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Label free方法研究大鼠脑脊液中锰毒性相关的差异蛋白质组 被引量:2
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作者 敬海明 张拓 +11 位作者 杨帆 刘君丽 董一文 赵超英 马玲 刘建中 张鹏 郑珊 李红 张思玉 魏开华 李国君 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期247-253,共7页
目的本研究旨在探查临床可介入性生物样本脑脊液中锰毒性相关的差异表达蛋白谱,为今后深入的毒性机制研究和病程相关生物标志研究提供科学数据。方法运用非标记(label free)定量蛋白质组学技术分析比较成年大鼠经腹腔注射暴露于氯化锰(... 目的本研究旨在探查临床可介入性生物样本脑脊液中锰毒性相关的差异表达蛋白谱,为今后深入的毒性机制研究和病程相关生物标志研究提供科学数据。方法运用非标记(label free)定量蛋白质组学技术分析比较成年大鼠经腹腔注射暴露于氯化锰(以锰计,6 mg Mn/kg BW)1个月(亚急性)、3个月(亚慢性)及3个月加30 d恢复期后与其相应对照组(腹腔注射生理盐水)大鼠的脑脊液中蛋白质的差异表达情况,并根据蛋白质的基因本体(gene ontology,GO)注释对所鉴定蛋白进行了分类分析。结果本研究共鉴定到173个蛋白质,经差异性比较与重复蛋白剔除后获得123个锰毒性相关的差异表达蛋白,其中,染锰后55个蛋白质表达量上调,68个蛋白质表达量下调。根据差异性,123个差异表达蛋白可分为4个层次,分别为表达升高(4个),表达下降(2个),仅在对照组鉴定到(66个),仅在染毒组鉴定到(51个)。对123个差异蛋白按其GO注释分别进行细胞组件、分子功能及生物学过程分类后发现,差异表达蛋白主要来自于细胞核、细胞外基质及细胞质,以结合功能为主,少数参与代谢、应对刺激等生物学过程,半数以上的生物学过程未知。结论由于脑脊液中的蛋白质多数都是由脉络丛组织合成分泌的,因此上述脑脊液中差异表达的蛋白质组不仅可以作为锰神经毒性作用引起的神经退行性疾病的潜在的生物学标志,而且还为锰致脉络丛(血-脑脊液屏障的组织基础)上皮细胞毒性损伤作用分子机制的深入研究提供线索和实验基础。 展开更多
关键词 脑脊液 脉络丛 非标记(label free)定量蛋白质组学技术 GO分析
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运用高通量蛋白质组学方法鉴定与PRRSV NSP7结合的宿主细胞蛋白 被引量:2
2
作者 董珊 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期620-625,共6页
猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)虽已被国内外科研工作者广泛研究,但其中一些非结构蛋白例如NSP7的结构和功能依然所知甚少,据推测此蛋白对病毒的RNA合成和蛋白翻译过程十分重... 猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)虽已被国内外科研工作者广泛研究,但其中一些非结构蛋白例如NSP7的结构和功能依然所知甚少,据推测此蛋白对病毒的RNA合成和蛋白翻译过程十分重要。本试验运用蛋白质组学技术偶联免疫共沉淀法,并结合生物信息学方法分析,鉴定出12种与PRRSV NSP7产生直接或间接相互作用的宿主细胞蛋白,NSP7与这些蛋白之间的互作关系能够为NSP7的深入研究提供新的途径和思路。 展开更多
关键词 PRRSV NSP7 无标记蛋白组学 细胞互作
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急性胰腺炎患者尿液蛋白质组学分析 被引量:1
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作者 杨妮 白郑海 +5 位作者 邱晓娟 杨宁 张丽 武苗苗 裴红红 张正良 《山东医药》 CAS 2018年第38期20-23,共4页
目的分析急性胰腺炎(AP)患者尿液中特异性生物标志物的蛋白质组学,寻找AP特异性生物标志物。方法收集15例AP患者(AP组)和15例健康查体者(对照组)的尿液标本,两组分别将每5例标本混合成1份(每组3份)。应用非标记质谱定量蛋白质组学技术... 目的分析急性胰腺炎(AP)患者尿液中特异性生物标志物的蛋白质组学,寻找AP特异性生物标志物。方法收集15例AP患者(AP组)和15例健康查体者(对照组)的尿液标本,两组分别将每5例标本混合成1份(每组3份)。应用非标记质谱定量蛋白质组学技术检测尿液蛋白质谱,分析比较差异表达蛋白,通过生物信息学方法分析差异蛋白功能。选取筛选出的差异表达蛋白,采用Western blotting法检测其在AP组和对照组中的表达情况,验证蛋白质组学分析结果。结果两组共发现57个蛋白存在差异表达,AP组28个表达上调,29个表达下调;另有73个蛋白只在对照组中存在,9个蛋白只在AP组存在。差异表达蛋白主要参与对刺激的应答、免疫、代谢等过程的调控。生物信息学分析显示,糖蛋白CD59、免疫球蛋白重链IGHA2被富集在差异最显著的类别。Western blotting检测结果显示,AP组尿液中CD59蛋白表达较对照组升高,IGHA2蛋白表达较对照组降低。结论 AP患者与健康人的尿液蛋白质谱存在差异,糖蛋白CD59、免疫球蛋白重链IGHA2可能作为AP的特异性生物标志物。 展开更多
关键词 急性胰腺炎 非标记质谱定量蛋白质组学 差异表达蛋白 生物标志物 尿液
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基于蛋白质组学技术研究秦川牛肉宰后贮藏过程中肌红蛋白含量及其衍生物转化 被引量:14
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作者 张杏亚 杨波 +4 位作者 李亚蕾 罗瑞明 阮振甜 撒苗苗 赵珺怡 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第7期226-231,共6页
