以丝瓜基因组DNA为模板,采用正交试验设计,对SRAP(sequence related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)反应体系中的4种关键因素(dNTPs、Taq酶、引物、模板)进行优化,建立了适合于丝瓜基因组SRAP分子标记的扩增体系:反应总体...以丝瓜基因组DNA为模板,采用正交试验设计,对SRAP(sequence related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)反应体系中的4种关键因素(dNTPs、Taq酶、引物、模板)进行优化,建立了适合于丝瓜基因组SRAP分子标记的扩增体系:反应总体积10μl,其中含Taq酶1.0U、模板DNA 50.00ng、dNTPs 0.3mmol/L、引物0.30μmol/L。该体系能很好地满足丝瓜基因组SRAP标记的要求,可应用于丝瓜的分子生物学研究。展开更多
文摘以丝瓜基因组DNA为模板,对SRAP反应中主要五个影响因素d NTP浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、DNA模板浓度、Mg^(2+)浓度进行优化,建立丝瓜SRAP-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为25μL SRAP体系。25μL SRAP体系为:75 ng DNA,0.2 mmol/L d NTP,1.25 U Taq酶,0.16μmol/L的单条引物,2.0 mmol/L Mg^(2+),2.5μL 10×Buffer。选用33个丝瓜品种对所确立扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高、重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的SRAP分子标记。
