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淀粉样变性分型的研究进展 被引量:12
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作者 孙维绎 李剑 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期259-262,共4页
淀粉样变性是由蛋白结构异常造成的一组疾病。淀粉样物质在不同脏器沉积进而影响脏器功能。根据致病蛋白种类可将淀粉样变性分为多种亚型,每种亚型的临床表现、治疗方案和预后都不尽相同。传统的免疫荧光和免疫组织化学分型方法存在抗... 淀粉样变性是由蛋白结构异常造成的一组疾病。淀粉样物质在不同脏器沉积进而影响脏器功能。根据致病蛋白种类可将淀粉样变性分为多种亚型,每种亚型的临床表现、治疗方案和预后都不尽相同。传统的免疫荧光和免疫组织化学分型方法存在抗体种类有限、背景染色干扰等问题,具有一定的误诊率。最近,以蛋白质组学为基础的激光显微切割联合质谱分析技术(LMD/MS)被成功应用于淀粉样变性分型。本文就淀粉样变性分型方法的最新研究进展进行综述。 展开更多
关键词 淀粉样变性 浆细胞病 激光显微切割 蛋白质组学
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单细胞分离方法及仪器研究进展 被引量:8
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作者 黄彩虹 易定容 +1 位作者 金福江 叶一青 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期140-153,共14页
如何从复杂异质且数量众多的细胞背景中分离出具有某种特征的纯净细胞实验样本,是长期困扰生命科学和临床病理学研究者的难题。纯净无损高特异性的细胞分离方法对解析生命过程、研究病理机制、确定治疗方案、分析药物疗效具有重要的作... 如何从复杂异质且数量众多的细胞背景中分离出具有某种特征的纯净细胞实验样本,是长期困扰生命科学和临床病理学研究者的难题。纯净无损高特异性的细胞分离方法对解析生命过程、研究病理机制、确定治疗方案、分析药物疗效具有重要的作用。综述了单细胞分离方法及分离仪器的研究进展,重点梳理荧光激活细胞分选、微流体、激光显微切割、显微操作4种方法。首先,阐述方法的工作原理和部分理论模型。其次,分析几种典型仪器的结构、研究进展及主要性能参数。最后,讨论各种单细胞分离方法的优点和局限性,并展望单细胞分离仪器的发展趋势。 展开更多
关键词 单细胞分离方法 荧光激活细胞分选 微流体技术 激光显微切割
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制样方法对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响
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作者 马月花 丁莲 +2 位作者 张雪 赵坤坤 陈素梅 《安徽农业科学》 CAS 2024年第18期1-5,9,共6页
[目的]研究不同固定剂及切片制样方式对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响。[方法]以丙酮和乙醇冰醋酸2种试剂固定菊花花蕾,采用石蜡和冰冻切片2种方式制作样本,显微切割并收集最外两轮小花原基,提取RNA后比较提取质量。[结果... [目的]研究不同固定剂及切片制样方式对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响。[方法]以丙酮和乙醇冰醋酸2种试剂固定菊花花蕾,采用石蜡和冰冻切片2种方式制作样本,显微切割并收集最外两轮小花原基,提取RNA后比较提取质量。[结果]石蜡和经梯度蔗糖保护的冰冻切片均能很好地保存花蕾组织形态,就石蜡切片而言,乙醇冰醋酸固定组织切割样品的RNA降解明显低于丙酮固定样品;而2种固定剂的冰冻切片切割样品RNA提取质量无明显差异。与石蜡切片相比,冰冻切片显微切割样品RNA质量更高。切割时收集管盖加入RNA提取缓冲液可明显缓解RNA降解。显微切割的不同品种菊花花原基与花发育有关的基因表达水平存在差异,表明切割获得的材料可用于下一步研究。[结论]植物组织经乙醇冰醋酸固定、梯度蔗糖保护后冰冻切片进行显微切割效果较佳,可富集特异组织或细胞并从中获得较高质量的RNA。 展开更多
关键词 固定剂 石蜡切片 冰冻切片 激光显微切割 RNA 提取质量
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腹壁脂肪活检联合激光显微切割/质谱分析辅助诊断多发性骨髓瘤合并重轻链淀粉样变性1例报告
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作者 张伟 蒋丽君 +8 位作者 王园园 朱蓉蓉 汪芳 张延芳 包慎 马燕萍 李蓉 陈俊敏 李叶琼 《临床血液学杂志》 2023年第5期373-377,共5页
笔者在国内首次通过腹壁脂肪活检联合激光显微切割/质谱分析(LMD/MS)辅助诊断1例多发性骨髓瘤合并重轻链淀粉样变性患者,强调LMD/MS在淀粉样变性分型中的重要性。当心脏磁共振的钆延迟强化阴性,通过肌钙蛋白T、纵向弛豫时间定量成像与... 笔者在国内首次通过腹壁脂肪活检联合激光显微切割/质谱分析(LMD/MS)辅助诊断1例多发性骨髓瘤合并重轻链淀粉样变性患者,强调LMD/MS在淀粉样变性分型中的重要性。当心脏磁共振的钆延迟强化阴性,通过肌钙蛋白T、纵向弛豫时间定量成像与心肌细胞外容积可辅助诊断心肌淀粉样变性。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 重轻链淀粉样变性 激光显微切割/质谱分析
