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The chemosensory protein of Chinese honeybee, Apis cerana cerana: Molecular cloning of cDNA, immunocytochemical localization and expression 被引量:11
1
作者 LI HongLiang LOU BingGan +1 位作者 CHENG Jia'An GAO QiKang 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第10期1355-1364,共10页
Chemosensory proteins (CSPs) are ubiquitous soluble small proteins isolated from sensory organs thought to be involved in chemical communication. Here we report the first cDNA of CSPs, called Ac-ASP3, cloned and chara... Chemosensory proteins (CSPs) are ubiquitous soluble small proteins isolated from sensory organs thought to be involved in chemical communication. Here we report the first cDNA of CSPs, called Ac-ASP3, cloned and characterized from antennas of adult worker bees in Chinese honeybee, Apis cerana cerana. The Ac-ASP3 cDNA comprises 2 exons, with an ORF of 393-bp encoding 130 aa. Protein signature analyses show that the protein consists of four conserved cysteines and a signal peptide with 19 aa in the N-terminal sequence. The deduced protein sequence shares high homology with Am-ASP3 of Apis mellifera and low similarity with other species of insects. Immunocytochemical localization shows that Ac-ASP3 is only specifically expressed on the antenna contact chemosensilla such as sensilla trichodea B and sensilla basiconica, whereas Ac-ASP3 is scarcely expressed on olfactory chemosensilla such as sensilla placodea. Real-time PCR of Ac-ASP3 transcripts shows that Ac-ASP3 is highly expressed on wings and legs, but expression is lower on antenna. Temporal expression patterns suggest that Ac-ASP3 is expressed during the period of pupa and adults from 1-d to 6-d stages when bees act as house bees, cleaning the comb and taking care of the queen and larvae in comb. The above evidence suggests that Ac-ASP3 is unique in species and is generally not involved in olfaction during searching for honey and pollen. Rather, the protein seems to function in recognition of chemosensory substances on bees' cuticle and mechanical movement of antenna. 展开更多
关键词 中国蜜蜂 化学感应蛋白 CDNA 分子克隆 表达 免疫组化定位
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烟草受精前后胚囊中钙调素的免疫细胞化学定位 被引量:4
2
作者 傅缨 陈以峰 +2 位作者 梁世平 杨弘远 周嫦 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第8期683-687,共5页
