不同丝裂原(PHA- P、ConA和LPS),红细胞培养上清液对淋巴细胞均有明显的促增殖转化作用(P<0．05);单独及协同丝裂原PHA-P、ConA和LPS刺激淋巴细胞时,红细胞浓度分别为1×108,1×109,5．0×107和1×108mL1,培养时间分别为56,72, 56和72 h的红细胞培养上清效果最佳。表明,犬红细胞培养上清液对犬淋巴细胞的增殖转化有明显的促进作用。 展开更多

关键词 犬 红细胞培养上清液 淋巴细胞转化增殖试验 MTT法

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重组胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达与免疫活性检测 被引量：2

7

作者 马凤龙 崔雪志 +3 位作者 刘焕珍 刘焕奇 姜丽丽 任庆娜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1448-1451,共4页

根据大肠杆菌密码子偏嗜性修改、合成胸腺肽alpha 1(Tα1)基因并连接到pET32α(+)中构建融合表达载体pET32α-Tα1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,经15%SDS-PAGE检测,Tα1获得可溶性表达。将诱导表达菌高压均质破碎后进行亲和层析纯化... 根据大肠杆菌密码子偏嗜性修改、合成胸腺肽alpha 1(Tα1)基因并连接到pET32α(+)中构建融合表达载体pET32α-Tα1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,经15%SDS-PAGE检测,Tα1获得可溶性表达。将诱导表达菌高压均质破碎后进行亲和层析纯化,洗脱蛋白峰经脱盐处理后进行免疫活性测定。通过脾淋巴细胞转化试验测定纯化重组Tα1和人用Tα1的活性,结果显示,重组表达的Tα1具有明显的促进淋巴细胞增殖的活性;脱E受体法E玫瑰花环试验测定结果显示,制备的重组Tα1的E玫瑰花结百分率高于空白对照组14.3%以上(胸腺肽溶液的质量标准为提高10%),能够明显增强T细胞的活性。 展开更多

关键词 胸腺肽Α1 原核表达 可溶性表达 亲和层析 淋巴细胞增殖试验 E玫瑰花环试验

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骆越壮酒对正常小鼠免疫功能的影响 被引量：2

8

作者 李耀燕 张曼 +4 位作者 闫国跃 白燕远 杜俊芳 谢阳姣 李彤 《中国中医药科技》 CAS 2019年第2期185-188,共4页

目的:观察骆越壮酒对正常小鼠免疫功能的影响。方法:小鼠灌胃不同剂量的骆越壮酒28 d后,采用绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠迟发型超敏反应(足跖增厚法)以及ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)检测细胞免疫功能;采用抗体生成细胞(PFC)和... 目的:观察骆越壮酒对正常小鼠免疫功能的影响。方法:小鼠灌胃不同剂量的骆越壮酒28 d后,采用绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠迟发型超敏反应(足跖增厚法)以及ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)检测细胞免疫功能;采用抗体生成细胞(PFC)和血清溶血素测定方法测定体液免疫情况;以小鼠碳廓清实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定单核巨噬细胞免疫功能。结果:骆越壮酒可显著促进小鼠的迟发型超敏反应和脾淋巴细胞的增值能力(P<0.01);显著提高SRBC免疫后的正常小鼠抗体生成细胞(PFC)数量和血清溶血素含量(P<0.01);显著提高小鼠碳廓清吞噬指数和腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数(P<0.01)。结论:骆越壮酒对正常小鼠特异性和非特异性免疫机能均有显著的调节作用。 展开更多

关键词 骆越壮酒 免疫功能 迟发型超敏反应 淋巴细胞增殖 抗体生成细胞 血溶血素 碳廓清实验 吞噬率和吞噬指数 小鼠

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流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达 被引量：1

9

作者 罗俊 王欢 +9 位作者 戴军 左斌 裴德翠 丰峰 李婉宜 邝玉 王保宁 蒋忠华 李虹 李明远 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第1期8-11,F0002,共5页

目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段... 目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段多肽接头Gly4Ser融合为SP-RB、SP-RBT和SP-RBT,将其分别插入pcD-NA3.1(+)载体,构建质粒,鉴定正确后转染MDCK细胞,RT-PCR、免疫荧光、MTT检测该质粒的表达和分泌。结果融合基因真核表达质粒构建成功,在MDCK细胞中成功表达,转染细胞培养上清能刺激淋巴细胞增殖。结论SP-RB、SP-RBT、SP-RBB真核表达载体成功构建,表达产物能刺激淋巴细胞增值,为流感病毒唾液酸受体结合部位的T、B细胞表位免苗研究提供初步依据,也为流感核酸疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒 T细胞表位 B细胞表位 免疫荧光技术 淋巴细胞增殖试验

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软骨多糖对荷瘤小鼠免疫功能影响的初步研究 被引量：5

10

作者 刘安军 车伟 +1 位作者 张旭 张国蓉 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第2期48-51,F0003,共5页

目的研究软骨多糖对荷瘤小鼠的作用,并探讨其对免疫功能的影响。方法采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,然后随机将小鼠分为生理盐水对照组和软骨多糖给药组,连续腹腔注射生理盐水或软骨多糖,分别测量ConA和LPS刺激下小鼠脾细胞... 目的研究软骨多糖对荷瘤小鼠的作用,并探讨其对免疫功能的影响。方法采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,然后随机将小鼠分为生理盐水对照组和软骨多糖给药组,连续腹腔注射生理盐水或软骨多糖,分别测量ConA和LPS刺激下小鼠脾细胞淋巴增殖情况、外周血NK细胞的活性,及外周血单个核细胞E花环形成率。结果软骨多糖能刺激淋巴细胞增殖,明显提高NK细胞的活性,提高E花环形成率。结论软骨多糖能通过增强S180荷瘤小鼠的免疫功能而抑制肿瘤的生长。 展开更多

关键词 软骨多糖 小鼠肉瘤S180 脾细胞增殖 NK细胞活性 E花环

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金葡菌肠毒素促鸡淋巴细胞增殖及增强疫苗效价的初步探讨 被引量：2

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作者 冯永宁 张惠文 +2 位作者 徐明恺 徐威 张成刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期165-168,共4页

为了探讨了金黄色葡萄球菌肠毒素C2(rSEC2)作为家禽免疫增强剂的可行性,利用MTT比色法,研究了rSEC2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞的增殖影响;利用微量凝集抑制试验(HI),研究了连续口服rSEC2对家禽疫苗免疫效果的影响。试验结果表明,最低... 为了探讨了金黄色葡萄球菌肠毒素C2(rSEC2)作为家禽免疫增强剂的可行性,利用MTT比色法,研究了rSEC2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞的增殖影响;利用微量凝集抑制试验(HI),研究了连续口服rSEC2对家禽疫苗免疫效果的影响。试验结果表明,最低浓度为1 ng/mL的rSEC2即可在无ConA情况下显著提高淋巴细胞活性,浓度梯度组间差异显著,存在剂量依赖性;对点眼免疫新城疫(ND)减毒疫苗的鸡群进行抗体检测结果显示,给药组明显高于对照组,且延长了抗体持续时间。证明了rSEC2可有效激活家禽免疫系统,并有可能作为免疫增强剂而应用于家禽饲养。 展开更多

关键词 鸡 金黄色葡萄球菌肠毒素C2 淋巴细胞增殖 血凝抑制试验

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