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激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进展 被引量:3
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作者 陆叶 席梦利 +2 位作者 刘光欣 徐进 施季森 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期113-117,共5页
激光显微切割技术是20世纪90年代后期发展,由现代物理学和生物学相结合的精确取材技术。该技术可以在显微镜下利用微激光束直接从不同的组织(包括活体组织)快速切割、分离和纯化生物体的目标组织、细胞及其组分,用于细胞和分子生物学的... 激光显微切割技术是20世纪90年代后期发展,由现代物理学和生物学相结合的精确取材技术。该技术可以在显微镜下利用微激光束直接从不同的组织(包括活体组织)快速切割、分离和纯化生物体的目标组织、细胞及其组分,用于细胞和分子生物学的研究。笔者结合开展激光显微切割技术研究遇到的问题,从制片技术的改进、基因表达、DNA和蛋白质分析等方面,对激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 激光显微切割 细胞和分子生物学 植物 综述
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激光显微切割技术推进全面解析植物雄配子发生的分子机制 被引量:3
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作者 汤湘 刘巧泉 唐威华 《细胞生物学杂志》 CSCD 2009年第2期151-156,共6页
雄配子(又称小孢子,即花粉)的产生是显花植物生殖发育的重要阶段之一。花粉发育是在花药中与花药发育同步进行的,而花药内壁的绒毡层细胞直接为花粉发育提供营养。花药发育中各细胞(如花粉、绒毡层等)特异性的全基因组表达谱可为全面解... 雄配子(又称小孢子,即花粉)的产生是显花植物生殖发育的重要阶段之一。花粉发育是在花药中与花药发育同步进行的,而花药内壁的绒毡层细胞直接为花粉发育提供营养。花药发育中各细胞(如花粉、绒毡层等)特异性的全基因组表达谱可为全面解析植物雄配子发育的分子调控机制提供丰富的信息。但以往的表达谱研究多基于整个花药甚至整个花序的取材,无法提供细胞特异性的表达信息。最近,激光显微切割技术被运用在水稻花粉发育研究这一领域,分别获得了处于减数分裂后各时期的小孢子以及绒毡层的专一细胞类型的全基因组表达谱。在此基础上,不仅发掘了更多新的花粉及绒毡层细胞特异性表达基因,鉴定了花粉及绒毡层细胞中富集的生化、代谢的细胞通路;而且还鉴定出了更多调控花粉及绒毡层细胞特异性基因表达的顺式元件,并通过系统分析得出了多种植物激素在花粉发育中细胞水平上的时空分布。总之,激光显微切割技术和基因组芯片联用的结果提供了很多可供检验的科学假说,大大推动了对植物雄配子发生发育分子机制的全面了解。 展开更多
关键词 激光显微切割 基因芯片 花粉 绒毡层 植物激素
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Peltate glandular trichomes of Colquhounia seguinii harbor new defensive clerodane diterpenoids 被引量:2
7
作者 Chun-Huan Li Yan Liu +2 位作者 Juan Hua Shi-Hong Luo Sheng-Hong Li 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2014年第9期928-940,共13页
Glandular trichomes produce a wide variety of secondary metabolites that are considered as major defensive chemicals against herbivore attack.The morphology and secondary metabolites of the peltate glandular trichomes... Glandular trichomes produce a wide variety of secondary metabolites that are considered as major defensive chemicals against herbivore attack.The morphology and secondary metabolites of the peltate glandular trichomes of a lianoid Labiatae,Colquhounia seguinii Vaniot,were investigated.Three new clerodane diterpenoids,seguiniilactones A-C(1-3),were identified through precise trichome collection with laser microdissection,metabolic analysis with ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer,target compound isolation with classical phytochemical techniques,structure elucidation with spectroscopic methods.All compounds showed significant antifeedant activity against a generalist plant-feeding insect Spodoptera exigua.Seguiniilactone A(1) was approximately 17-fold more potent than the commercial neem oil.a-Substituted α,β-unsaturated γ-lactone functionality was found to be crucial for strong antifeedant activity of this class of compounds.Quantitative results indicated that the levels of these compounds in the peltate glandular trichomes and leaves were sufficiently high to deter the feeding by generalist insects.Moderate antifungal activity was observed for seguiniilactone C(3) against six predominant fungal species isolated from the diseased leaves of C seguinii,while seguiniilactones A and B were generally inactive.These findings suggested that seguiniilactones A-C might be specialized secondary metabolites in peltate glandular trichomes for the plant defense against insect herbivores and pathogens. 展开更多
关键词 Colquhounia seguinii Vaniot peltate glandular trichomes laser microdissection clerodane diterpenoids antifeedant and antifungal activities
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激光显微切割联合质谱分析继发淀粉样变性患者肾组织SAA蛋白 被引量:3
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作者 孙颖 孙健 +5 位作者 蔡建芳 文煜冰 郭正光 孙伟 李明喜 李雪梅 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第8期1088-1093,共6页
目的利用激光显微切割联合质谱(LMD/MS)技术分析强直性脊柱炎(AS)合并继发性淀粉样变患者肾活检组织标本血清淀粉样物质A(SAA)蛋白亚型及氨基酸突变序列。方法甲醛固定肾活检组织,脱蜡后行刚果红染色,选取刚果红染色阳性区域进行质谱分... 目的利用激光显微切割联合质谱(LMD/MS)技术分析强直性脊柱炎(AS)合并继发性淀粉样变患者肾活检组织标本血清淀粉样物质A(SAA)蛋白亚型及氨基酸突变序列。方法甲醛固定肾活检组织,脱蜡后行刚果红染色,选取刚果红染色阳性区域进行质谱分析,通过数据分析软件对质谱结果进行整合评估,并将患者SAA蛋白氨基酸序列与变异蛋白数据库氨基酸序列进行比对确定是否有变异蛋白。结果质谱鉴定到高丰度的SAA1及SAA2蛋白,同时有血清淀粉样蛋白P及载脂蛋白E,数据库比对未检测到SAA1及SAA2蛋白的变异序列。结论本研究首次鉴定到了AS合并淀粉样变肾组织中的SAA1及SAA2蛋白,丰富了AS淀粉样变的发病机制,为将来AA型淀粉样变性的精准分型提供新的方法。 展开更多
关键词 淀粉样变性 激光显微切割 血清淀粉样物质A 液质联用分析法
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激光显微切割与液质联用相结合在中药研究中的应用 被引量:3
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作者 李胜男 杨燕云 +2 位作者 许亮 邢艳萍 康廷国 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第1期122-125,共4页
激光显微切割技术与液质联用色谱分析技术相结合,具显微操作和定性定量分析的技术优势,可用于药用植物次生代谢产物在细胞与组织中分布与积累的研究,是对中药显微鉴定、中药化学成分分析的深入与发展。在中药质量评价、中药栽培及采收... 激光显微切割技术与液质联用色谱分析技术相结合,具显微操作和定性定量分析的技术优势,可用于药用植物次生代谢产物在细胞与组织中分布与积累的研究,是对中药显微鉴定、中药化学成分分析的深入与发展。在中药质量评价、中药栽培及采收加工、中药代用品等研究具有一定意义。对于中药资源的有效利用、可持续发展具有重要作用。总结近年来激光显微切割技术与液质联用色谱分析技术在中药研究中的应用,为进一步扩大应用提供参考。 展开更多