本实验采用4D-非标记蛋白质组学技术研究秦川牛肉贮藏过程中(0~8 d)肌红蛋白含量及其衍生物的转化情况,阐释冷却秦川牛肉中肌红蛋白含量及其衍生物转化的分子机制。结果表明:贮藏过程中,肌红蛋白表达量在宰后0~4 d上升、4~8 d下降,利用... 本实验采用4D-非标记蛋白质组学技术研究秦川牛肉贮藏过程中(0~8 d)肌红蛋白含量及其衍生物的转化情况,阐释冷却秦川牛肉中肌红蛋白含量及其衍生物转化的分子机制。结果表明:贮藏过程中,肌红蛋白表达量在宰后0~4 d上升、4~8 d下降,利用非标记蛋白质组学技术鉴定出与肌红蛋白及其衍生物相关的差异蛋白14种,具体包括代谢酶、氧化还原酶、过氧化物酶、伴侣蛋白4类,这4类蛋白的表达共同调控贮藏过程中肌红蛋白含量的变化及其3种衍生物之间的转化,具体表现为贮藏过程中肌红蛋白表达量整体呈下降趋势,氧合肌红蛋白相对含量持续下降,脱氧肌红蛋白、高铁肌红蛋白相对含量逐渐增加,导致肉色发生褐变。本研究结果有利于理解秦川牛肉贮藏过程肉类变色的复杂生化变化机制。 展开更多
关键词 秦川牛肉 肌红蛋白 肌红蛋白衍生物 4D-非标记蛋白质组学 肉色
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大鲵活性肽对D-半乳糖致小鼠机体氧化损伤的修复作用 被引量:8
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作者 关百婷 李伟 +1 位作者 赵菲 佟长青 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第16期344-352,共9页
为了探究大鲵活性肽抗衰老作用机制,利用非标记定量蛋白质组方法对去除高丰度蛋白质后的灌胃大鲵活性肽小鼠血清进行蛋白质组生物信息学分析。结果表明,去除高丰度蛋白质后的血清中共检测到425种蛋白质,其中26种蛋白质表达量变化显著(P&... 为了探究大鲵活性肽抗衰老作用机制,利用非标记定量蛋白质组方法对去除高丰度蛋白质后的灌胃大鲵活性肽小鼠血清进行蛋白质组生物信息学分析。结果表明,去除高丰度蛋白质后的血清中共检测到425种蛋白质,其中26种蛋白质表达量变化显著(P<0.05)。这些差异表达的低丰度蛋白质参与14个生理过程、具有6种分子功能、存在于7种细胞组分中。其中胞质四氢叶酸合成酶和肌糖原磷酸化酶显著增加(P<0.05),分别增加了1.78和1.05倍,黄嘌呤脱氢酶显著减少(P<0.05),这些酶表达量的增加或降低,可以减少体内自由基的量。综上,大鲵活性肽抗衰老的机制是减少机体内自由基而发挥作用,本研究为大鲵活性肽的开发利用提供了基础数据。 展开更多
关键词 大鲵活性肽 非标记定量蛋白质组 D-半乳糖 氧化损伤 修复 自由基 抗衰老作用
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Xiao-Xu-Ming decoction extract regulates differentially expressed proteins in the hippocampus after chronic cerebral hypoperfusion 被引量:6
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作者 Yue-Hua Wang Ying-Lin Yang +3 位作者 Xiao Cheng Jun Zhang Wan Li Guan-Hua Du 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期470-479,共10页
Xiao-Xu-Ming decoction has been widely used to treat stroke and sequelae of stroke. We have previously shown that the active fractions of Xiao-Xu-Ming decoction attenuate cerebral ischemic injury. However, the global ... Xiao-Xu-Ming decoction has been widely used to treat stroke and sequelae of stroke. We have previously shown that the active fractions of Xiao-Xu-Ming decoction attenuate cerebral ischemic injury. However, the global protein profile and signaling conduction pathways regulated by Xiao-Xu-Ming decoction are still unclear. This study established a two-vessel occlusion rat model by bilateral common carotid artery occlusion. Rats were intragastrically administered 50 or 150 mg/kg Xiao-Xu-Ming decoction for 4 consecutive weeks. Learning and memory abilities were measured with Morris water maze. Motor ability was detected with prehensile test. Coordination ability was examined using the inclined screen test. Neuronal plasticity was observed by immunofluorescent staining. Differentially expressed proteins of rat hippocampus were analyzed by label-free quantitative