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Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
5
1
作者
窦立萍
达万明
+7 位作者
王畅
康慧媛
赵瑜
孙敬芬
靳海杰
王全顺
高春记
于力
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2008年第3期663-666,共4页
本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载...
本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载体,应用PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用LV-shkir2ds4,包装系统质粒共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果表明,PCR和测序结果证实成功地构建了kir2ds4shRNA的慢病毒载体LV-shkir2ds4。293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml。结论:成功地构建了人kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。
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关键词
RNA干扰
kir
2
ds
4
基因
慢病毒载体
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职称材料
中国南方汉族人群KIR2DS4基因的多态性
2
作者
甄建新
张国彬
+4 位作者
喻琼
何柳媚
徐筠娉
邹红岩
邓志辉
《中华医学遗传学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期21-25,共5页
目的探讨南方汉族人群KIR2DS4分子遗传多态性。方法应用特异性PCR引物扩增306名无关个体KIR2DS4基因的全部外显子，确定KIR2DS4框架基因的有无。对存在KIR2DS4的样本，对该基因的全部外显子进行双向测序，用Assign3．5分析软件鉴定基因...
目的探讨南方汉族人群KIR2DS4分子遗传多态性。方法应用特异性PCR引物扩增306名无关个体KIR2DS4基因的全部外显子，确定KIR2DS4框架基因的有无。对存在KIR2DS4的样本，对该基因的全部外显子进行双向测序，用Assign3．5分析软件鉴定基因型。在测序分型中出现与国际IPD-KIR数据库不完全匹配结果的样本，进行cDNA分子克隆和单倍型测序。结果306名南方汉族无关个体中，携带KIR2DS4基因的个体为297例，经测序分型，均获得了清晰的序列峰图。共检出了7种等位基因，其中3个新等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名。检出的等位基因及其频率分别为KIR2DS4＊00101（78．8％）、＊003（10．5％）、＊004（16．0％）、＊010（23．2％）、＊017（0．3％）、＊00105（0．3％）和＊018（0．7％），未检出KIR2DS4＊007等位基因。能正常表达于细胞表面的等位基因（KIR2DS4＊00101、＊017、＊00105）和不能正常表达于细胞表面的等位基因（KIR2DS4＊003、＊004、＊010、＊018）的检出比例分别为79．4％及50．4％，约为1．6：1。结论获得了南方汉族人群KIR2DS4等位基因分子遗传多态性，可为移植、疾病关联研究及人类进化等提供基础数据。
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关键词
kir
2
ds
4
框架基因
测序分型
CDNA
分子克隆
新等位基因
原文传递
题名
Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
5
1
作者
窦立萍
达万明
王畅
康慧媛
赵瑜
孙敬芬
靳海杰
王全顺
高春记
于力
机构
中国人民解放军总医院血液科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2008年第3期663-666,共4页
基金
全军医学科研重大项目
编号01MB068
文摘
本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载体,应用PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用LV-shkir2ds4,包装系统质粒共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果表明,PCR和测序结果证实成功地构建了kir2ds4shRNA的慢病毒载体LV-shkir2ds4。293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml。结论:成功地构建了人kir2ds4基因RNAi慢病毒载体。
关键词
RNA干扰
kir
2
ds
4
基因
慢病毒载体
Keywords
RNA
interference
kir
2
ds
4
gene
lentiviral
vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q782
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职称材料
题名
中国南方汉族人群KIR2DS4基因的多态性
2
作者
甄建新
张国彬
喻琼
何柳媚
徐筠娉
邹红岩
邓志辉
机构
广东省深圳市血液中心免疫遗传研究室
出处
《中华医学遗传学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期21-25,共5页
基金
国家自然科学基金（81373158）
文摘
目的探讨南方汉族人群KIR2DS4分子遗传多态性。方法应用特异性PCR引物扩增306名无关个体KIR2DS4基因的全部外显子，确定KIR2DS4框架基因的有无。对存在KIR2DS4的样本，对该基因的全部外显子进行双向测序，用Assign3．5分析软件鉴定基因型。在测序分型中出现与国际IPD-KIR数据库不完全匹配结果的样本，进行cDNA分子克隆和单倍型测序。结果306名南方汉族无关个体中，携带KIR2DS4基因的个体为297例，经测序分型，均获得了清晰的序列峰图。共检出了7种等位基因，其中3个新等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名。检出的等位基因及其频率分别为KIR2DS4＊00101（78．8％）、＊003（10．5％）、＊004（16．0％）、＊010（23．2％）、＊017（0．3％）、＊00105（0．3％）和＊018（0．7％），未检出KIR2DS4＊007等位基因。能正常表达于细胞表面的等位基因（KIR2DS4＊00101、＊017、＊00105）和不能正常表达于细胞表面的等位基因（KIR2DS4＊003、＊004、＊010、＊018）的检出比例分别为79．4％及50．4％，约为1．6：1。结论获得了南方汉族人群KIR2DS4等位基因分子遗传多态性，可为移植、疾病关联研究及人类进化等提供基础数据。
关键词
kir
2
ds
4
框架基因
测序分型
CDNA
分子克隆
新等位基因
Keywords
kir
2
ds
4
framework
gene
Sequence-based
typing
Complementary
DNA
Cloning
and
haplotype
sequencing
Novel
allele
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
窦立萍
达万明
王畅
康慧媛
赵瑜
孙敬芬
靳海杰
王全顺
高春记
于力
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2008
5
下载PDF
职称材料
2
中国南方汉族人群KIR2DS4基因的多态性
甄建新
张国彬
喻琼
何柳媚
徐筠娉
邹红岩
邓志辉
《中华医学遗传学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
原文传递
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