关键词 激光显微切割技术 液质联用技术 次生代谢产物
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Microanalysis of Plant Cell Wall Polysaccharides 被引量:1
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作者 Nicolai Obel Veronika Erben +3 位作者 Tatjana Schwarz Stefan Kuhnel Andrea Fodor Markus Pauly 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2009年第5期922-932,共11页
Oligosaccharide Mass Profiling (OLIMP) allows a fast and sensitive assessment of cell wall polymer structure when coupled with Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation Time Of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF... Oligosaccharide Mass Profiling (OLIMP) allows a fast and sensitive assessment of cell wall polymer structure when coupled with Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation Time Of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS). The short time required for sample preparation and analysis makes possible the study of a wide range of plant organs, revealing a high degree of heterogeneity in the substitution pattern of wall polymers such as the cross-linking glycan xyloglucan and the pectic polysaccharide homogalacturonan. The high sensitivity of MALDI-TOF allows the use of small amounts of samples, thus making it possible to investigate the wall structure of single cell types when material is collected by such methods as laser micro-dissection. As an example, the analysis of the xyloglucan structure in the leaf cell types outer epidermis layer, entire epidermis cell layer, palisade mesophyll cells, and vascular bundles were investigated. OLIMP is amenable to in situ wall analysis, where wall polymers are analyzed on unprepared plant tissue itself without first isolating cell walls. In addition, OLIMP enables analysis of wall polymers in Golgi-enriched fractions, the location of nascent matrix polysaccharide biosynthesis, enabling separation of the processes of wall biosynthesis versus post-deposition apoplastic metabolism. These new tools will make possible a semi-quantitative analysis of the cell wall at an unprecedented level. 展开更多
关键词 Carbohydrate metabolism xyloglucan mass spectrometry cell expansion cell walls ARABIDOPSIS laser microdissection.
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快速并行激光显微切割方法 被引量:2
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作者 黄彩虹 谢佳豪 +2 位作者 易定容 康玉思 庄凤江 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第8期115-121,共7页