proteomics. Real time-polymerase chain reaction and western blot assay were used to identify the changes in proteins. Results showed that Xiao-Xu-Ming decoction dramatically alleviated learning and memory deficits, and motor and coordination dysfunction, and increased the expression of microtubule-associated protein 2. Xiao-Xu-Ming decoction extract remarkably decreased 13 upregulated proteins and increased 39 downregulated proteins. The regulated proteins were mainly involved in oxidation reduction process, intracellular signaling cascade process, and protein catabolic process. The signaling pathways were mainly involved in ubiquitin mediated proteolysis and the phosphatidylinositol signaling system. Furthermore, there was an interaction among Rab2 a, Ptpn1, Ppm1 e, Cdk18, Gorasp2, Eps15, Capza2, Syngap1 and Mt-nd1. Protein analyses confirmed the changes in expression of MTND1. The current findings provide new insights into the molecular mechanisms of Xiao-Xu-Ming decoction extract's effects on chronic cerebral hypoperfusion. 展开更多
关键词 nerve REGENERATION chronic cerebral HYPOPERFUSION vascular dementia bilateral common carotid artery occlusion Xiao-Xu-Ming DECOCTION label-free quantitative proteomics MORRIS water MAZE test Nano-LC-ESI LTQ-Orbitrap MS/MS technology neural REGENERATION
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基于Label-free组学研究南极磷虾油对脂代谢的影响 被引量:5
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作者 张迪雅 崔晨茜 +2 位作者 何晓倩 李晔 苏秀榕 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1575-1583,共9页
为了研究南极磷虾油对脂代谢的调节作用,利用非标记(Label-free)蛋白质定量技术,比较分析灌胃南极磷虾油对高脂模型小鼠肝脏蛋白的表达影响。结果表明,与模型组相比,灌胃磷虾油后,试验组和正常组中差异蛋白表达上调的分别有125个和109个... 为了研究南极磷虾油对脂代谢的调节作用,利用非标记(Label-free)蛋白质定量技术,比较分析灌胃南极磷虾油对高脂模型小鼠肝脏蛋白的表达影响。结果表明,与模型组相比,灌胃磷虾油后,试验组和正常组中差异蛋白表达上调的分别有125个和109个,下调表达的分别有99个和95个。进一步分析脂代谢差异蛋白发现,在试验组和正常组中表达上调的分别是棕榈酰蛋白硫酯酶1 (PPT1)、载脂蛋白B100(APOB100)、短支链酰基辅酶A脱氢酶(ACADSB)、3-羟基酰基-CoA脱水酶3(HACD3)和磺基转移酶1A1(SULT1A1);表达下调的分别为酰基辅酶A合成酶中链家族成员3(ACSM3)和酰基辅酶A合成酶家族成员2(线粒体)(ACSF2)。结合脂代谢通路分析和蛋白质相互作用网络图进一步推测,ACADSB、ACSM3和ACSF2等蛋白质在南极磷虾油调节脂代谢中起着重要的调控作用。本研究结果为深入解析南极磷虾油的作用机理和调节脂代谢的分子机制提供了依据。 展开更多
关键词 Label-free蛋白质组学 南极磷虾油 脂代谢 差异蛋白
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基于蛋白质组学探讨粗壮女贞总苷对高脂血症金黄地鼠的调脂作用机制 被引量:5
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作者 张紫文 李晨晨 +4 位作者 潘瑞乐 孙乐 杨润梅 陈爱兵 高南南 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1126-1133,共8页
目的 应用非标记定量(label-free)蛋白质组学技术,探究粗壮女贞总苷(LRTPG)的调脂机制。方法 从高脂血症模型组和LRTPG给药组金黄地鼠肝脏中提取总蛋白,进行label-free蛋白质组学研究。结果 蛋白质组学研究共鉴定出2 231个蛋白质,模型组... 目的 应用非标记定量(label-free)蛋白质组学技术,探究粗壮女贞总苷(LRTPG)的调脂机制。方法 从高脂血症模型组和LRTPG给药组金黄地鼠肝脏中提取总蛋白,进行label-free蛋白质组学研究。结果 蛋白质组学研究共鉴定出2 231个蛋白质,模型组与LRTPG组共549个差异表达蛋白,其中93种蛋白上调,59种蛋白下调,397种蛋白只在模型组或者给药组中有定量值。GO分析表明,这些差异表达蛋白主要参与代谢、转运、氧化还原、磷酸化、信号转导、脂质代谢等生物学过程。KEGG通路分析表明,这些蛋白集中于氧化磷酸化、非酒精性脂肪肝病、PI3K-Akt、cAMP、cGMP-PKG等多条信号通路。一些差异蛋白与脂质代谢密切相关,包括CD36、PK、HSS、GCK、ApoA I、Acly、FABP5等。结论 LRTPG调脂作用可能与CD36、PK、HSS、GCK、ApoA I、Acly、FABP5有关。 展开更多
