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bFGF/Math1基因表达载体的构建及在大鼠耳蜗中的表达 被引量:10
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作者 郭维 杨仕明 翟所强 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2005年第2期107-109,共3页
目的 构建含有碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和Math1基因的真核共表达载体 ,并用阳离子脂质体包裹将其导入大鼠耳蜗 ,观察其表达情况。方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切 ,构建并鉴定PRK5 -bFGF ... 目的 构建含有碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和Math1基因的真核共表达载体 ,并用阳离子脂质体包裹将其导入大鼠耳蜗 ,观察其表达情况。方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切 ,构建并鉴定PRK5 -bFGF -Math1真核共表达载体。经脂质体介导转染大鼠耳蜗后 ,用逆转录 -聚合酶链反应 (reversetranscription -polymerasechainreaction ,RT -PCR)法检测其表达情况。结果 阳性重组子经酶切鉴定含有bFGF和Math1基因 ,RT -PCR结果表明bFGF和Math1在耳蜗中均有表达。结论 本文成功地构建了含有bFGF和Math1基因的真核共表达载体 ,且在哺乳动物耳蜗中均有表达。 展开更多
关键词 基因表达 脂质体 碱性成纤维细胞生长因子 Mathl质粒
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脂质体介导哺乳动物细胞转染的改良方法 被引量:6
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作者 尹晓光 吴秀丽 +3 位作者 万敏 王艳媚 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期260-262,共3页
目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测... 目的提高脂质体介导的细胞转染效率。方法在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测。结果流式细胞术检测显示,通过改良法获得转染pcDNA3-GFP-PSA质粒的B16、RM1和EL4细胞,表达报告蛋白GFP的阳性百分率(26%、24%和40%)高于传统法转染的细胞(16%、16%和18%)。改良法转染的B16、RM1和EL4经过克隆筛选、液氮冻存、水浴复苏和体外连续培养2周后,外源基因报告蛋白GFP表达的阳性百分率分别为77%、69%和83%。在转染流程上,通过改良法获得单克隆转染细胞株的时间明显缩短。结论改良的脂质体转染方法结合细胞克隆技术,能在最短时间内获得高表达外源基因的转染细胞株。 展开更多
关键词 脂质体 改良方法 pcDNA—GFP—PSA 共聚焦显微镜 流式细胞术
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电穿孔转染法与脂质体转染法对K562和HepG2细胞转染效率的影响 被引量:7
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作者 隋娟 张高丽 +1 位作者 李平法 于海川 《新乡医学院学报》 CAS 2015年第8期698-701,共4页
目的通过对电穿孔转染法和脂质体转染法在K562、HepG2细胞中的转染效率比较,探索最佳的细胞转染方法和条件。方法以K562、Hep G2细胞为研究对象,采用电穿孔转染法和脂质体转染法分别转染带有绿色荧光的质粒PEGFP-N1和无荧光的质粒p CDNA... 目的通过对电穿孔转染法和脂质体转染法在K562、HepG2细胞中的转染效率比较,探索最佳的细胞转染方法和条件。方法以K562、Hep G2细胞为研究对象,采用电穿孔转染法和脂质体转染法分别转染带有绿色荧光的质粒PEGFP-N1和无荧光的质粒p CDNA3.1、p CDNA3.1-EOS基因,荧光显微镜下观察PEGFP-N1转染效果,计算转染效率;收集各培养组细胞,裂解后提取蛋白,采用Western blot方法检测基因转染后的蛋白表达。结果当脉冲20 ms、电阻90Ω、电压150 V时进行电穿孔,转染质粒PEGFP-N1,K562细胞可以得到较高的转染率;当脉冲20 ms、电阻90Ω、电压250 V时,转染质粒PEGFP-N1,Hep G2细胞可以得到较高的转染效率。在K562细胞和Hep G2细胞中,电穿孔转染法的转染效率均显著高于脂质体转染法(P<0.05)。电穿孔转染法转染PEGFP-N1后K562细胞和Hep G2细胞的存活率显著低于脂质体法(P<0.05)。Western blot结果显示电穿孔转染法蛋白表达量高于脂质体转染法(P<0.05)。结论最佳条件下电穿孔转染法是一种高效的基因转染方法,对比较难转染的悬浮细胞效果更佳。 展开更多
关键词 电穿孔 脂质体转染 K562细胞 HepG2细胞
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脂质体介导鸡精子与外源DNA的结合 被引量:4
4
作者 刘红林 陈宜峰 +2 位作者 姜志华 丁波 黄月英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期297-299,共3页
