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酸敏感离子通道蛋白与组织型激肽释放酶相互作用的研究 被引量：1
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作者 苏敬敬 董强 《神经损伤与功能重建》 2009年第5期324-328,共5页
目的:观察酸敏感离子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)与组织型激肽释放酶(TK)之间是否存在相互作用。方法:RT-PCR分别获得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his中,脂质体法分别将pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASI... 目的:观察酸敏感离子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)与组织型激肽释放酶(TK)之间是否存在相互作用。方法:RT-PCR分别获得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his中,脂质体法分别将pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染至人胚胎肾细胞(HEK293T),免疫共沉淀分别用抗Myc及抗TK抗体观察两者间有无相互作用。将ASICs融合蛋白与TK(100μg/mL)共孵育,SDS-PAGE分别用抗Myc及抗TK抗体检测蛋白表达。结果:pcDNA3.1-TK和pcD-NA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染后,SDS-PAGE显示抗TK抗体检测后在转染细胞内见有56 kDa的TK条带出现,但抗Myc抗体作用未见ASICs目的条带出现。纯化的ASIC1a、ASIC2a融合蛋白与TK共孵育后,SDS-PAGE显示抗Myc抗体检测后在约66 kDa处有融合蛋白表达条带,但抗TK抗体检测后在56 kDa处无条带出现。结论:TK与ASIC1a、TK与ASIC2a之间无相互作用。 展开更多
关键词 酸敏感离子通道 组织型激肽释放酶 相互作用 重组质粒
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