关键词 粗壮女贞总苷 金黄地鼠 高脂血症 label-free蛋白质组学 生物信息学分析 调脂机制
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非标记定量蛋白质组方法分析鲟鱼肽抗D-半乳糖导致的小鼠衰老作用的研究 被引量:4
9
作者 翟兴月 王庆辉 +2 位作者 赵冠华 李伟 佟长青 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第3期290-295,共6页
为了研究鲟鱼肽抗衰老作用机制,利用非标记定量蛋白质组方法对去除高丰度蛋白后的灌胃鲟鱼肽小鼠血清进行蛋白质组分析。分析结果表明,从去除高丰度蛋白后的血清中共获得442种蛋白,其参与21个生理过程,具有7类分子功能,存在于10个细胞... 为了研究鲟鱼肽抗衰老作用机制,利用非标记定量蛋白质组方法对去除高丰度蛋白后的灌胃鲟鱼肽小鼠血清进行蛋白质组分析。分析结果表明,从去除高丰度蛋白后的血清中共获得442种蛋白,其参与21个生理过程,具有7类分子功能,存在于10个细胞组分中。将模型组与治疗组进行t-test分析,得到3个差异表达蛋白质。在进行生物信息学分析时,通过扩大筛选范围,又增加了6种蛋白质,其中二磷酸甘油酸变位酶(AC:P15327)、载脂蛋白D(AC:P51910)、黄素还原酶(AC:Q923D2)和过氧化物酶-2(AC:Q61171)的上调以及巯基氧化酶1(AC:Q8BND5)的下调可以提高机体清除自由基的能力。这些数据表明,鲟鱼肽抗衰老能力是通过提高机体清除自由基的作用来发挥的。 展开更多
关键词 鲟鱼肽 抗衰老作用 非标记蛋白质组 清除自由基
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抗心磷脂抗体阳性复发性流产小鼠胎盘的差异蛋白组学研究 被引量:5
10
作者 谢雅贞 陆启滨 《生殖医学杂志》 CAS 2021年第2期209-216,共8页
目的探讨抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产小鼠胎盘组织中蛋白的表达谱特征并进行生物信息学分析。方法将20只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组和ACA阳性流产模型组,每组10只。模型组于第1天和第8天通过腹腔注射β2-糖蛋白I(β2-GPI)建... 目的探讨抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产小鼠胎盘组织中蛋白的表达谱特征并进行生物信息学分析。方法将20只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组和ACA阳性流产模型组,每组10只。模型组于第1天和第8天通过腹腔注射β2-糖蛋白I(β2-GPI)建立ACA阳性流产模型,正常对照组于相同时间注射等体积生理盐水,腹腔注射后第18天,雌雄1∶1合笼,观察并记录妊娠时间。妊娠第15天处死小鼠,测量胎鼠、胎盘重量,计算胚胎丢失率,ELISA法检测血清、胎盘中ACA含量。采用Label-free蛋白质组学方法筛选两组小鼠胎盘组织中的差异蛋白,并进行GO富集、KEGG通路以及蛋白相互作网络分析,选择差异蛋白中的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Toll样受体4(TLR-4)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)以及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)进行Western blot验证。结果与正常对照组相比,ACA阳性流产模型组胎鼠及胎盘重量显著下降(P<0.05),胚胎丢失率显著上升(P<0.05),血清、胎盘中ACA含量显著升高(P<0.05)。与正常对照组相比,ACA阳性流产小鼠胎盘组织中鉴别出87个差异表达蛋白,其中35个表达上调,52个表达下调;GO富集分析结果显示差异蛋白主要定位于细胞外,参与跨膜转运活性的调控;KEGG通路分析结果表明差异蛋白主要富集在代谢和磷脂酶D信号通路;蛋白相互作用分析发现差异蛋白中39个蛋白存在相互作用。Western blot验证结果显示,HIF-1α、TLR-4、TSP-1、Tim-3和RORγt表达量在模型组均显著上升(P<0.05),与蛋白组学结果一致。结论成功建立ACA阳性流产小鼠模型。ACA阳性流产小鼠胎盘组织中蛋白表达谱发生显著改变,差异蛋白主要与跨膜转运和代谢通路有关,这些蛋白的差异表达可能与ACA阳性流产有关。 展开更多
关键词 抗心磷脂抗体阳性流产 非标记定量蛋白组学 胎盘 生物信息学
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Label-free quantitative proteomics reveals fibrinopeptide B and heparin cofactorⅡas potential serum biomarkers in respiratory syncytial virus-infected mice treated with Qingfei oral liquid formula 被引量:3
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作者 ZHOU Li-Hua XU Jian-Ya +2 位作者 DAI Chen FAN Yi-Man YUAN Bin 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期241-251,共11页