应用辣根过氧化物酶标记抗体的光镜免疫细胞化学技术和胶体金标记抗体的电镜免疫细胞化学技术定位烟草(Nicotianatabacumvar.macrophyla)胚囊成员细胞中的钙调素,比较了不同类型细胞之间钙调素的分布... 应用辣根过氧化物酶标记抗体的光镜免疫细胞化学技术和胶体金标记抗体的电镜免疫细胞化学技术定位烟草(Nicotianatabacumvar.macrophyla)胚囊成员细胞中的钙调素,比较了不同类型细胞之间钙调素的分布特点,并探讨了受精前后钙调素在胚囊中分布的变化规律。 展开更多
关键词 烟草 胚囊 钙调素 免疫细胞 化学定位
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The Synthesis and Storage Sites of Phenolic Compounds in the Root and Rhizome of <i>Echinacea purpurea</i> 被引量:1
3
作者 Zengqi Li Tiexin Tang +3 位作者 Shejian Liang Xiping Ning Mei Bai Hong Wu 《American Journal of Plant Sciences》 2012年第4期551-558,共8页
Cichoric acid is the main phenolic compound in the root and rhizome of the medicinal part, Echinacea purpurea that is known for possessing immune enhancing characteristics. In this study, we analysis the the synthesis... Cichoric acid is the main phenolic compound in the root and rhizome of the medicinal part, Echinacea purpurea that is known for possessing immune enhancing characteristics. In this study, we analysis the the synthesis and storage sites of phenolic compound in E. purpurea. We used fluorescent microscopy, transmission electron microscopy, cytochemical and immunocytochemical localization to observe the distribution of phenolic compounds. Our results show that the phenolic compounds were mostly distributed in the cortex parenchyma cells, vascular parenchyma cells and pith parenchyma cells in the root and rhizome, and mainly present in the vacuoles, large intercellular spaces and their surrounding cell walls. No phenolic compounds were observed in the cytoplasm and the organelles. We concluded that the phenolic compounds were synthetized in the cortex parenchyma cells, vascular parenchyma cells and pith parenchyma cells in the root and rhizome, and stored in the vacuoles of parenchyma cells. The above results provided significantly cytological information for further approaching the metabolic regulation and transfer pathways of phenolic compounds in biochemistry and molecular biology. 展开更多
关键词 ECHINACEA PURPUREA Cytochemical localization immunocytochemical localization Phenolic Compounds ROOT and RHIZOME
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中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1的功能模式分析及亚细胞定位 被引量:2
4
作者 谭静 宋欣密 +4 位作者 傅晓斌 唐明珠 吴帆 华启云 李红亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第15期3052-3062,共11页