脂质体介导鸡精子与外源DNA的结合刘红林1陈宜峰1姜志华2丁波2黄月英2(南京师范大学生物系南京210097)(南京农业大学动物科学系南京210095)2精子充当外源DNA的载体提出了一条新的基因转移途径。由于这个构... 脂质体介导鸡精子与外源DNA的结合刘红林1陈宜峰1姜志华2丁波2黄月英2(南京师范大学生物系南京210097)(南京农业大学动物科学系南京210095)2精子充当外源DNA的载体提出了一条新的基因转移途径。由于这个构想方法学非常简单,利用人工授精程序... 展开更多
关键词 lipofectin SOUTHERN BLOT
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Lipofectin介导tk基因转移使B16细胞获得对GCV的敏感性 被引量:5
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作者 伍志坚 吴小兵 +2 位作者 彭朝晖 赵健 徐钤 《第一军医大学学报》 CSCD 1995年第3期181-184,共4页
用Lipofectin将真核表达质粒pCMV-HygroTK导入小鼠黑色素瘤细胞系B16,用潮霉素B筛选出阳性克隆。聚合酶链式反应检测tk基因的存在,并在倒置显微镜下动态观察了核苷类似物丙氧乌苷(GCV)对tk ̄-和... 用Lipofectin将真核表达质粒pCMV-HygroTK导入小鼠黑色素瘤细胞系B16,用潮霉素B筛选出阳性克隆。聚合酶链式反应检测tk基因的存在,并在倒置显微镜下动态观察了核苷类似物丙氧乌苷(GCV)对tk ̄-和tk ̄+的B16细胞的作用。结果表明,tk ̄+的B16细胞获得了对GCV的敏感性,tk基因/GCV使细胞死亡具有“旁观者效应”。 展开更多
关键词 TK 基因 黑色素瘤 丙氧鸟苷 lipofectin
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Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长 被引量:1
6
作者 程黎阳 宋新明 +1 位作者 高毅 杨继震 《广东医学》 CAS CSCD 2000年第1期11-13,共3页
目的 研究阳离子脂质体Lipofectin(Lip)介导的DNA 聚合酶α(DNA- polα) 反义寡核苷酸(ASODN)体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人pol α催化亚基mRNA 翻译起始区18 个碱基互补的寡... 目的 研究阳离子脂质体Lipofectin(Lip)介导的DNA 聚合酶α(DNA- polα) 反义寡核苷酸(ASODN)体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人pol α催化亚基mRNA 翻译起始区18 个碱基互补的寡核苷酸(ODN) ,与Lip 混合制备Lip+ ODN复合物,作用于MGC-803、SGC-7901 人胃癌细胞24 h 后,细胞换液,继续培养24 h,用噻唑蓝(MTT)比色法测细胞存活状态,流式细胞术(FCM)分析癌细胞DNA含量。结果 10 μg/mlpolα特异的ASODN在Lip 介导下可显著抑制人胃癌细胞的DNA复制和细胞增殖,正义ODN(SODN) 无此作用。结论 DNA- polα特异ASODN可用于胃癌的基因治疗, 阳离子脂质体可促进ASODN大量进入癌细胞, 增强其生物效应。 展开更多
关键词 DNA聚合酶α 胃肿瘤 lipofectin ASODN
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影响水牛胎儿成纤维细胞转染效率的因素 被引量:4
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作者 崔奎青 刘庆友 +2 位作者 汤刚彬 谢体三 石德顺 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2008年第19期16-19,共4页
实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40~50V/m时,细胞的死亡率处于20%~50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞... 实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40~50V/m时,细胞的死亡率处于20%~50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞。将脂质体与DNA的比例控制在8μL:2μg,可获得较高的转染率。相同培养条件下,脂质体法比电穿孔能获得更多的转基因抗性细胞集落,转染DNA的纯度和细胞的状态也明显影响脂质体法的转染效率。 展开更多
关键词 转基因 细胞转染 电穿孔法 脂质体法
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鸡卵清蛋白基因启动子调控GFP基因在鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞的表达 被引量:4
8
作者 逄越 李庆伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期154-158,共5页