Respiratory syncytial virus(RSV) is a leading cause of acute lower respiratory tract infections. Qingfei oral liquid(QFOL), a traditional Chinese medicine, is widely used in clinical treatment for RSV-induced pneumoni... Respiratory syncytial virus(RSV) is a leading cause of acute lower respiratory tract infections. Qingfei oral liquid(QFOL), a traditional Chinese medicine, is widely used in clinical treatment for RSV-induced pneumonia. The present study was designed to reveal the potential targets and mechanism of action for QFOL by exploring its influence on the host cellular network following RSV infection. We investigated the serum proteomic changes and potential biomarkers in an RSV-infected mouse pneumonia model treated with QFOL. Eighteen BALB/c mice were randomly divided into three groups: RSV pneumonia model group(M), QFOL-treated group(Q) and the control group(C). Serum proteomes were analyzed and compared using a label-free quantitative LC-MS/MS approach. A total of 172 protein groups, 1009 proteins, and 1073 unique peptides were successfully identified. 51 differentially expressed proteins(DEPs) were identified(15 DEPs when M/C and 43 DEPs when Q/M; 7 DEPs in common). Classification and interaction network showed that these proteins participated in various biological processes including immune response, blood coagulation, complement activation, and so forth. Particularly, fibrinopeptide B(FpB) and heparin cofactor Ⅱ(HCII) were evaluated as important nodes in the interaction network, which was closely involved in coagulation and inflammation. Further, the Fp B level was increased in Group M but decreased in Group Q, while the HCII level exhibited the opposite trend. These findings not only indicated FpB and HCII as potential biomarkers and targets of QFOL in the treatment of RSV pneumonia, but also suggested a regulatory role of QFOL in the RSV-induced disturbance of coagulation and inflammation-coagulation interactions. 展开更多
关键词 Qingfei oral liquid Respiratory syncytial virus-infected mouse pneumonia model Label-free quantitative proteomics Potential serum biomarkers RSV-host interaction network
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尿素与蚯蚓水解液混合物的活性成分及其抗逆促生效果 被引量:3
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作者 毕清扬 张华杰 +4 位作者 梅傲雪 崔文静 李俊良 朱屹 张小梅 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2021年第4期109-116,共8页
以尿素为裂解物制备蚯蚓水解液,研究其主要活性成分及其在植物抗逆促生方面的效果。结果表明:蚯蚓与尿素按质量比5∶1混合制备的新鲜蚯蚓水解液在稀释2 000倍后施用,可基本解除对种子萌发的影响,显著提高叶片SPAD值,促进植株根系生长。... 以尿素为裂解物制备蚯蚓水解液,研究其主要活性成分及其在植物抗逆促生方面的效果。结果表明:蚯蚓与尿素按质量比5∶1混合制备的新鲜蚯蚓水解液在稀释2 000倍后施用,可基本解除对种子萌发的影响,显著提高叶片SPAD值,促进植株根系生长。该水解液能显著抑制常见的植物病原菌;稀释10倍时喷施,对番茄灰霉病的防治效果可达74.8%,且能显著提高植株抗逆相关酶活性,使植株保持更高的抗氧化能力。Label-Free定量蛋白质组学研究表明,蚓激酶、α-淀粉酶、纤维素酶、ATP结合蛋白、铁蛋白和超氧化物歧化酶等是主要的具有分子功能的蛋白质。这些蛋白质在大分子物质代谢、应对和抵抗外界不良刺激以及参与细胞杀伤等过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 蚯蚓 抗逆促生 Label-free定量蛋白质组学 抗逆酶 功能注释