针对传统激光显微切割采用单激光焦点与工件相对运动形成加工轨迹,存在切割效率低、切割轨迹首尾不易闭合等局限性,提出基于数字微镜器件的无机械运动激光显微切割方法。通过调控数字微镜阵列,对激光光束的振幅进行调控,配合光路设计在... 针对传统激光显微切割采用单激光焦点与工件相对运动形成加工轨迹,存在切割效率低、切割轨迹首尾不易闭合等局限性,提出基于数字微镜器件的无机械运动激光显微切割方法。通过调控数字微镜阵列,对激光光束的振幅进行调控,配合光路设计在样品区域得到任意的光场强度分布,实现强度近乎相同的面投影并行切割。阐述了关键参数设计、模拟仿真、系统搭建过程。先对聚酯薄膜进行直线、空心圆环、空心矩形等多种图案的切割,再对冷冻切片的细胞组织进行切割。实验表明,通过一次投影并行切割可设计的图案化结构,目标图形准确,切割效率高。在20×物镜下,最小切割线宽达到亚微米,最小圆环直径小于单细胞直径。该方法可为提高激光显微切割系统的效率和精度提供新思路和新方向。 展开更多
关键词 激光显微切割 数字微镜器件 激光加工
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老年大鼠肾脏微分离肾小球、肾小管及动脉血管紧张素Ⅱ受体的表达 被引量:2
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作者 张利 陈香美 +3 位作者 刘航 彭丽霞 张雪光 洪权 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期497-500,共4页
目的 :观察老年大鼠肾脏不同部位不同亚型的血管紧张素Ⅱ受体 (ATR)基因表达的改变。方法 :取 3月龄及 2 4月龄雄性Wistar大鼠肾脏 ,行Western印迹杂交及Northern印迹杂交检测肾皮质AT1R的蛋白及基因表达 ,行冰冻切片 (厚 5 μm) ,通过... 目的 :观察老年大鼠肾脏不同部位不同亚型的血管紧张素Ⅱ受体 (ATR)基因表达的改变。方法 :取 3月龄及 2 4月龄雄性Wistar大鼠肾脏 ,行Western印迹杂交及Northern印迹杂交检测肾皮质AT1R的蛋白及基因表达 ,行冰冻切片 (厚 5 μm) ,通过激光切割、弹射微分离系统分离肾小球、肾小管及动脉 ,提取RNA ,利用RT -PCR方法观察AT1aRmRNA、AT1bRmRNA及AT2 RmRNA的表达。结果 :2 4月龄大鼠肾脏的AT1R在蛋白水平及基因水平均低于 3月龄大鼠。应用自动激光微分离技术成功分离了大鼠肾脏的肾小球、肾小管及小动脉。 2 4月龄大鼠肾小球AT1aRmRNA的表达与 3月龄大鼠比较无明显差异 ,在肾小管表达低于 3月龄大鼠 ,动脉表达高于 3月龄大鼠 ;AT1bRmRNA在肾小球、肾小管表达均低于 3月龄大鼠 ,在动脉的表达高于 3月龄大鼠 ;AT2 RmRNA的表达在肾小管明显高于 3月龄大鼠 ,在肾小球及动脉的表达无明显差异。结论 :老年大鼠的肾小球、肾小管及肾内动脉各型血管紧张素受体的改变不同 ,有可能在肾脏增龄性改变中起重要作用。 展开更多
关键词 衰老 肾素-血管紧张素系统 激光微分离
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结合激光微切割与cDNA芯片技术筛选胃癌进展过程中差异表达的基因 被引量:2
13
作者 张晓琦 李强 +10 位作者 孙喜太 吴凌云 温泉 张丽华 仇毓东 邹晓平 徐肇敏 陈隆典 于成功 张敏跃 丁义涛 《医学研究生学报》 CAS 2007年第11期1130-1133,共4页
目的:结合激光微切割(LMD)和基因芯片技术筛选胃癌淋巴结转移相关基因,从中进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。方法:采用LMD技术,从17例胃癌患者手术标本中获取高纯度的正常胃黏膜细胞及原发灶和相应淋巴结转移灶中... 目的:结合激光微切割(LMD)和基因芯片技术筛选胃癌淋巴结转移相关基因,从中进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。方法:采用LMD技术,从17例胃癌患者手术标本中获取高纯度的正常胃黏膜细胞及原发灶和相应淋巴结转移灶中的肿瘤细胞。用基因芯片比较其中2例原发灶与淋巴结转移灶中肿瘤细胞基因表达谱的差异,半定量RT-PCR方法验证芯片结果;并在另15份标本中,进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。结果:发现49个基因的表达在胃癌原发灶肿瘤细胞中比淋巴结转移灶明显上调,37个基因的表达明显下调,mRNA水平的验证结果与芯片结果相符。同时,筛选出4个在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因,其中3个基因(OPCML,RNASE1和YES1)的表达规律与肿瘤抑制基因相似,即正常黏膜中表达最高,肿瘤原发灶次之,淋巴结转移灶表达最低;而另一个基因(AKC1)的表达规律则与癌基因相似。结论:采用LMD和基因芯片技术,成功筛选出胃癌进展过程中的差异表达基因,为进一步研究胃癌发生和转移的机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 激光微切割 基因芯片 胃癌
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染色及激光显微切割对小鼠牙胚组织总RNA完整度的影响 被引量:2