特异性扩增家鸡卵清蛋白基因上游调控序列 1340bp~ +16 5 5bp片段和第一内含子 +49bp~ +16 5 5bp片段 ,去除pG FP N2载体自身的CMV启动子 ,分别构建了P2 9koval GFP和P1 5koval GFP两种表达载体 ,经测序和酶切鉴定表达载体构建正... 特异性扩增家鸡卵清蛋白基因上游调控序列 1340bp~ +16 5 5bp片段和第一内含子 +49bp~ +16 5 5bp片段 ,去除pG FP N2载体自身的CMV启动子 ,分别构建了P2 9koval GFP和P1 5koval GFP两种表达载体 ,经测序和酶切鉴定表达载体构建正确。采用脂质体转染法分别将这两种载体、pGFP N2 (阳性对照 )质粒及阴性对照转染鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞。用荧光倒置显微镜观测绿色荧光蛋白的表达。结果表明 :两种表达质粒在鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞中都可以表达荧光蛋白。结果既显示卵清蛋白第一内含子对基因的表达起到一定的调控作用 ,也显示卵清蛋白启动子对输卵管上皮细胞和卵巢细胞不存在特异性 ,并且不存在种属差异性。 展开更多
关键词 卵清蛋白基因 启动子 脂质体 GFP 细胞培养
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Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响 被引量:4
9
作者 何桂蓉 周克元 +2 位作者 张月飞 梁统 闵玲 《广东医学院学报》 2003年第1期1-4,共4页
目的 :探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl xL反义寡核苷酸进入CNE 2Z细胞的影响。方法 :采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl xL反义寡核苷酸转染CNE 2Z细胞 ,应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE 2Z增殖的影响 ;RT PCR检测处理前后bcl ... 目的 :探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl xL反义寡核苷酸进入CNE 2Z细胞的影响。方法 :采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl xL反义寡核苷酸转染CNE 2Z细胞 ,应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE 2Z增殖的影响 ;RT PCR检测处理前后bcl xLmRNA表达水平。结果 :Lipofectin介导bcl xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率 ;Lipofectin介导bcl xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl xLmRNA表达水平的能力。 结论 :Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。 展开更多
关键词 lipofectin BCL-XL 反义寡核苷酸 鼻咽癌 CNE-2Z细胞
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c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响 被引量:3
10
作者 任庆兰 吴永忠 +1 位作者 刘渝 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期421-423,共3页
目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株S... 目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。 展开更多
关键词 卵巢癌细胞株 脂质体 c—erbB2反义寡核苷酸 放射敏感性
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酪氨酸羟化酶cDNA移植治疗帕金森病的实验研究 被引量:3
11
作者 赵迎春 刘振国 +6 位作者 陈生弟 余慧贞 曹蕾 郑仲承 蒋芝华 周长福 刘新垣 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期76-79,I003,共5页
目的评价质粒DNA脂质体复合物直接转染纹状体细胞表达酪氨酸羟化酶治疗帕金森病的疗效。方法应用6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,首次将表达大鼠酪氨酸羟化酶的质粒DNA脂质体复合物植入大鼠损毁侧纹状体。移植后,观察大... 目的评价质粒DNA脂质体复合物直接转染纹状体细胞表达酪氨酸羟化酶治疗帕金森病的疗效。方法应用6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,首次将表达大鼠酪氨酸羟化酶的质粒DNA脂质体复合物植入大鼠损毁侧纹状体。移植后,观察大鼠模型旋转行为的改善程度,并用免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测酪氨酸羟化酶基因的表达。结果移植后2周鼠模型的旋转行为明显改善(治疗后3、6、9、12及15天旋转次数比治疗前分别减少43.6%、38.4%、39.1%、48.8%和50.7%,P值均<0.01),且免疫组化及RT-PCR也证实了外源性酪氨酸羟化酶互补DNA(cDNA)可以进入脑细胞内,并表达出有生物活性的酪氨酸羟化酶。结论质粒DNA脂质体复合物直接转染纹状体细胞能够表达出有生物活性的酪氨酸羟化酶,并能改善帕金森病鼠模型的行为症状,这一技术可望发展成为治疗帕金森病的有效方法。 展开更多