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紫红獐牙菜(口山)酮提取物对MPTP致帕金森病小鼠模型的神经保护作用及其机制 被引量:4
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作者 高泽宇 郭涌斐 +3 位作者 孙懿 林铭 蒲小平 赵欣 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期48-54,共7页
目的:探究紫红獐牙菜(口山)酮提取物对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠的神经保护作用及其作用机制。方法:小鼠灌胃(ig)给药14 d(9.0 mg&#... 目的:探究紫红獐牙菜(口山)酮提取物对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠的神经保护作用及其作用机制。方法:小鼠灌胃(ig)给药14 d(9.0 mg·kg-1),后5 d腹腔注射(ip,30 mg·kg^-1)MPTP建立模型,之后进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色、非标记定量蛋白质组学法检测和生物信息学分析。结果:紫红獐牙菜(口山)酮提取物可减少MPTP致帕金森小鼠脑黑质部位多巴胺能神经元的丢失;筛选出150个给药组与模型组之间的差异表达蛋白质;其潜在作用信号通路为泛素介导的蛋白水解、核糖体、硫胺素代谢通路,核心差异蛋白有Hspa13,Rplp1,Rplp2和Rps8。结论:紫红獐牙菜(口山)酮提取物对MPTP所致帕金森小鼠具有神经保护作用,其潜在机制可能包括减少α-syn错误折叠,抑制星形胶质细胞过度活化,减少活性氧簇,减轻炎症反应等。 展开更多
关键词 紫红獐牙菜 (口山)酮提取物 帕金森病 非标记定量蛋白质组学 生物信息学
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一种热蛋白质组学分析数据的归一化方法
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作者 甄雪妍 周宝津 +1 位作者 刘静雯 任艳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第12期40-46,共7页
建立了一种小分子靶标蛋白的鉴定方法,即引入索引保留时间(Indexed retention time,iRT)肽段作为非标记热蛋白质组学(Thermal proteome profiling,TPP)分析定量归一化内标,实现对小分子靶标的准确挖掘.将iRT肽段加入到表征良好的模型药... 建立了一种小分子靶标蛋白的鉴定方法,即引入索引保留时间(Indexed retention time,iRT)肽段作为非标记热蛋白质组学(Thermal proteome profiling,TPP)分析定量归一化内标,实现对小分子靶标的准确挖掘.将iRT肽段加入到表征良好的模型药物甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)处理的293T细胞提取液中,在不同温度加热处理时它们稳定存在,因此可作为定量归一化的标准.实验结果表明,以iRT作为定量校正,不仅对总蛋白含量有良好的校正效果,同时对MTX的靶标蛋白二氢叶酸还原酶(Dihydrofolate reductase,DHFR)热熔解拟合曲线也有一定改善.该方法简单方便、经济高效,具有较强实用性和推广性,为非标记TPP技术的实施及定量准确性提供了重要的实验依据. 展开更多
关键词 非标记定量蛋白质组学 热蛋白质组学分析 索引保留时间 数据归一化
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肌少-骨质疏松症与单纯骨质疏松症患者差异表达蛋白的定量蛋白质组学研究 被引量:4
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作者 余博飞 徐杰 +3 位作者 林院 罗奋棋 俞国雨 许逸洋 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期923-925,共3页
目的构建人肌少-骨质疏松症(SO)和单纯骨质疏松症(OP)的差异表达蛋白质谱,探讨肌肉减少症影响骨代谢的分子机制。方法收集肌少-骨质疏松症与单纯骨质疏松症患者的肌肉组织,采用非标记定量蛋白质组学技术分析和鉴定两组(每组3重复)样本... 目的构建人肌少-骨质疏松症(SO)和单纯骨质疏松症(OP)的差异表达蛋白质谱,探讨肌肉减少症影响骨代谢的分子机制。方法收集肌少-骨质疏松症与单纯骨质疏松症患者的肌肉组织,采用非标记定量蛋白质组学技术分析和鉴定两组(每组3重复)样本之间差异表达的蛋白质,并应用基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)对差异蛋白质进行生物信息学分析。结果共筛选出1 507种SO组与OP组差异表达蛋白,其中差异有统计学意义的共有53种,有6种在SO患者中表达上调,47种蛋白质表达下调。GO分析显示,SO组中差异表达的蛋白主要参与氧化还原过程、蛋白水解、代谢过程;主要的分子功能体现在蛋白质结合、三磷酸腺苷(ATP)结合和钙离子结合;SO组与OP组中最重要的细胞结构差异为定位于膜的整体组分。结合KEGG通路分析,初步筛选间隙连接蛋白43(Cx43)、电压依赖性L-型钙通道(VLCC)、超氧化物歧化酶(SOD)等骨质疏松相关蛋白。结论Cx43、VLCC、SOD蛋白可能与肌少症患者容易出现骨量丢失有关。 展开更多
