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免疫荧光分析的研究进展 被引量:10
1
作者 黄华伟 杜美菊 《应用化工》 CAS CSCD 2007年第4期394-397,共4页
综述了近年来免疫荧光分析的研究进展,介绍了常用的免疫荧光体和它们的优缺点;对于荧光体与生物分子的结合方法,介绍了较常用的基团与生物分子的结合的方法;介绍了免疫荧光复合物常用的分离纯化方法及适用的体系、优缺点等;对免疫荧光... 综述了近年来免疫荧光分析的研究进展,介绍了常用的免疫荧光体和它们的优缺点;对于荧光体与生物分子的结合方法,介绍了较常用的基团与生物分子的结合的方法;介绍了免疫荧光复合物常用的分离纯化方法及适用的体系、优缺点等;对免疫荧光标记复合物的重要表征手段和特点进行了介绍。 展开更多
关键词 免疫荧光分析 免疫标记 荧光体 分离纯化 表征手段
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日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定 被引量:6
2
作者 崔峥 朱小玲 邱高峰 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1495-1501,共7页
Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到pET-32a载体,构建重组表达质粒pET32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGE... Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到pET-32a载体,构建重组表达质粒pET32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGE分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约85ku,表达量约占包涵体总蛋白的48.7%,Western-blotting检测表明,融合蛋白可特异地被anti-HIS标签抗体识别。用Ni2+-NTA纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备获得多克隆抗体,ELISA显示该抗体效价达1∶160000,Western免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白,而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性VASA蛋白,免疫组化进一步显示,VASA蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中,成熟精子中无信号,暗示VASA在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 日本沼虾 VASA蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫鉴定
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非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:3
3
作者 吕璐 钟秋萍 +8 位作者 于婉琪 谢振华 张萌 刘英楠 叶建强 秦爱建 扈荣良 陈宗艳 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期158-165,共8页
本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2×Flag-p30。利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/... 本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2×Flag-p30。利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了抗ASFV p30蛋白的单克隆抗体。SDS-PAGE分析发现,在16℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导6 h后,该p30重组蛋白主要表达在包涵体中且表达量中等,蛋白分子量约为48 kDa。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白印迹法(Western blot)和间接免疫荧光法(IFA)检测获得的单克隆抗体3C2和4A3。结果显示,两株单克隆抗体均具有良好的免疫特性,且3C2株具有Western blot效价。本研究中p30原核重组蛋白及其单克隆抗体的制备为进一步探究p30磷酸化修饰及功能解析奠定基础,并为ASFV特异性诊断技术提供了必要的生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 单克隆抗体 免疫特性
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红缘拟层孔菌多糖分离纯化、结构表征及其免疫活性分析 被引量:2
4
作者 彭慧群 徐小刚 +2 位作者 陈昭月 王力 戴军 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期152-159,共8页