关键词 震颤性麻痹 基因治疗 酪氨酸羟化酶 质粒DNA
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脂质体介导ANG反义核酸对A549细胞作用的研究 被引量:2
12
作者 唐敏 刘松青 王吉刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1290-1292,共3页
目的  研究脂质体介导ANG反义核酸转染A5 49细胞后 ,对其中ANG蛋白表达的影响 ,探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性。方法  用人工合成的人ANG反义寡聚核苷酸 ,以脂质体为载体转染人肺癌A5 49细胞 ,研究A5 49细胞在基因转染... 目的  研究脂质体介导ANG反义核酸转染A5 49细胞后 ,对其中ANG蛋白表达的影响 ,探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性。方法  用人工合成的人ANG反义寡聚核苷酸 ,以脂质体为载体转染人肺癌A5 49细胞 ,研究A5 49细胞在基因转染后 ,其ANG蛋白表达的变化。结果  脂质体转染程序优化后 ,得到最佳转染效率 ;免疫组化显示细胞内ANG蛋白表达明显减少 ;培养基ELISA检测显示每细胞分泌的ANG蛋白量与对照组相比有显著差异。结论  ANG反义寡聚核苷酸抑制A5 49细胞中ANG的表达 。 展开更多
关键词 脂质体介导 ANG反义核酸 A549细胞 血管生成素 新生血管形成 肿瘤
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EGFR反义寡核苷酸对人视网膜神经胶质细胞增生的影响 被引量:3
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作者 富名水 张皙 +1 位作者 邱庆华 顾青 《眼科新进展》 CAS 2002年第4期239-241,共3页
目的 观察表皮生长因子受体 (epiderm al growth factor receptor,EGFR)反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide,ASODN)对人视网膜神经胶质 (retinal glial,RG)细胞增生的影响。方法 人视网膜神经胶质细胞的原代培养 ,用脂质体 (L i... 目的 观察表皮生长因子受体 (epiderm al growth factor receptor,EGFR)反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide,ASODN)对人视网膜神经胶质 (retinal glial,RG)细胞增生的影响。方法 人视网膜神经胶质细胞的原代培养 ,用脂质体 (L ipofectin)作为载体将修饰型 EGFR ASODN转染 RG细胞后 ,MTT法测细胞增生活性 (吸光度 A值 )的变化 ,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果  EGFR ASODN转染 RG细胞后 ,细胞的增生活性降低 ,对 RG细胞生长增生的抑制率约为 46 .5 % ,进入 S期的细胞减少。结论  EGFR A-SODN能够抑制人 展开更多
关键词 视网膜神经胶质细胞 表皮生长因子受体 反义寡核苷酸 脂质体 细胞增生
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Prolonged Small Bowel Allografts Survival by CTLA4Ig Gene Transfection in Rats
14
作者 WANGYi-fang LAIFu-sheng XUAi-gang WUWen-xi 《Journal of Nanjing Medical University》 2004年第4期187-191,共5页
Objective: To evaluate the local expression of CTLA4Ig gene in small intestines and its effect on prolonging survival time of the small bowel allografts. Methods: The donor small bowels were perfused ex vivo with CT... Objective: To evaluate the local expression of CTLA4Ig gene in small intestines and its effect on prolonging survival time of the small bowel allografts. Methods: The donor small bowels were perfused ex vivo with CTLA4Ig cDNA reconstructed plasmid packaged with lipofectin vector via intra-superior mesenteric artery before transplantation. The CTLA4Ig transgene expression in the small bowel allografts was assessed by immunohistology and RT-PCR after transplantation. Results: Immunohistology and RT-PCR