关键词 肌少-骨质疏松症 骨质疏松症 非标记定量蛋白质组学 生物信息学分析
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冬枣果实发育过程中非标记定量蛋白质组学分析 被引量:3
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作者 田晏 侯召华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期221-228,共8页
考察冬枣不同成熟阶段的蛋白质组,分析差异表达蛋白质及功能,为研究冬枣成熟发育机制提供理论依据。采集开花后第55(幼果期)、76(果实膨大期)、96(果实白熟期)、116天(果实脆熟期)的沾化冬枣样品,利用非标记定量蛋白质组学技术对4个阶... 考察冬枣不同成熟阶段的蛋白质组,分析差异表达蛋白质及功能,为研究冬枣成熟发育机制提供理论依据。采集开花后第55(幼果期)、76(果实膨大期)、96(果实白熟期)、116天(果实脆熟期)的沾化冬枣样品,利用非标记定量蛋白质组学技术对4个阶段冬枣样品蛋白质组进行分析,各阶段样品与前一阶段相比,得到差异表达蛋白质,并进行基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析。结果表明,4个阶段样品共定性2107个蛋白质,定量1986个蛋白质,各阶段果实与前一阶段相比差异表达蛋白质分别为96、185、138个;差异蛋白质GO显示,主要富集单一生物细胞过程、单一生物代谢过程、化学响应、压力响应等生物学过程。KEGG代谢通路表明,差异表达蛋白显著富集在光合作用、类黄酮生物合成、柠檬烯和蒎烯降解、苯丙烷类生物合成、乙醛酸和二羧酸代谢以及核糖体合成等。冬枣果实不同发育阶段蛋白质组差异显著,差异蛋白质主要参与能量代谢、遗传信息处理和其他次生代谢物的生物合成等途径。 展开更多
关键词 冬枣 非标记定量 蛋白质组学 果实发育
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RUNX3调控胃癌细胞对赫赛汀耐药的非标记定量蛋白质组学研究 被引量:3
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作者 常晋霞 王仕宝 +1 位作者 袁江北 刘文虎 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1953-1964,共12页
肿瘤耐药是多机制、多因子参与的复杂生物学过程,而肿瘤细胞抗凋亡是导致其耐药的重要原因。前期研究显示,Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)在胃癌赫赛汀耐药细胞中与DNA的结合活性显著增强,然而其活性变... 肿瘤耐药是多机制、多因子参与的复杂生物学过程,而肿瘤细胞抗凋亡是导致其耐药的重要原因。前期研究显示,Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)在胃癌赫赛汀耐药细胞中与DNA的结合活性显著增强,然而其活性变化是否与耐药有关,尚不明确。本实验以赫赛汀耐药细胞(NCI N87R)为对象,采用CRISPR/Cas9构建RUNX3敲除细胞株(△RUNX3/NCI N87R),探究RUNX3在赫赛汀耐药中的作用及其潜在机制。在此基础上,基于非标记定量蛋白质组学研究△RUNX3/NCI N87R细胞蛋白质表达谱;采用倍数变化及显著性水平筛选差异表达分子;利用GeneAnalytics数据库通路富集分析;使用DAVID Bioinformatics Resources数据库基因本体分析;基于STRING数据库构建蛋白-蛋白互作网络。结果表明,敲除RUNX3使NCI N87R细胞对赫赛汀的敏感性增加。蛋白质组数据显示,577种基因在△RUNX3/NCI N87R中的表达显著改变,其中上调191种、下调386种。根据通路富集率及显著性水平,自噬、细胞周期、凋亡、线粒体脂肪酸β氧化、神经源性位点notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,NOTCH1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、Hedgehog及DNA损伤响应信号变化显著(P<0.05),表明敲除RUNX3干扰耐药细胞多条通路。免疫印迹证实,自噬相关蛋白(autophagy-related protein,ATG)13、7及BECN1在△RUNX3/NCI N87R中的表达显著增加,而细胞周期调节分子丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Chk2(serine/threonine-protein kinase Chk2,CHEK2)及凋亡调节分子Bcl-2(apoptosis regulator Bcl-2,BCL2)显著下调;与NCI N87R细胞相比,磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(p-AKT)在△RUNX3/NCI N87R中的表达显著降低(P<0.01),且赫赛汀能够降低p-AKT水平,表明敲除RUNX3改变了耐药细胞周期、增加赫赛汀对p-AKT的抑制作用,促进其自噬并诱导凋亡,提示RUNX3可能是逆转或降低胃癌赫赛汀耐药的潜在 展开更多
关键词 RUNT相关转录因子3 赫赛汀 耐药性 非标记定量蛋白质组学 自噬 凋亡
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G1与G95代次鸡滑液囊支原体的差异蛋白质组学分析 被引量:3
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作者 刘凡 郭磊 +4 位作者 陈秀红 边海霞 郭亚男 姜肖军 何生虎 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第6期52-60,共9页
