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从脂肪抽出物的脂类和液体部分提取脂肪来源干细胞的细胞生物学研究 被引量：9
1
作者 朱茗 高建华 鲁峰 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期138-144,共7页
目的探索从抽吸物中脂质和液体部分分离、体外培养脂肪组织来源干细胞的新方法，并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定比较。方法抽脂术后抽吸物分解为脂质和液体部分。脂质和液体部... 目的探索从抽吸物中脂质和液体部分分离、体外培养脂肪组织来源干细胞的新方法，并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定比较。方法抽脂术后抽吸物分解为脂质和液体部分。脂质和液体部分分别用酶消化法和直接离心过滤法分离、培养ASCs，观察其在体外培养的形态学和生物学特点；MTr比色法测细胞活性，统计学分析；流式细胞仪测定细胞周期；随机选取3、4、6、8代做丫啶橙染色检测细胞的衰老；用流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达；成脂、成骨定向诱导分化，油红0染色、茜素红染色定性。结果从吸脂抽吸物的脂质和液体两部分中都能培养出大量的ASCs，分别为PLA和LAF，呈成纤维细胞样贴壁生长，MTr测定细胞活性及细胞周期研究发现PLA、LAF这两种细胞的活力与增殖能力是非常相似的；丫啶橙染色3、4、6、8代细胞无明显衰老；流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CIM4、CD34的表达均呈阳性；免疫化学染色发现vm因子、CD31、CD105、SMA表达阳性；成脂诱导分化2周后，细胞内可见有大量脂滴，油红0染色可见胞浆内有大量红染颗粒。成骨诱导2周后，细胞可见白色矿化钙盐沉积，茜素红染色可见成骨细胞红染。结论本实验建立了一种自人体脂肪抽吸物中脂质和液体部分分离和培养ASCs的新方法，经济简便实用，从成人脂肪抽吸物液体部分中也可以分离得到大量的可为脂肪组织工程所利用的ASCs，其细胞量与脂质来源的ASCs的量基本相同。贴壁的LAF与PLA细胞在细胞的生长动力学、形态学、细胞衰老、表面标志物和分化能力等方面具有非常相似的特性，都具有很强的增殖活性且衰老率较低，能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂、成骨多向诱导分化。这种经过最 展开更多
关键词 脂肪组织来源干细胞 脂肪组织工程 液态脂肪抽吸物
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脂肪组织来源干细胞的细胞生物学研究 被引量：4
2
作者 朱茗 高建华 +1 位作者 鲁峰 李华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期518-523,共6页
目的探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色... 目的探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红“O”染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;MTT比色法活性测定均证实ASCs具有很强的增殖活性,细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。丫啶橙染色3、4、6、8代无明显衰老。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均成阳性;HLA-DR、CD133表达为阴性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红“0”染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。 展开更多
关键词 脂肪组织来源干细胞(ASCs) 脂肪组织工程 脂肪抽吸物
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脂肪组织来源干细胞的分离培养及鉴定 被引量：1
3
作者 傅荣 游晓波 鲁峰 《实用医院临床杂志》 2011年第6期73-76,共4页
目的探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的分离、培养、分化和鉴定的方法,为进一步的实验研究提供理论依据。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测细胞活性并绘制... 目的探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的分离、培养、分化和鉴定的方法,为进一步的实验研究提供理论依据。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均呈阳性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34,CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"O"染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。 展开更多
关键词 脂肪组织来源干细胞 脂肪组织工程 脂肪抽吸物 分离 培养
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