目的:探讨应用活细胞工作站测量大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后细胞体积的效果。方法:取新生24h内Sprague-Dawley乳鼠,取出乳鼠脊髓采用胰酶消化及差速粘附法分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并进行体外扩增培养。将第4代成熟的...目的:探讨应用活细胞工作站测量大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后细胞体积的效果。方法:取新生24h内Sprague-Dawley乳鼠,取出乳鼠脊髓采用胰酶消化及差速粘附法分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并进行体外扩增培养。将第4代成熟的星形胶质细胞进行氧糖剥夺/复氧处理,并分为4组:A组(不做糖氧剥夺及复氧处理),B组(糖氧剥夺6h,复氧12h),C组(糖氧剥夺6h,复氧24h),D组(糖氧剥夺6h,复氧48h)。通过活细胞工作站扫描检测计算各组细胞的体积,利用光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构变化,通过Western blot测定其水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)表达变化来进一步验证活细胞工作站测量细胞体积的准确性。结果:利用活细胞工作站检测体积,与A组细胞2810.19±306.11μm3相比,B组细胞体积4311.53±407.73μm3明显高于A组(P<0.01),C组细胞体积6248.86±702.11μm3为到最大值,D组细胞体积4541.33±503.17μm3,细胞体积较C组有所下降,但仍明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01)。光镜下观察细胞B组出现肿胀、折光性增强,C组细胞水肿达到高峰,D组水肿虽有缓解,但仍很明显;透射电镜下观察B组可见细胞器开始肿胀,C组细胞肿胀更加明显,出现线粒体嵴发生断裂等表现,D组水肿稍有缓解,但仍很明显。Western blot 结果显示,A组细胞AQP4蛋白表达为(12.37±0.85)%,B组细胞AQP4蛋白表达为(34.17±2.07)%,C组细胞AQP4蛋白表达(43.57±1.75)%,D组细胞AQP4蛋白表达(32.26±1.37)%,与A组细胞相比,B组、C组、D组明显高于A组(P<0.01),与C组细胞相比,B组、D组明显低于C组(P<0.01)。结论:活细胞工作站能较为准确地检测大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后细胞体积,可作为一种常规的检测手段运用于星形胶质细胞体积测量。展开更多
Dear Editor,CRISPR-Cas9 （clustered regularly interspaced short palin- dromic repeats-CRISPR associated） systems have been harnessed for kinds of genome manipulation, including gene editing, transcription regulation,...Dear Editor,CRISPR-Cas9 （clustered regularly interspaced short palin- dromic repeats-CRISPR associated） systems have been harnessed for kinds of genome manipulation, including gene editing, transcription regulation, and chromosome loci imaging （Dominguez et al., 2016; Komor et al., 2017）. A typical engineered CRISPR-Cas9 system is composed of a Cas9 protein and a single guide RNA （sgRNA）, which could form a protein/RNA complex to recognize and cleave DNA sequence （Hsu et al., 2014; Wright et al., 2016）.展开更多
文摘目的:探讨应用活细胞工作站测量大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后细胞体积的效果。方法:取新生24h内Sprague-Dawley乳鼠,取出乳鼠脊髓采用胰酶消化及差速粘附法分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并进行体外扩增培养。将第4代成熟的星形胶质细胞进行氧糖剥夺/复氧处理,并分为4组:A组(不做糖氧剥夺及复氧处理),B组(糖氧剥夺6h,复氧12h),C组(糖氧剥夺6h,复氧24h),D组(糖氧剥夺6h,复氧48h)。通过活细胞工作站扫描检测计算各组细胞的体积,利用光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构变化,通过Western blot测定其水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)表达变化来进一步验证活细胞工作站测量细胞体积的准确性。结果:利用活细胞工作站检测体积,与A组细胞2810.19±306.11μm3相比,B组细胞体积4311.53±407.73μm3明显高于A组(P<0.01),C组细胞体积6248.86±702.11μm3为到最大值,D组细胞体积4541.33±503.17μm3,细胞体积较C组有所下降,但仍明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01)。光镜下观察细胞B组出现肿胀、折光性增强,C组细胞水肿达到高峰,D组水肿虽有缓解,但仍很明显;透射电镜下观察B组可见细胞器开始肿胀,C组细胞肿胀更加明显,出现线粒体嵴发生断裂等表现,D组水肿稍有缓解,但仍很明显。Western blot 结果显示,A组细胞AQP4蛋白表达为(12.37±0.85)%,B组细胞AQP4蛋白表达为(34.17±2.07)%,C组细胞AQP4蛋白表达(43.57±1.75)%,D组细胞AQP4蛋白表达(32.26±1.37)%,与A组细胞相比,B组、C组、D组明显高于A组(P<0.01),与C组细胞相比,B组、D组明显低于C组(P<0.01)。结论:活细胞工作站能较为准确地检测大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后细胞体积,可作为一种常规的检测手段运用于星形胶质细胞体积测量。
文摘Dear Editor,CRISPR-Cas9 （clustered regularly interspaced short palin- dromic repeats-CRISPR associated） systems have been harnessed for kinds of genome manipulation, including gene editing, transcription regulation, and chromosome loci imaging （Dominguez et al., 2016; Komor et al., 2017）. A typical engineered CRISPR-Cas9 system is composed of a Cas9 protein and a single guide RNA （sgRNA）, which could form a protein/RNA complex to recognize and cleave DNA sequence （Hsu et al., 2014; Wright et al., 2016）.