选用非标记(label-free)定量蛋白质组学的方法对鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)G1和G95代次样品进行差异蛋白鉴定。结果显示:2个代次鸡滑液囊支原体样本共检测出428个鸡滑液囊支原体可信蛋白,通过条件筛选2个代次支原体共有含ABC... 选用非标记(label-free)定量蛋白质组学的方法对鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)G1和G95代次样品进行差异蛋白鉴定。结果显示:2个代次鸡滑液囊支原体样本共检测出428个鸡滑液囊支原体可信蛋白,通过条件筛选2个代次支原体共有含ABC转运蛋白、胸苷激酶、组氨酸-tRNA连接酶、磷酸腺苷蛋白、血凝素、谷氨酸-tRNA连接酶等组成成分的69个差异蛋白,包括14个无特征蛋白质;G95代次相比于G1代次菌株有10个下调、59个上调差异蛋白;GO富集分析结果显示差异蛋白在细胞组成、分子的化学活性或结合活性以及执行某些特定功能的生物进程中都有参与。G95代次较G1代次菌株毒力弱化是否与差异蛋白有关值得进一步探讨。 展开更多
关键词 鸡滑液囊支原体 不同代次 非标记定量蛋白组学 差异蛋白
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Fe_(3)O_(4)对施氏假单胞菌反硝化过程的影响 被引量:2
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作者 徐珊姗 周金登 +2 位作者 双陈冬 周庆 李爱民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期3685-3695,共11页
生物反硝化是目前废水深度处理中应用最为广泛的硝酸盐氮处理技术,但该方法一般停留时间较长,在冬季因低温处理效果欠佳,因此有必要开发反硝化强化技术。以施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri为研究对象,考察了不同投加量下Fe_(3)O_(4)对... 生物反硝化是目前废水深度处理中应用最为广泛的硝酸盐氮处理技术,但该方法一般停留时间较长,在冬季因低温处理效果欠佳,因此有必要开发反硝化强化技术。以施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri为研究对象,考察了不同投加量下Fe_(3)O_(4)对P.stutzeri反硝化过程的影响。结果显示当Fe_(3)O_(4)投加量由0 mg/L增至4000 mg/L时,硝酸盐氮最大比降解速率由18.0 h^(-1)增加至23.7 h^(-1),体系中的总蛋白含量以及细菌体内的铁含量显著增加。RT-qPCR和非标记(Label-free)定量蛋白组学分析表明,投加4000 mg/L Fe_(3)O_(4)体系中的P.stutzeri,其反硝化功能基因napA、narJ、nirB、norR、nosZ表达量分别提高了55.7%、24.9%、24.5%、36.5%、120%,对应反硝化还原酶Nap、Nar、Nir、Nor、Nos表达量提高了85.0%、147%、16.5%、47.1%、95.9%。对比体系中“游离细菌”和“Fe_(3)O_(4)粘附细菌”,发现二者的反硝化功能基因以及反硝化相关酶没有显著差别;而Fe_(3)O_(4)粘附细菌电子传递相关蛋白表达量有所提高,说明了Fe_(3)O_(4)通过与细菌直接接触促进其生长代谢,导致体系中细菌总量的增加,从而提高反硝化速率。该结果可为反硝化强化技术的开发提供理论支撑。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌 Fe_(3)O_(4) 反硝化脱氮 铁运载 非标记蛋白组学
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镉、硒胁迫下华贵栉孔扇贝消化腺差异蛋白表达 被引量:1
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作者 郝雅茹 高加龙 +2 位作者 曹文红 秦小明 苏伟明 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期48-58,共11页
【目的】应用蛋白组学技术解析镉(Cd)、硒(Se)胁迫对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)组织中蛋白表达的影响,为扇贝金属蓄积和耐受机制研究提供数据。【方法】将华贵栉孔扇贝置于分别含有Cd、Se、Cd+Se的海水中,采用非标记定量Label-free... 【目的】应用蛋白组学技术解析镉(Cd)、硒(Se)胁迫对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)组织中蛋白表达的影响,为扇贝金属蓄积和耐受机制研究提供数据。【方法】将华贵栉孔扇贝置于分别含有Cd、Se、Cd+Se的海水中,采用非标记定量Label-free蛋白组学技术分析对照组和处理组扇贝消化腺的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并对其进行GO富集、KEGG通路富集和蛋白质相互作用网络分析。【结果】CT组的闭壳肌和外套膜中的Cd质量分数显著高于鳃、性腺和消化腺(P<0.05)。除闭壳肌外,在镉、硒、Cd+Se胁迫下扇贝其他组织中的Cd或Se质量分数均显著增加(P<0.05)。Se+Cd胁迫下扇贝闭壳肌、外套膜和消化腺中的Se质量分数显著降低(P<0.05),说明扇贝中Se和Cd相互拮抗。共鉴定出887个DEPs;与对照组相比,Se组45个上调蛋白、9个下调蛋白,Cd组15个上调蛋白、10个下调蛋白,CdSe组13个上调蛋白、3个下调蛋白。生物信息学分析发现,Cd、Se胁迫的DEPs主要涉及参与细胞过程、代谢过程和生物调节,这些过程与KEGG通路分析所强调的信号通路有关。【结论】Cd、Se胁迫影响华贵栉孔扇贝消化腺多种蛋白的表达,导致相关代谢紊乱。 展开更多
关键词 华贵栉孔扇贝 胁迫 非标记定量蛋白组学
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