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题名金黄色葡萄球菌肠毒素C2基因定点突变分析
被引量：4
- 1
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作者
杨浩民
郁建平
胡风庆
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机构
贵州大学生命科学学院
辽宁大学生命科学院
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出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1334-1336,共3页
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基金
辽宁省博士后管委会博士后科研基金项目
辽宁省教育厅攻关项目(A类05L148)
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文摘
目的利用金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因His118定点突变,以获得超抗原性保持不变的减毒肠毒素。方法利用PCR介导的定点突变技术,对SEc2基因中的His118密码子进行定点突变,得到的带有突变基因的表达质粒在大肠埃希菌中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。采用镍离子金属整合(Ni-NTA)亲和层析和凝胶过滤层析纯化突变体蛋白,并测定突变体蛋白超抗原性及体外抑瘤效果。结果应用点突变试剂盒,PCR扩增得到SEc2突变体表达质粒pET-28a-SEC2(H118Y)在1mmol/LIPTG诱导下高效表达。突变体蛋白SEC(H118Y)在2～200 ng时刺激人体细胞增殖效果与SEC2基本一致,体现二者具有相同的超抗原性。SEC(H118Y)时,在2～200 ng与SEC2抑制大肠癌细胞Cx-1效果基本相同,而在500 ng时,SEC(H118Y)抑瘤效果明显优于与SEC2。结论SEC(H118Y)超抗原性和抑瘤活性没有因His118位点的突变而改变。
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关键词
超抗原
金黄色葡萄球菌肠毒素C2
定点突变
PBMC增殖
体外抑瘤
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Keywords
superantigen
staphylococcal enterotoxin C2
site - directed mutant
PBMC proliferation
in vitro anti - tumor assay
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分类号
R378.11
[医药卫生—病原生物学]
R392.11
[医药卫生—基础医学]
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题名金黄色葡萄球菌新型肠毒素基因构建与表达
被引量：1
- 2
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作者
杨帆
王建华
朱丽娜
李辉
回晶
吕永通
胡风庆
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机构
辽宁大学生命科学院生物材料与生物制药实验室
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出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期194-196,共3页
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基金
辽宁省教育厅项目(L2010150200822305L148)
沈阳市发改委高技术研发项目(2010-16)
辽宁大学青年科研基金项目(2010-32)
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文摘
目的从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素。方法采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+-NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果。结果成功扩增到2个新型肠毒素P基因;带有质粒pET28a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1 mmol/L IPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度>95%;纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别>30%;抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2),200 ng/mL时抑瘤效果最佳,分别达到82%和86%。结论成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果。
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关键词
金黄色葡萄球菌肠毒素
超抗原
PBMC增殖
体外抑瘤
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Keywords
staphylococcal enterotoxin
superantigen
PBMC proliferation
in vitro anti-tumor assay
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分类号
R117
[医药卫生—公共卫生与预防医学]
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