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作者 党平 聂敏媛 +5 位作者 崔三哲 汤楚华 史亮 郑翰圣 董蕊 施生根 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期319-322,共4页
目的:观察以常规染色结合激光显微切割(laser microdissection,LMD)技术精确分离获取小鼠牙胚间充质组织对所获得组织总RNA完整度的影响。方法:以LMD技术获取胚胎17 d(embryonic 17,E17)和出生后2 d(postnatal 2,PN2)两时期CD1小鼠下颌... 目的:观察以常规染色结合激光显微切割(laser microdissection,LMD)技术精确分离获取小鼠牙胚间充质组织对所获得组织总RNA完整度的影响。方法:以LMD技术获取胚胎17 d(embryonic 17,E17)和出生后2 d(postnatal 2,PN2)两时期CD1小鼠下颌第一磨牙的牙囊和牙乳头组织;提取组织总RNA后再以2100生物分析仪所提供的核糖体RNA 28s/18s比值(28s/18s Ratio)、RNA完整度数值(RNA integrity number,RIN),以及样品电泳图的图形来综合判断样品完整度。结果:与未经LMD切割的对照组相比,经染色及LMD切割的实验组所提取牙胚组织样品总RNA完整度明显降低;非染色仅实行LMD组样品总RNA完整度高于染色及LMD组,但其完整度仍低于通常基因芯片实验要求。结论:常规染色及LMD过程对所提取牙胚组织总RNA完整度有显著影响。 展开更多
关键词 激光显微切割技术 牙胚发育 间充质 RNA完整度
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激光显微切割分离黄梁木不定根原基的技术体系建立 被引量:2
15
作者 董甜甜 王雪 +3 位作者 刘思雯 张立定 龙健梅 彭昌操 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期685-695,共11页
为挖掘黄梁木不定根原基发生的关键基因,获取特异性高的根原基起始细胞群是分析根原基表达图谱的重要前提。激光显微切割是目前获取特异细胞群的一种常用手段。本研究通过分析石蜡切片过程中固定剂、脱水时间、渗透剂、切片厚度、粘片... 为挖掘黄梁木不定根原基发生的关键基因,获取特异性高的根原基起始细胞群是分析根原基表达图谱的重要前提。激光显微切割是目前获取特异细胞群的一种常用手段。本研究通过分析石蜡切片过程中固定剂、脱水时间、渗透剂、切片厚度、粘片试剂和烘片温度等对RNA质量的影响,以及对激光显微切割参数的调试,建立了采用激光显微切割技术分离黄粱木不定根原基细胞的体系,获得的RNA可以满足后续RNA-seq文库构建的要求,为揭示黄粱木不定根原基发生的分子机制奠定了关键基础。 展开更多
关键词 黄梁木 不定根原基 激光显微切割 石蜡切片 RNA完整性
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激光微切和巢式逆转录聚合酶链反应联合检测单个肝细胞的基因表达 被引量:2
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作者 石欣 高乃荣 +3 位作者 霍明东 胡浩霖 Friess Helmut Buchler Markus 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2003年第1期30-32,共3页
目的 探讨检测单个肝细胞基因表达的方法。方法应用激光微切的方法从冰冻切片上将单个肝细胞切下,提取总RNA,将RNA逆转录成cDNA,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达。结果在显微镜下用紫外激光微切机,将单个肝细胞成功切... 目的 探讨检测单个肝细胞基因表达的方法。方法应用激光微切的方法从冰冻切片上将单个肝细胞切下,提取总RNA,将RNA逆转录成cDNA,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达。结果在显微镜下用紫外激光微切机,将单个肝细胞成功切下,提取RNA后,逆转录成cDNA,巢式RT-PCR的扩增产物在琼脂糖凝胶上清晰可见,其表达与细胞数量成正比。结论联合应用激光微切和巢式RT-PCR可以检测单个肝细胞的基因表达。 展开更多
关键词 MRNA CDNA 肝癌 诊断 激光微切 巢式逆转录聚合酶链反应 检测 单个肝细胞 基因表达
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山羊单条染色体激光显微切割的研究 被引量:1
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作者 刘志红 俎红丽 +5 位作者 赵濛 于梦然 王志新 肖红梅 赵艳红 李金泉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期8-11,共4页
激光显微切割技术已经成为一种能够快速稳定地从复杂组织获取均一样本的工具,该技术已经有了较为广泛的应用,并随着研究的不段深入,成为单细胞的分离和表达研究必不可少的应用工具。目前,使用激光显微切割分离细胞等研究已非常广泛,但... 激光显微切割技术已经成为一种能够快速稳定地从复杂组织获取均一样本的工具,该技术已经有了较为广泛的应用,并随着研究的不段深入,成为单细胞的分离和表达研究必不可少的应用工具。目前,使用激光显微切割分离细胞等研究已非常广泛,但在单条染色体分离的研究上,报道甚少,尤其在山羊上还没有激光显微切割的相关报道。因此,针对山羊单条染色体的分离进行细胞培养、膜玻片核型制备和激光显微切割等条件摸索,确定在ConA刺激剂作用下,培养48h后加入秋水仙素作用淋巴细胞5h,细胞生长良好,可以分离和获得较为理想的单条染色体。为大型哺乳动物的单条染色体分离研究提供借鉴。 展开更多