【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)重组化学感受蛋白CSP1与不同化学信息素的结合功能、模式及其亚细胞定位,明确触角特异表达的CSP1蛋白功能。【方法】将克隆的中蜂CSP1构建至p ET-32a(+)载体并转入BL21(DE3)感受态细... 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)重组化学感受蛋白CSP1与不同化学信息素的结合功能、模式及其亚细胞定位,明确触角特异表达的CSP1蛋白功能。【方法】将克隆的中蜂CSP1构建至p ET-32a(+)载体并转入BL21(DE3)感受态细菌中,挑取单克隆菌落接种于LB培养基,培养过夜后按1%(V/V)进行转接,继续培养至OD600≈0.4左右时,加入IPTG至终浓度为1 mmol·L^(-1)后继续诱导5 h。将诱导好的CSP1大肠杆菌菌液离心弃上清,再加入细菌裂解液超声破碎,离心后上清用镍柱对CSP1重组蛋白进行亲和层析纯化,再经PBS透析液透析后,最终获得可溶的具有生物活性的CSP1重组蛋白。设定荧光分光光度计的激发波长为281 nm,测定竞争性荧光探针1-NPN与CSP1的相互作用,用Scatchard方程计算其解离常数,再计算获得CSP1与各种候选化学信息素的亲和力。以CSPMbra A6晶体结构(PDB代码:1n8v)为模板,通过同源建模和分子对接解析CSP1蛋白与化学信息素的结合模式,根据Mol Dock Score选出最佳对接模型进行作用机理分析,获得结合时配基周围的CSP1残基分布以及氢键产生情况,以此获得信息素与CSP1的结合模式。最后将CSP1免疫注射兔子获得多克隆抗体,并对中蜂工蜂触角进行低温固定、脱水和包埋后进行超薄切片,然后对样品切片进行免疫胶体金电镜定位,以解析CSP1在触角感器中的亚细胞分布。【结果】成功诱导获得可溶性的重组中蜂CSP1蛋白,利用荧光光谱分析1-NPN与CSP1的解离常数K1-NPN为2.1μmol·L^(-1),结合位点数n为0.99,表明结合时基本以1:1结合,线性相关系数为0.9933。在9种化学信息物质中,CSP1与两种蜜蜂蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)和9-羰基-2癸烯酸(9-ODA),和植物挥发物成分3-蒈烯均具有较强的结合能力,其中与CSP1亲和力最强的对羟基苯甲酸甲酯的[IC50]和解离常数KD分别达到10.1和7.68μmol·L^(-1)。分子� 展开更多
关键词 中华蜜蜂 化学感受蛋白 配基结合功能 分子对接 免疫细胞化学定位
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大白鼠肝癌细胞系FSK7901,FSK 7902及其实体瘤的表皮角蛋白免疫细胞化学定位 被引量:1
5
作者 苏勤 龚民族 刘彦仿 《解剖学报》 CAS 1987年第3期307-311,352-353,共7页
我们制备了牛表皮角蛋白(EK)的家兔抗体,并表明这种抗体可被用来作为肝内胆管细胞性肝癌的特异性标志物,以与肝细胞肝癌鉴别。在实体瘤中,FSK 7901、FSK 7902细胞系的组织学结构分别与肝内胆管细胞性肝癌和肝细胞肝癌相同,免疫荧光和PA... 我们制备了牛表皮角蛋白(EK)的家兔抗体,并表明这种抗体可被用来作为肝内胆管细胞性肝癌的特异性标志物,以与肝细胞肝癌鉴别。在实体瘤中,FSK 7901、FSK 7902细胞系的组织学结构分别与肝内胆管细胞性肝癌和肝细胞肝癌相同,免疫荧光和PAP染色都表明,FSK7901细胞EK阳性,而实体瘤中的绝大多数FSK7902细胞EK阴性。因而作者认为,FSK 7901、FSK 7902细胞系分别属于胆管细胞性肝癌和肝细胞肝癌。FSK7902细胞系的实体瘤中,极少数癌细胞呈EK阳性。作者推测,它们可能是含有或正在形成Mallory小体的细胞。 展开更多
关键词 大白鼠肝癌细胞系 实体瘤 表皮角蛋白 免疫细胞化学定位
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c-fos-like蛋白在尖唇散白蚁繁殖蚁和工蚁性腺中的表达
6
作者 苏晓红 魏艳红 +2 位作者 刘晓 崔文豪 朱蓉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期232-237,共6页
为了探讨c-fos原癌基因在白蚁生殖品级和非生殖品级性腺发育中的作用,揭示白蚁不同品级性腺发育的调节机理,本研究运用免疫细胞化学定位方法对尖唇散白蚁Reticulitermes aculabialis繁殖蚁和工蚁精、卵发生过程中的c-fos蛋白表达进行了... 为了探讨c-fos原癌基因在白蚁生殖品级和非生殖品级性腺发育中的作用,揭示白蚁不同品级性腺发育的调节机理,本研究运用免疫细胞化学定位方法对尖唇散白蚁Reticulitermes aculabialis繁殖蚁和工蚁精、卵发生过程中的c-fos蛋白表达进行了研究。结果显示:雌性繁殖蚁在末龄若虫期的卵子发生过程中有c-fos-like表达,c-fos-like免疫阳性物质定位于生长期的卵母细胞核和滤泡细胞核中;而繁殖蚁成虫的卵子发生过程中没有c-fos-like免疫阳性反应。雄性繁殖蚁在末龄若虫期时精子发生过程中没有c-fos-like表达,而发育到成虫期有c-fos-like免疫阳性反应,阳性物质定位于精原细胞的细胞核中。工蚁精、卵发生过程中均没有c-fos-like的表达。结果提示:c-fos在调节繁殖蚁精子和卵子发生方面有重要作用,c-fos可能通过调节精原细胞增殖参与精子的发生;在卵巢中可以直接作用于生长期的卵母细胞和滤泡细胞来调节卵子的发生。在工蚁性腺中c-fos表达缺失可能导致卵母细胞和滤泡细胞无法正常发育,精原细胞停止增殖而使精子发生处于相对抑制状态。工蚁性腺退化不育可能与c-fos没有正常表达有关。 展开更多