demonstrated expression of CTLA4Ig transgene in the allografts at least for 28 d after transplantation. Eleven cases of the 18 small bowel allografts that received CTLA4Ig gene transfection survived more than 90 d in the recipients. Conclusion: A single ex vivo intra-superior mesenteric artery infusion of CTLA4Ig cDNA reconstructed plasmid packaged with lipofectin induced efficient transduction of the small intestine, and the transfected small bowel allografts could survivor longer in nonimmunosupression rats. 展开更多
关键词 small bowel allograft CTLA4IG gene therapy lipofectin
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Genetic transformation of Brussica oleracea by lipofectin-mediated direct plasmid uptake
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作者 薛红卫 卫志明 许智宏 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1996年第9期770-773,共4页
The efficient transfer of nucleic acids into plant protoplast is a critical problem for thedevelopment of transformation techniques. Besides the well-used PEG-mediatedtransformation and electroporation, with the speci... The efficient transfer of nucleic acids into plant protoplast is a critical problem for thedevelopment of transformation techniques. Besides the well-used PEG-mediatedtransformation and electroporation, with the special characteristics (man-made, steadiness, 展开更多
关键词 lipofectin BRASSICA OLERACEA PROTOPLAST TRANSGENIC plant.
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修饰和导入技术对于反义寡核苷酸的影响
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作者 周毅 陆长德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期45-51,共7页
合成了3′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对DNA聚合酶α的反义核苷酸ASα,利用[3H]TdR参入方法测定了ASα对于HeLa细胞DNA复制的抑制效力。结果表明,这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定... 合成了3′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对DNA聚合酶α的反义核苷酸ASα,利用[3H]TdR参入方法测定了ASα对于HeLa细胞DNA复制的抑制效力。结果表明,这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Lipofectin能够促进ASα的入胞并且增强其抑制效力。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 稳定性 入胞 代谢 lipofectin DEAEDextran
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脂质体介导转染的绿色荧光蛋白基因在骨髓基质细胞内的表达 被引量:1
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作者 魏先森 周盛年 +2 位作者 刘黎青 赵静 马道新 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1199-1200,共2页
目的研究脂质体转染法对骨髓基质细胞进行基因修饰的可行性。方法在体外分离和扩增大鼠骨髓基质细胞,用脂质体转染法介导绿色荧光蛋白基因进入到骨髓基质细胞内,荧光显微镜下检测荧光蛋白的表达,台盼兰排斥试验检测转染细胞的活力。结... 目的研究脂质体转染法对骨髓基质细胞进行基因修饰的可行性。方法在体外分离和扩增大鼠骨髓基质细胞,用脂质体转染法介导绿色荧光蛋白基因进入到骨髓基质细胞内,荧光显微镜下检测荧光蛋白的表达,台盼兰排斥试验检测转染细胞的活力。结果绿色荧光蛋白可以在大鼠骨髓基质细胞内表达,转染效率为(28.9±3.6)%;脂质体法转染后的细胞活力为(93.6±4.8)%。结论脂质体转染法可以介导外源基因进入到骨髓基质细胞内表达。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 绿色荧光蛋白 基因转染 脂质体
