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毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析
被引量：
2
1
作者
刘海峰
周祥山
+3 位作者
庞甲佩
刘立岗
胡永水
张元兴
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期565-571,共7页
利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白...
利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过MALDI-TOF-MS和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。
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关键词
毕赤酵母
胰岛素前体
反相层析
MALDI—TOF—MS
N末端测序
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职称材料
题名
毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析
被引量：
2
1
作者
刘海峰
周祥山
庞甲佩
刘立岗
胡永水
张元兴
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
山东阿华生物药业有限公司
山东东阿阿胶股份有限公司
出处
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期565-571,共7页
基金
国家科技重大专项(2011ZX09202-301-05)
文摘
利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过MALDI-TOF-MS和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。
关键词
毕赤酵母
胰岛素前体
反相层析
MALDI—TOF—MS
N末端测序
Keywords
Pichiapastoris
insulin
precursor
（
ip
）
revered
phase
chromatography（RPC）
MALDI-
TOF-MS
N
terminal
sequencing
分类号
Q815 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析
刘海峰
周祥山
庞甲佩
刘立岗
胡永水
张元兴
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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