关键词 白蚁 尖唇散白蚁 C-FOS蛋白 卵子发生 精子发生 繁殖蚁 工蚁 免疫细胞化学定位
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银杏枝条营养贮藏蛋白质的免疫细胞化学鉴定
7
作者 郭红彦 彭方仁 +1 位作者 吴青霞 白晋华 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期68-72,共5页
依据银杏枝条中32和36ku蛋白质含量的明显季节变化,推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质。采用间接免疫组织细胞化学定位技术,对这2种蛋白质进行细胞化学定位。32和36ku蛋白质具有一定的免疫相关性,它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧... 依据银杏枝条中32和36ku蛋白质含量的明显季节变化,推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质。采用间接免疫组织细胞化学定位技术,对这2种蛋白质进行细胞化学定位。32和36ku蛋白质具有一定的免疫相关性,它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中,存在于这些细胞的小液泡里。研究结果揭示这2种蛋白质的组织分布式样,为这2种蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质提供有力证据。 展开更多
关键词 银杏 营养贮藏蛋白质 免疫细胞化学定位
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小鼠胸腺哺育细胞的表皮角蛋白免疫细胞化学定位
8
作者 缪继武 徐淑芬 +1 位作者 邢剑敏 尹兰珍 《东南大学学报(医学版)》 CAS 1990年第2期77-79,共3页
应用表皮角蛋白(EK)抗体,对小鼠胸腺哺育细胞进行免疫细胞化学定位。用间接免疫荧光和PAP染色技术,观察到小鼠胸腺哺育细胞的胞质内均呈EK阳性反应。结果进一步证明了胸腺哺育细胞具有上皮细胞的特征,而不是巨噬细胞。
关键词 胸腺哺育细胞 角蛋白 免疫细胞化学定位
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催产素和加压素在犬泡状绦虫的免疫组化定位和分布
9
作者 刘波 杨维泰 +2 位作者 杨振国 成军 文兴豪 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期176-178,共3页
应用免疫组化ABC法研究了催产素和加压素在犬泡状绦虫的定位和分布。在犬泡状绦虫中枢神经系统的脑神经节、2条主要纵神经索和环神经内观察到大量阳性纤维和少量阳性细胞。周围神经系统可见阳性神经纤维在皮层和实质形成神经网。从... 应用免疫组化ABC法研究了催产素和加压素在犬泡状绦虫的定位和分布。在犬泡状绦虫中枢神经系统的脑神经节、2条主要纵神经索和环神经内观察到大量阳性纤维和少量阳性细胞。周围神经系统可见阳性神经纤维在皮层和实质形成神经网。从纵神经索和环神经发出的阳性纤维向生殖器官和皮层的肌肉分布。顶突的小钩之间的肌肉存在阳性反应物,小钩周围有较明显的阳性反应环。生殖器官呈现着色深浅不同的阳性反应,以卵囊—梅氏腺复合体最为明显。结果表明,催产素和加压素的免疫反应物具有相同的分布,它们可能参与虫体的神经内分泌调节。 展开更多
关键词 催产素 加压素 免疫组化定位 犬泡状绦虫
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大鼠脑和外周组织脑钠素样免疫反应物质的免疫组织化学定位研究
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作者 彭俊云 汤健 +1 位作者 潘琳 李茜 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期1-4,103,共5页
脑钠素(BNP)是最近由猪脑分离出的26个氨基酸组成的一种新的神经肽。它具有和心钠素(ANF)类似强大的利尿排钠降压与松弛血管平滑肌的作用.我们用高度选择性BNP抗血清,以ABC免疫组织化学技术观察大白鼠某些脑区和外周组织BNP的分布和定位... 脑钠素(BNP)是最近由猪脑分离出的26个氨基酸组成的一种新的神经肽。它具有和心钠素(ANF)类似强大的利尿排钠降压与松弛血管平滑肌的作用.我们用高度选择性BNP抗血清,以ABC免疫组织化学技术观察大白鼠某些脑区和外周组织BNP的分布和定位.下丘脑外侧区、尾壳核、海马、杏仁核、室旁核和视上核含有不同数量脑钠素免疫反应(BNPir)阳性纤维和细胞。在心脏,我们首次看到心房也含有很多BNPir阳性物质,具有和心钠素类似的定位,BNPir颗粒多积聚在心房肌细胞核的两极;在心室肌细胞,偶见微量弥散的细的BNPir颗粒.脑钠素与心钠素同时存在于脑和心脏这一事实,表明目前所认为ANF的利尿排钠降压和松弛平滑肌的生理功能,可能是通过BNP和ANF的双電机制进行调节的.此外,我们还发现垂体前叶和中间叶内有BNPir细胞存在,其意义有待进一步研究证明. 展开更多
关键词 脑钠素 免疫组化 心脏
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