红缘拟层孔菌是一种药用蘑菇以及有待开发利用的食品新资源。从红缘拟层孔菌中提取出水提多糖(FPS)和碱提多糖(FPJ),用DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B对FPS进行分离纯化,首次得到4个多糖级分FPS1-1、FPS1-2、FPS2-1、FPS2-2... 红缘拟层孔菌是一种药用蘑菇以及有待开发利用的食品新资源。从红缘拟层孔菌中提取出水提多糖(FPS)和碱提多糖(FPJ),用DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B对FPS进行分离纯化,首次得到4个多糖级分FPS1-1、FPS1-2、FPS2-1、FPS2-2。MTT实验表明,4个多糖级分均具有一定的免疫活性,其中FPS1-2和FPS2-1具有一定的量效关系,FPS2-1的免疫活性高于其他3个级分。HPSEC法测得FPS1-2、FPS2-1两种级分均呈单一峰,重均相对分子质量分别为9.10×10~3和3.02×10~5。经单糖组成、红外色谱和核磁共振分析,FPS1-2为含有α-(1→6)糖苷键链接方式的杂多糖,FPS2-1为含有α-(1→4)糖苷键链接方式的杂多糖。 展开更多
关键词 红缘拟层孔菌 多糖 分离纯化 免疫活性 结构表征
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非洲猪瘟病毒C-type lectin蛋白的原核表达及其免疫特性研究 被引量:2
5
作者 谢振华 刘英楠 +6 位作者 张萌 敖清莹 吕璐 于婉琪 扈荣良 邬静 陈鸿军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期37-44,共8页
为了制备非洲猪瘟病毒(ASFV)SY18毒株的C-type lectin蛋白多抗,以基因序列优化的真核质粒为模板,扩增EP153R基因,构建原核表达重组质粒pET-32a-EP153R。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,利用IPTG诱导宿主菌表达后,纯化C-type l... 为了制备非洲猪瘟病毒(ASFV)SY18毒株的C-type lectin蛋白多抗,以基因序列优化的真核质粒为模板,扩增EP153R基因,构建原核表达重组质粒pET-32a-EP153R。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,利用IPTG诱导宿主菌表达后,纯化C-type lectin重组蛋白。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备C-type lectin蛋白多抗,利用Western-blot和间接免疫荧光技术鉴定该抗体的反应性和特异性。结果表明,原核表达重组蛋白C-type lectin经IPTG诱导表达成功,大小约为38 ku,其主要以包涵体形式表达,且能与His标签单抗发生反应,C-type lectin蛋白多抗可特异性识别非洲猪瘟病毒C-type lectin蛋白。本研究为非洲猪瘟血清学检测方法的建立及C-type lectin蛋白生物学功能的探究奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 C-type lectin蛋白 抗体 免疫特性
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重组天花粉蛋白的原核表达纯化和免疫原性分析 被引量:1
6
作者 王萍 丁世萍 李继承 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期172-176,共5页
目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性。方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达。用金属螯合层析法纯化重组蛋白。... 目的构建携带天花粉蛋白基因的高效表达载体,对比原核表达的重组天花粉蛋白和天然蛋白的免疫原性。方法通过RT-PCR技术扩增无N端和C端序列的TCS基因,测序鉴定后克隆入表达载体pET-29b中,IPTG诱导表达。用金属螯合层析法纯化重组蛋白。薄层扫描及Bradford法检测纯化后重组蛋白的纯度和含量。间接ELISA法检测重组蛋白和天然蛋白产生的多克隆抗体效价。Western blotting检测重组蛋白与抗天然蛋白抗体之间的免疫反应性。结果1.双酶切鉴定结果表明,pET-29b-TCS成功构建;2.30℃,1 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组蛋白的表达量最高(占细菌总蛋白量的36%),主要以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中;3.His-tag特异性结合树脂纯化后,获得了纯度达95%的重组蛋白,纯化后的蛋白含量为1.2 g/L;4.间接ELISA法检测天然蛋白和重组蛋白产生的抗体效价分别为1∶4 960和1∶5 120;5.Western blotting测纯化的重组蛋白与抗天然蛋白的多克隆抗体之间有特异反应性。结论本实验成功构建了高效表达载体pET-29b-TCS,携带的天花粉蛋白基因无N端和C端编码序列。重组蛋白的抗体效价显著低于天然蛋白,表明天然蛋白的糖基化与其免疫原性之间有一定的关系。 展开更多
关键词 pET-29b-TCS重组表达载体 重组天花粉蛋白 天然天花粉蛋白 免疫原性 逆转录聚合酶连反应
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白喉型鸡痘病毒Gibbs株免疫特性研究
7
作者 朱庆虎 黄骏明 王翠兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期39-42,共4页
白喉型鸡痘病毒Gibbs株能在鸡胚绒毛尿囊膜上良好增殖 ,接种后 12 0小时 ,绒毛尿囊膜明显水肿 ,且有淡黄色痘斑 ,其毒价达到 10 5.2 5~ 10 5.83EID50 / 0 .2ml。用 10倍稀释的病毒悬液肌肉注射 13日龄雏鸡 ,无任何不良反应。用 10 0倍... 白喉型鸡痘病毒Gibbs株能在鸡胚绒毛尿囊膜上良好增殖 ,接种后 12 0小时 ,绒毛尿囊膜明显水肿 ,且有淡黄色痘斑 ,其毒价达到 10 5.2 5~ 10 5.83EID50 / 0 .2ml。用 10倍稀释的病毒悬液肌肉注射 13日龄雏鸡 ,无任何不良反应。用 10 0倍稀释病毒悬液皮下刺种免疫 14~ 40日龄鸡 ,接种后 3~ 6天 ,接种局部出现痘痂。接种后 14天 ,用 10倍稀释的Gibbs株病毒液二次皮下刺种或用鸡痘野毒株经腿部毛囊涂擦 ,免疫鸡未见任何局部反应或其它异常 ,保护率达 10 0 %。免疫后 16 5天 ,保护率仍达80 %。 展开更多
