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丹参多酚酸盐修复糖基化终产物引起的晚期EPCs功能障碍及其分子机制 被引量:10
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作者 陈琴 黄铭涵 +1 位作者 江时森 徐标 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期630-635,共6页
目的观察丹参多酚酸盐对糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)引起的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能障碍的修复作用,并探讨其中分子机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,采用EGM-2-MV... 目的观察丹参多酚酸盐对糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)引起的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能障碍的修复作用,并探讨其中分子机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,采用EGM-2-MV培养液培养晚期EPCs;利用牛血清白蛋白及葡萄糖制备晚期糖基化修饰的白蛋白(AGE modified bovine serum albumin,AGE-albumin)。实验分为单独加入200μg/mLAGE-albumin的AGE组;同时加入200μg/mLAGE-albumin及0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的丹参多酚酸盐低、中、高剂量组;加入200μg/mL未经修饰白蛋白的对照组。采用AnnexinV/PI双染法检测晚期EPCs凋亡;ECMatirx-gel检测晚期EPCs形成新生血管的能力。采用RT-PCR法检测细胞中糖基化终产物受体(the receptor for AGE,RAGE)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)mRNA水平;Western blot法检测RAGE、eNOS及蛋白激酶Akt的蛋白表达水平。结果与对照组比较,AGE组AnnexinV+/PI-细胞比例增加,在ECMatirx-gel上形成新生血管能力降低;晚期EPCs中ragemRNA及RAGE蛋白表达增加,enosmRNA及eNOS及Akt蛋白表达减少。丹参多酚酸盐1.0、10.0μg/mL组,与AGE组比较,晚期EPCs凋亡明显减少(P<0.05,P<0.01),在ECMatirx-gel上形成新生血管能力增加(P<0.01),晚期EPCs中RAGE表达减少(P<0.05,P<0.01),eNOS、Akt表达增加(P<0.05);与对照组比较,丹参多酚酸盐10μg/mL组对晚期EPCs凋亡及在ECMatirx-gel上形成新生血管能力,ragemRNA及RAGE,enosmRNA及eNOS,Akt蛋白表达,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 AGE使EPCs功能受损,表现为凋亡增加、迁移及体外形成新生血管的能力下降,丹参多酚酸盐可修复由AGE-albumin引起的EPCs功能损害。 展开更多
关键词 丹参多酚酸盐 糖基化终产物 晚期内皮祖细胞 血管新生
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外周血两种不同类型内皮祖细胞与颈动脉狭窄的关系 被引量:3
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作者 何国厚 张红梅 +2 位作者 张晓东 刘培 丁立 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期527-531,共5页
目的探讨外周血中早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞数量和功能变化与颈动脉狭窄程度之间的关系。方法入组对象60例,根据全脑血管造影术分成颈动脉狭窄组40例(其中轻度狭窄组20例,中重度狭窄组20例),对照组20例。在全脑血管造影术中抽取... 目的探讨外周血中早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞数量和功能变化与颈动脉狭窄程度之间的关系。方法入组对象60例,根据全脑血管造影术分成颈动脉狭窄组40例(其中轻度狭窄组20例,中重度狭窄组20例),对照组20例。在全脑血管造影术中抽取患者股动脉血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,分别培养至7天和21天鉴定为早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞,计数细胞集落数量并分别用MTT比色法、改良的Boyden小室法和HFN培养板测定早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞的增值、迁移、黏附功能。结果颈动脉狭窄组患者吸烟、高血压、甘油三酯、低密度脂蛋白明显高于对照组,高密度脂蛋白低于对照组(P<0.05);而年龄、性别、血糖、总胆固醇与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,颈动脉狭窄组外周血早期内皮祖细胞、晚期内皮祖细胞数量及功能均下降(P<0.05),晚期内皮祖细胞数量与功能改变与颈动脉狭窄程度呈负相关(P<0.05)。结论颈动脉狭窄患者外周血晚期内皮祖细胞数量减少,功能受损,其数量与功能变化与颈动脉狭窄程度呈负相关。对于颈动脉狭窄患者,检测晚期内皮祖细胞数量及功能可间接预测颈动脉狭窄严重程度。 展开更多
关键词 早期内皮祖细胞 晚期内皮祖细胞 颈动脉狭窄
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微环境在体外大量扩增晚期内皮祖细胞中的作用 被引量:1