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脂质体介导HBcAg基因转染人树突状细胞的实验研究 被引量:2
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作者 郭小芙 李军 +5 位作者 韩亚萍 宋培新 刘源 董莉 贺奇彬 孔练花 《中国血液流变学杂志》 CAS 2006年第1期23-25,共3页
目的通过脂质体介导乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因转染人体内专职抗原提呈的树突状细胞(DC)的方法,使HBcAg基因在树突状细胞中表达,构建树突状细胞疫苗。方法分离健康人外周血单个核细胞,在粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-... 目的通过脂质体介导乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因转染人体内专职抗原提呈的树突状细胞(DC)的方法,使HBcAg基因在树突状细胞中表达,构建树突状细胞疫苗。方法分离健康人外周血单个核细胞,在粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)的诱导下培养DC。在培养的第5天,应用脂质体PEI介导将含有编码HBcAg 基因的质粒(pJW4303/HBc)转染入DC,再以免疫印迹技术(Western-Blotting)验证其表达产物。结果经以质粒pJW4303 为真核表达载体的HBcAg目的基因转染后的树突状细胞有效表达了HBcAg抗原。结论经该方法转染后的DC目的基因可有效表达HBcAg,为以DC为基础的免疫治疗奠定了新的基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎核心抗原 乙型 树突状细胞 脂质体 转染
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体外培养淋巴细胞基因转移的实验探讨 被引量:2
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作者 王晓林 曹熙芳 +2 位作者 沈关心 尤颖健 屈伸 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期152-154,共3页
以PHA、IL-2体外诱导培养2~3wk的淋巴细胞作为受体细胞,在脂质体介导下进行腺苷脱氨酶及β-半乳糖苷酶基因转移。结果表明:外周血淋巴细胞在体外经PHA、IL-2诱导可大量增殖,其中CD3+细胞占90%以上。脂质... 以PHA、IL-2体外诱导培养2~3wk的淋巴细胞作为受体细胞,在脂质体介导下进行腺苷脱氨酶及β-半乳糖苷酶基因转移。结果表明:外周血淋巴细胞在体外经PHA、IL-2诱导可大量增殖,其中CD3+细胞占90%以上。脂质体介导外源性DNA阳性转染率可高达30%~40%以上。转移后细胞表达有活性的基因表达产物。提示应用脂质体对体外扩增的淋巴细胞实施基因转移,其方法简便,转移率高。 展开更多
关键词 基因转移 脂质体 淋巴细胞 体外培养
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辛伐他汀通过磷酸化作用增强内皮一氧化氮合酶活性 被引量:1
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作者 李小霞 夏勇 汪道文 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2007年第5期253-259,共7页
目的建立含人内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因的人胎肾细胞株,研究他汀类药物对eNOS活性的影响。方法用脂质体转染的方法将含有eNOS基因的质粒pcDNA3.1-eNOS导入人胎肾细胞(293细胞),利用G418筛选二次,以免疫印迹法鉴定并筛选出稳定表达eNO... 目的建立含人内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因的人胎肾细胞株,研究他汀类药物对eNOS活性的影响。方法用脂质体转染的方法将含有eNOS基因的质粒pcDNA3.1-eNOS导入人胎肾细胞(293细胞),利用G418筛选二次,以免疫印迹法鉴定并筛选出稳定表达eNOS的阳性克隆。将辛伐他汀(10μmol/L)加入eNOS阳性细胞系培养2h后,收获细胞并用同位素二步色谱法检测eNOS的活性,同时用Western Blot蛋白检测eNOS、磷酸化的eNOS表达水平和细胞内信号分子Akt、AMPK水平以探讨辛伐他汀调节eNOS活性的机制。结果Western Blot显示经转染pcDNA3.1-eNOS并筛选后的后的293细胞20%的克隆能稳定有效表达eNOS蛋白;辛伐他汀处理2h后eNOS活性明显升高(P<0.05)。结论成功建立了具有G418抗性的禽pcDNA3.1-eNOS基因的人胎肾细胞株,并且证明辛伐他汀可通过调节eNOS的活性来调节NO的生成,这可能为心血管疾病的治疗提高一种新的思路。 展开更多
关键词 辛伐他汀 G418 ENOS 人胎肾细胞株 脂质体转染
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