关键词 山羊 激光显微切割 单条染色体
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显微切割联合全自动Western blot在小鼠大脑标记神经元微量蛋白定量中的应用 被引量:1
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作者 杨楠 谭思维 +2 位作者 彭艳 周元国 宁亚蕾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期1846-1850,共5页
目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,... 目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,全自动毛细管Western blot检测收集细胞的磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)蛋白水平。结果全自动毛细管Western blot对低浓度蛋白的检测下限低于传统Western blot 1个数量级,其线性相关系数为98. 85%,日内和日间精密度分别为2. 50%和4. 09%。本方法应用于颅脑创伤小鼠脑组织,发现伤后1 d海马DG区神经元p-PKA显著增高(P <0. 01),CA1区无变化。结论本方法基于激光显微切割和全自动毛细管Western blot,能够实现精确收集指定神经元并准确定量微量蛋白,成功应用于目标神经元蛋白定量,具有在细胞类型众多且混杂分布的组织中进行细胞和分子水平研究的应用前景。 展开更多
关键词 激光显微切割 全自动毛细管Western blot 蛋白质定量
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单细胞技术进展及其在植物研究中的应用 被引量:1
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作者 何宇清 孙蒙祥 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期475-487,共13页
多细胞生物体的生存依赖于不同类型细胞特异性的功能分工,不同类型的细胞尽管基因组相同,但有其独特的发育过程和应对环境变化的能力。生物学的一大挑战就是揭示基因如何在正确的位置、正确的时间表达到正确的水平,最近出现了很多通过... 多细胞生物体的生存依赖于不同类型细胞特异性的功能分工,不同类型的细胞尽管基因组相同,但有其独特的发育过程和应对环境变化的能力。生物学的一大挑战就是揭示基因如何在正确的位置、正确的时间表达到正确的水平,最近出现了很多通过细胞类型特异性方法研究单细胞组学的工具,这些新技术使我们能通过空前分辨率,理解多细胞生物体内不同类型的单个细胞基因表达特点及其适应环境变化的机制。单细胞样品的获取一直是单细胞研究的一大技术瓶颈,因此本文将以如何获得起始材料为重点,探讨单细胞研究的样品标记、单细胞分离及获取、组学数据分析和结果验证等技术方法及其在植物研究中的应用。 展开更多
关键词 细胞类型特异性 荧光激活细胞分离 激光显微切割 微流控芯片 单细胞技术
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激光显微切割技术富集肿瘤细胞在基因突变检测中的意义 被引量:1
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作者 董周寰 吕亚莉 +4 位作者 汪进良 钟梅 朱凤伟 王琼 石怀银 《解放军医学院学报》 CAS 2014年第6期614-616,共3页
目的探讨激光显微切割技术富集肿瘤细胞对检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变检测的影响以及其临床病理学意义。方法采用激光显微切割技术富集49例NS... 目的探讨激光显微切割技术富集肿瘤细胞对检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变检测的影响以及其临床病理学意义。方法采用激光显微切割技术富集49例NSCLC患者的石蜡包埋样本的肿瘤细胞,采用PCR技术对EGFR基因第18、19、20、21号外显子片段进行扩增后直接测序,分析其结果并比较其与常规肿瘤组织筛选后进行EGFR基因突变检测结果的异同。结果 49例NSCLC样本中21例(42.9%)存在EGFR基因突变,包括第19号外显子13例,第21号外显子8例,没有发现两者同时突变的样本。分析外显子突变情况发现,利用激光显微切割技术富集的样本检测突变率42.9%(21/49),高于利用常规筛选后的突变率34.7%(17/49),两种方法的差异有统计学意义(P=0.045 5<0.05)。且比较两种方法,可以发现前者检测得到的突变峰峰高明显高于后者。结论利用激光显微切割技术富集肿瘤细胞能有效去除间质细胞对肿瘤细胞的基因组干扰,更能体现肿瘤细胞基因组状态,有效提高EGFR基因突变检测检出率,有利于患者靶向治疗的临床筛选。 展开更多
关键词 激光显微切割 非小细胞肺癌 表皮生长因子 突变
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