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人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响
被引量：
5
1
作者
宋庆贺
于欣平
+3 位作者
陈苏民
陈南春
代忠明
侯立朝
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期542-546,共5页
为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化后的全长Lrp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.Western印迹表明,吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合,并有较高免疫印迹滴...
为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化后的全长Lrp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.Western印迹表明,吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合,并有较高免疫印迹滴度,为Lrp功能研究提供了重要的工具.激光共聚焦扫描荧光显微镜检测显示Lrp主要位于细胞核膜周围.Western印迹、RT-PCR以及细胞免疫组化染色结果都表明,用LPS刺激后,lrp在人HEK293和U937细胞内的表达均有明显的上升.结果提示,Lrp可能与对Lrp介导的反应有关.
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关键词
脂多糖
人脂多糖应答基因
抗体制备
细胞内定位
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职称材料
稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立
被引量：
1
2
作者
刘霄卉
罗军荣
+2 位作者
斯日古楞
周建华
马学恩
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期395-398,共4页
为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,...
为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,对转染阳性细胞进行纯化,获得稳定表达JSRVSU蛋白的A549细胞系。以间接免疫荧光及westernblot鉴定SU的表达状况,并运用共聚焦显微镜确认SU蛋白的亚细胞定位。结果表明,重组蛋白SU在A549细胞中有效表达,而且主要分布于细胞质中。该细胞系的建立为SU生物学功能的体外研究提供了平台。
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关键词
绵羊肺腺瘤病毒
表面蛋白
真核表达
细胞内定位
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职称材料
PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响
3
作者
付鹤玲
李靓云
+1 位作者
李蕾
李建民
《现代生物医学进展》
CAS
2011年第10期1869-1872,共4页
目的:构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法:逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcl10A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微...
目的:构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法:逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcl10A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微镜下观察定位,标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果:获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株,PP2R1A在细胞内广泛表达,结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论:PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型,在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株,研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期,减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。
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关键词
PP2R1A
单克隆
亚细胞定位
细胞周期
原文传递
题名
人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响
被引量：
5
1
作者
宋庆贺
于欣平
陈苏民
陈南春
代忠明
侯立朝
机构
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
西京医院麻醉科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期542-546,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30471675)资助~~
文摘
为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化后的全长Lrp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.Western印迹表明,吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合,并有较高免疫印迹滴度,为Lrp功能研究提供了重要的工具.激光共聚焦扫描荧光显微镜检测显示Lrp主要位于细胞核膜周围.Western印迹、RT-PCR以及细胞免疫组化染色结果都表明,用LPS刺激后,lrp在人HEK293和U937细胞内的表达均有明显的上升.结果提示,Lrp可能与对Lrp介导的反应有关.
关键词
脂多糖
人脂多糖应答基因
抗体制备
细胞内定位
Keywords
lipopolysaccharide
（
LPS
）
human
lipopolysaccharide
responsed
（
hlrp
）
gene
antibody
preparation
intracellular
location
分类号
Q257 [生物学—细胞生物学]
Q78
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职称材料
题名
稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立
被引量：
1
2
作者
刘霄卉
罗军荣
斯日古楞
周建华
马学恩
机构
内蒙古农业大学兽医学院
江西农业大学动物科学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期395-398,共4页
基金
国家自然科学基金项目(31060332)
兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金项目(SKLVBF2008)
文摘
为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,对转染阳性细胞进行纯化,获得稳定表达JSRVSU蛋白的A549细胞系。以间接免疫荧光及westernblot鉴定SU的表达状况,并运用共聚焦显微镜确认SU蛋白的亚细胞定位。结果表明,重组蛋白SU在A549细胞中有效表达,而且主要分布于细胞质中。该细胞系的建立为SU生物学功能的体外研究提供了平台。
关键词
绵羊肺腺瘤病毒
表面蛋白
真核表达
细胞内定位
Keywords
Jaagsiekte
retrovirus
surface
protein
eukaryotic
expression
intracellular
location
分类号
S825.65 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响
3
作者
付鹤玲
李靓云
李蕾
李建民
机构
南京医科大学基础医学院
出处
《现代生物医学进展》
CAS
2011年第10期1869-1872,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30971092)
文摘
目的:构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法:逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcl10A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微镜下观察定位,标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果:获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株,PP2R1A在细胞内广泛表达,结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论:PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型,在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株,研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期,减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。
关键词
PP2R1A
单克隆
亚细胞定位
细胞周期
Keywords
PP2R1
A
Monoclonal
cell
line
intracellular
location
Cell
cycle
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
Q78
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响
宋庆贺
于欣平
陈苏民
陈南春
代忠明
侯立朝
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
下载PDF
职称材料
2
稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立
刘霄卉
罗军荣
斯日古楞
周建华
马学恩
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
下载PDF
职称材料
3
PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响
付鹤玲
李靓云
李蕾
李建民
《现代生物医学进展》
CAS
2011
0
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已选择
0
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