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作者 吴立华 宋增璇 +3 位作者 刘旭辉 李尚珠 韩忠朝 Georges Uzan 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期202-206,共5页
目的探讨做为微环境的滋养层细胞在体外大量扩增晚期内皮祖细胞(EPC)中的作用。方法预铺辐射后的滋养层细胞,而后植入分离的外周血单个核细胞,计数培养21 d后获得的晚期EPC克隆数目,并检测目的细胞免疫表型,用Matrigel鉴定其体外血管形... 目的探讨做为微环境的滋养层细胞在体外大量扩增晚期内皮祖细胞(EPC)中的作用。方法预铺辐射后的滋养层细胞,而后植入分离的外周血单个核细胞,计数培养21 d后获得的晚期EPC克隆数目,并检测目的细胞免疫表型,用Matrigel鉴定其体外血管形成能力。采用动态显微镜追踪单个干细胞在滋养层细胞上的分化过程。结果培养21 d时,在预铺晚期EPC和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为滋养层的培养环境下,每100ml外周血单个核细胞分别获得(40.0±3.9)和(39.3±3.1)个晚期EPC克隆,均明显高于无滋养层条件下的(2.0±1.3)个(P均<0.05)。目的细胞可表达CD31、CD34、eNOS、FLt-1、P1H12、Sendo、VEcadherin和CD117,并在体外与Matrigel形成管状结构。动态追踪示单个干细胞的扩增是在有滋养层细胞参与下完成不对称分裂的。结论通过提供滋养层细胞方法可以大量扩增晚期EPC,滋养层细胞可能参与了早阶段内皮干细胞的不对称分裂扩增。 展开更多
关键词 晚期内皮祖细胞 滋养层细胞 微环境 不对称分裂
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sEHi对颈动脉狭窄患者晚期内皮祖细胞功能的影响
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作者 彭晓琴 丁立 +4 位作者 周岚 艾志兵 陈俊 王云甫 何国厚 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2016年第7期608-612,共5页
目的研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,s EHi)AUDA对颈动脉狭窄(carotid stenosis,CS)患者外周血来源的晚期内皮祖细胞(late endothelial progenitor cell,late EPC)的影响。方法入选研究对... 目的研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,s EHi)AUDA对颈动脉狭窄(carotid stenosis,CS)患者外周血来源的晚期内皮祖细胞(late endothelial progenitor cell,late EPC)的影响。方法入选研究对象60例,分成颈动脉狭窄组(n=35)和对照组(n=25)。密度梯度离心法,从外周血获取单个核细胞培养至21 d后鉴定内皮祖细胞;以不同浓度AUDA(0,0.1,1,10μmol/L)和晚期EPC共培养24 h,分别采用MTT法,黏附能力测定实验和Transwell小室来观察其增殖,黏附,迁移能力。同时采用Western blot法观察AUDA处理后其VEGF的表达。结果体外培养21 d时,细胞呈典型长梭形,21 d时,呈铺路石样,并可摄取FITCUEA-I和Dil-ac LDL。与对照组相比,CS患者late EPC的增殖,黏附和迁移能力均显著下降(P<0.05);与处理前(0umol/L)相比,AUDA呈剂量依赖性地增强CS患者late EPC增殖,黏附和迁移能力并促进CS患者late EPC表达VEGF。结论 s EHi具有促进late EPC增殖,黏附和迁移等功能的作用,其有望成为一类治疗CS的新型药物。 展开更多
关键词 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 颈动脉狭窄 晚期内皮祖细胞 血管内皮生长因子
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晚期内皮祖细胞大量扩增方法
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作者 吴立华 宋增璇 +3 位作者 刘旭辉 李尚珠 韩忠朝 Georges Uzan 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第36期2574-2577,共4页
目的通过实验验证一个体外大量扩增晚期内皮祖细胞(EPC)的方法。方法先预铺经辐射后的滋养层细胞(晚期EPC或脐带脐静脉内皮细胞),而后植入分离的人外周血单个核细胞,计数并对比培养21d后获得的晚期EPC克隆数目,并检测目的细胞免... 目的通过实验验证一个体外大量扩增晚期内皮祖细胞(EPC)的方法。方法先预铺经辐射后的滋养层细胞(晚期EPC或脐带脐静脉内皮细胞),而后植入分离的人外周血单个核细胞,计数并对比培养21d后获得的晚期EPC克隆数目,并检测目的细胞免疫表型,应用基质胶(matrigel)鉴定其体外管状结构形成能力。结果21d时在预铺的两种滋养层细胞培养条件下获得的晚期EPC克隆数目均比无滋养层细胞的培养方法高20倍(40.0±3.9、39.3±3.1比2.0±1.3,均P〈0.05);且细胞克隆出现的早。目的细胞表达CD31、CD34、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮细胞生长因子受体Fit-1、CDl46的2个表型(P1H12、Sendo)、血管内皮钙黏蛋白(VEcadherin)、CDll7,且具有能在体外与matrigel形成管状结构的功能。结论通过提供滋养层细胞的方法可以大量扩增晚期EPC,提示微环境在晚期EPC扩增中起重要作用。 展开更多
关键词 干细胞 细胞增殖 晚期内皮祖细胞 滋养层细胞
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