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重组hFOXA2和hPDX1慢病毒载体诱导乳牙牙髓干细胞重编程为胰岛素生成样细胞 被引量：3
1
作者 石建峰 朱春晖 +3 位作者 刘瑾 孙俊毅 饶国洲 李昂 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期634-642,共9页
目的:构建重组转录因子hFOXA2和hPDX1慢病毒载体,转染乳牙牙髓干细胞,诱导其向胰岛素生成样细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法:酶消化法分离培养人牙髓干细胞(DPSCs),有限稀释法纯化培养,流式细胞术分析细胞表面标志,并进... 目的:构建重组转录因子hFOXA2和hPDX1慢病毒载体,转染乳牙牙髓干细胞,诱导其向胰岛素生成样细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法:酶消化法分离培养人牙髓干细胞(DPSCs),有限稀释法纯化培养,流式细胞术分析细胞表面标志,并进行体外多向分化诱导验证;构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,Lipofectamine2000转染293T细胞进行病毒包装,通过荧光细胞计数测定病毒感染效率和滴度;以最佳感染复数(MOI)感染牙髓干细胞,诱导其体外重编程为胰岛素生成样细胞,免疫荧光染色测定PDX1、FOXA2及胰岛素原表达,ELISA法检测胰岛素分泌情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外成功分离培养人DPSCs;细胞表面表达STRO-1(98.01%)、CDl46(98.51%)、CD34(99.54%)和CD45(24.08%)。体外成骨、成软骨、成脂肪诱导分化特异性染色阳性;成功构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,双酶切和测序鉴定与GenBank的序列完全符合;病毒包装效率分别为(96.15±0.17)%和(95.49±0.21)%,感染滴度约为1.80×108GTU/mL,最佳MOI为20;诱导后的细胞表达胰岛素原、FOXA2和PDX1,胰岛素分泌量为1.92μmol/L,较未诱导组和对照组均显著增高(P<0.01)。结论:DPSCs经重组转录因子慢病毒载体Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1转染诱导,可启动细胞重编程机制,形成胰岛素生成样细胞,可作为糖尿病基因治疗的种子细胞。 展开更多
关键词 乳牙牙髓干细胞 表面标志 诱导分化 细胞编程 胰岛素分泌
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海地瓜多肽体外降糖活性评价 被引量：3
2
作者 王倩 扆雪涛 +4 位作者 王宁丽 裴栋 魏鉴腾 邸多隆 王利涛 《食品科技》 CAS 北大核心 2018年第8期245-248,共4页
目的:运用多种体外活性筛选方法评价海地瓜多肽的降糖活性,为海地瓜多肽进一步开发利用提供支持。方法:通过α-淀粉酶抑制剂筛选方法、DPP4抑制剂筛选方法及测定高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素含量等多种体外降糖评价方法测定了海地瓜多... 目的:运用多种体外活性筛选方法评价海地瓜多肽的降糖活性,为海地瓜多肽进一步开发利用提供支持。方法:通过α-淀粉酶抑制剂筛选方法、DPP4抑制剂筛选方法及测定高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素含量等多种体外降糖评价方法测定了海地瓜多肽的降糖活性。结果:多种体外降糖活性评价结果显示,海地瓜多肽可有效抑制α-淀粉酶活性、DPP4活性,同时可显著提升高糖损伤胰岛β细胞的胰岛素分泌量。结论:海地瓜多肽具有一定的降糖活性,可为后期海地瓜多肽的研发提供一定的理论支持。 展开更多
关键词 海地瓜多肽 Α-淀粉酶抑制剂 DPP4抑制剂 胰岛素分泌量
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大鼠未羧化骨钙素融合蛋白的表达纯化及活性鉴定 被引量：2
3
作者 高璟英 任乐乐 +4 位作者 丁亚琴 钟向琴 白涛 刘云峰 章毅 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期806-809,共4页
目的研究表达和纯化大鼠未羧化骨钙素融合蛋白并鉴定其活性。方法将大鼠的骨钙素(BGLAP)基因克隆到p Sumo-Mut表达载体中,构建小泛素相关修饰物-骨钙素质粒(p Sumo-BGLAP)并进行质粒酶切及测序鉴定。质粒在大肠杆菌的表达系统中转化后,... 目的研究表达和纯化大鼠未羧化骨钙素融合蛋白并鉴定其活性。方法将大鼠的骨钙素(BGLAP)基因克隆到p Sumo-Mut表达载体中,构建小泛素相关修饰物-骨钙素质粒(p Sumo-BGLAP)并进行质粒酶切及测序鉴定。质粒在大肠杆菌的表达系统中转化后,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),11℃低温诱导方法,表达出小泛素相关修饰物-骨钙素(Sumo-BGLAP)融合蛋白。融合蛋白通过Ni亲和纯化方法被纯化,通过胰岛素分泌实验被鉴定生物活性。结果质粒的酶切及测序结果显示与目的基因的序列和蛋白分子量吻合,表明质粒p Sumo-BGLAP构建成功。经转化、诱导和纯化后较高纯度的Sumo-BGLAP融合蛋白被获得。胰岛素分泌实验结果显示,16.7 mmol·L^(-1)葡萄糖下,胰岛素分泌为(37.64±3.80)μU·L^(-1),16.7 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.03 ng·m L^(-1)Sumo-BGLAP融合蛋白作用时,胰岛素分泌为(63.91±4.67)μU·L^(-1),16.7 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.3 ng·m L^(-1)Sumo-BGLAP融合蛋白作用时,胰岛素分泌为(68.47±5.83)μU·L^(-1)(均P<0.01)。结论大鼠未羧化骨钙素的融合蛋白被成功表达和纯化,并且有生物活性,能用于进一步研究其对葡萄糖代谢的调节作用。 展开更多
关键词 小泛素相关修饰物 骨钙素 原核表达 胰岛素分泌
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