关键词 免疫特性 白喉型鸡痘 GiBBs株
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日本血吸虫p50亲免素基因的扩增及其免疫学特性
8
作者 李孜 余新炳 +2 位作者 吴忠道 徐劲 胡旭初 《热带医学杂志》 CAS 2006年第2期115-119,共5页
目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找... 目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找内含子。将其cDNA序列克隆入pET30a(+)体中,原核表达并纯化表达产物,Western-blot比较重组蛋白与Sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性,间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位。结果Sjp50IP基因DNA序列与cDNA相比,有6个内含子;重组p50IP与Sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性,该蛋白位于Sj成虫的被膜上。结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的cDNA序列和DNA序列,其DNA序列中有6个内含子;重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 中国大陆株 p50亲免素 免疫学特性
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牙鲆淋巴囊肿病毒纯化及不同来源病毒免疫特性比较
9
作者 程顺峰 绳秀珍 战文斌 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2009年第3期49-54,共6页
比较了3种不同的牙鲆淋巴囊肿病毒纯化方法,优化后的方法如下:剥离囊肿表面薄膜,收集内容物,匀浆后再用超声波细胞破碎仪破碎,反复冻融,650×g、1800×g差速离心,30%(W/W)蔗糖垫底超速离心(78500×g)浓缩病毒,最后蔗糖密度... 比较了3种不同的牙鲆淋巴囊肿病毒纯化方法,优化后的方法如下:剥离囊肿表面薄膜,收集内容物,匀浆后再用超声波细胞破碎仪破碎,反复冻融,650×g、1800×g差速离心,30%(W/W)蔗糖垫底超速离心(78500×g)浓缩病毒,最后蔗糖密度梯度超速离心(78500×g)纯化病毒。电镜观察发现,出现在47%~52%蔗糖密度区域的病毒带含有多量、纯净和结构一致的病毒粒子。此外,利用制备的兔抗血清对不同地区的病毒进行了免疫特性分析,Westernblotting检测显示来自威海、青岛及秦皇岛3个地区的淋巴囊肿病毒反应结果是一致的,均有3条蛋白带发生反应,其分子量分别为125、66和55kDa。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病毒 超速离心 分离纯化 免疫特性比较
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日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3的制备及其特性分析 被引量:3
10
作者 殷旭仁 余传信 +5 位作者 谢曙英 钱春艳 宋丽君 王玠 张伟 许永良 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期168-172,共5页
目的制备可溶性重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(rSj14-3-3),并研究其免疫学特性。方法采用反转录聚合酶链反应方法从日本血吸虫成虫mRNA中制备Sj14-3-3基因cDNA片段,将此cDNA片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-3的谷胱甘肽还原酶的基因下... 目的制备可溶性重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(rSj14-3-3),并研究其免疫学特性。方法采用反转录聚合酶链反应方法从日本血吸虫成虫mRNA中制备Sj14-3-3基因cDNA片段,将此cDNA片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-3的谷胱甘肽还原酶的基因下游,构建重组表达质粒Sj14-3-3/pGEX-4T-3。重组质粒转化大肠埃希菌BL21,转化子细菌采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导,表达产物经SDS-PAGE以观察重组GST-Sj14-3-3表达情况。GST-rSj14-3-3经凝血酶消化后,经过Glutathione Sepharose-4B胶亲和层析制备纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3免疫家兔制备免疫兔血清,经免疫印迹试验分析rSj14-3-3免疫原性和反应性。结果日本血吸虫江苏株Sj14-3-3蛋白基因编码序列被成功克隆,开放阅读框的DNA序列与基因库中的登录序列同源性为99.08%。构建的含Sj14-3-3蛋白基因的重组表达质粒经IPTG诱导能表达分子量约为55 kDa的融合蛋白,融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析获得纯化的rSj14-3-3。rSj14-3-3能诱导家兔产生高效价的特异性抗体,该抗体可识别重组和天然的14-3-3蛋白。结论本研究成功制备了可溶性rSj14-3-3,其具有良好的免疫原性与反应性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白 基因克隆 表达 免疫特征
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