缺氧诱导因子1α相关信号通路与肿瘤关系的研究进展 被引量：14

1

作者 李继强 陈谦学 《医学综述》 2015年第24期4460-4464,共5页

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是细胞缺氧应激状态下活跃的细胞因子,其表达及活性受脯氨酰羟化酶(PHD)/希佩尔林道蛋白(p VHL)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活... 缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是细胞缺氧应激状态下活跃的细胞因子,其表达及活性受脯氨酰羟化酶(PHD)/希佩尔林道蛋白(p VHL)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Bcl-2相关性抗凋亡基因3(BAG3)/热激蛋白70(HSP70)等上游信号通路的调节,并通过特异性识别结合靶基因缺氧反应元件区域,调节其下游靶基因表达,在肿瘤发生过程中起重要作用。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子1Α 缺氧反应元件 信号通路 靶基因

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双重调控选择增殖型腺病毒CNHK500的构建及初步研究 被引量：11

2

作者 张琪 彭林辉 +6 位作者 吴红平 崔贞福 钱炎珍 姜梨华 苏长青 吴孟超 钱其军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1366-1368,共3页

目的　研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统。方法　先后经 2次定点突变重叠聚合酶链反应 (PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失 ,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游 ,得到腺... 目的　研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统。方法　先后经 2次定点突变重叠聚合酶链反应 (PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失 ,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游 ,得到腺病毒载体质粒pSG5 0 0。通过 pSG5 0 0与质粒 pBHGE3在 2 93细胞中同源重组得到重组病毒CNHK5 0 0。扩增、纯化病毒 ,用TCID5 0方法测病毒滴度。通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。结果　成功构建了由双重调控选择增殖型腺病毒CNHK5 0 0 ,病毒滴度为 1.9× 10 10 pfu/ml ,增殖实验结果证实CNHK5 0 0可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖。结论　CNHK5 0 0为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略。 展开更多

关键词 双重调控 增殖型腺病毒 CNHK500 聚合酶链反应 肿瘤 生物治疗

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低氧预适应对小鼠海马组织HIF-1与EPO低氧应答元件结合活性的影响 被引量：2

3

作者 邵国 周卫华 +2 位作者 高翠英 张然 吕国蔚 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页

目的:观察低氧预适应对小鼠海马组织HIF-1与EPO的低氧应答元件(HRE)结合活性的变化,探讨这种变化与低氧预适应形成的关系。方法:小鼠低氧0次(H0),1次(H1),4次(H4)后取海马组织,应用凝胶迁移改变试验(EMSA),染色体免疫共沉淀(ChIP)试验... 目的:观察低氧预适应对小鼠海马组织HIF-1与EPO的低氧应答元件(HRE)结合活性的变化,探讨这种变化与低氧预适应形成的关系。方法:小鼠低氧0次(H0),1次(H1),4次(H4)后取海马组织,应用凝胶迁移改变试验(EMSA),染色体免疫共沉淀(ChIP)试验和荧光定量PCR(real-time PCR)技术,检测小鼠海马组织内HIF-1与EPO的低氧应答元件结合能力的变化。结果:EMSA体外结合实验及ChIP体内结合实验发现,H0、H1和H4组结合活力依次增强。结论:HIF-1与EPO的低氧应答元件结合增强可能参与预适应的形成。 展开更多

关键词 低氧预适应 海马 HIF-1 小鼠 低氧应答元件

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低氧诱导因子-1／低氧反应元件通路在心肌保护中的研究进展 被引量：2

4

作者 周雯静 王海英 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2016年第3期243-247,共5页

背景低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）是目前公认的在缺氧状态下发挥重要作用的核转录因子，其活化后可介导低氧反应保护作用，在一定程度上能够减轻心肌的缺血／再灌注损伤（ischemic reperfusion injury，I／RI）... 背景低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）是目前公认的在缺氧状态下发挥重要作用的核转录因子，其活化后可介导低氧反应保护作用，在一定程度上能够减轻心肌的缺血／再灌注损伤（ischemic reperfusion injury，I／RI）.目的探究HIF-1/低氧反应元件（hypoxiaresponse element，HRE）通路是如何被激活并发挥心肌保护的作用。内容从HIF—I的概述、调节以及HIF-1／HRE通路的激活机制及其心肌保护作用方面进行综述，并以HIF-1为靶点探究后处理的心肌保护作用的机制，对其在心肌保护作用中与其他关键性的转录因子之间的内在联系作一简要综述。趋向后处理能否激活HIF-1／HRE通路诱导红细胞生成素（erythropoietin，EPO）、血红素加氧酶1（hemeoxygenasel，HO-1）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等保护性蛋白的表达，以减轻心肌I／RI，尚需进一步探讨。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1 低氧反应元件 心肌 缺血/再灌注损伤

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低氧诱导因子-1的病理生理及相关药物研究进展 被引量：2

5

作者 冯世杰 马秀娟 +5 位作者 宗英 毛煜 张晓冬 弓雪莲 张晓芳 陆国才 《药学实践杂志》 CAS 2014年第3期161-166,共6页

低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factors,HIF-1)是介导哺乳动物和人体细胞低氧适应性反应的主要核转录因子,是专一调节氧稳态的关键物质。HIF-1对胚胎的正常发育,软骨及骨的形成等多种生理过程起保护及促进作用,也与肿瘤、糖尿病及... 低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factors,HIF-1)是介导哺乳动物和人体细胞低氧适应性反应的主要核转录因子,是专一调节氧稳态的关键物质。HIF-1对胚胎的正常发育,软骨及骨的形成等多种生理过程起保护及促进作用,也与肿瘤、糖尿病及其并发症等多种缺血低氧性疾病密切相关。HIF-1在这些疾病中的分子机制已成为目前的研究热点,笔者就HIF-1的结构特征、调控机制、生物学效用及在药物研发等方面进行综述。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1 低氧反应原件 氧稳态平衡 活性调节 抑制剂

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携带mda7／IL24的三调控增殖腺病毒治疗肝癌的体外实验 被引量：2

6

作者 陈东锋 那曼丽 +6 位作者 苏长青 李林芳 吴红平 钱炎珍 姜丽华 吴孟超 钱其军 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期382-385,共4页

目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克... 目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克隆和重组技术,构建SG600-IL24。ELISA检测IL24在肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404和正常成纤维细胞BJ内的表达。半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)法检测SG600-IL24在3种细胞内48和96 h的增殖情况。MTT法和细胞病理效应(cytopathic effect,CPE)染色法检测SG600-IL24在不同MOI值对3种细胞的杀伤作用。结果:IL24在SMMC-7721和BEL-7404细胞内高表达而在BJ细胞内低表达。感染48和96 h后,SG600-IL24在SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞内分别增殖794和7940倍、622和7 810倍、20和200倍。MTT结果显示,杀伤50%和90%的SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞所需SG600-IL24的MOI值分别为0.3和5,3和20,50和150。CPE染色显示,SG600-IL24对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404有明显杀伤作用,而对BJ细胞无明显影响,并且该病毒的杀伤能力比增殖腺病毒ZD55-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24强。结论:SG600-IL24高效感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404后,病毒增殖活跃,IL24的表达量显著升高。SG600-IL24对此2种肝癌细胞有良好的特异性杀伤作用,而对正常细胞没有明显影响,为应用该病毒治疗肝癌的体内研究建立了基础。 展开更多

关键词 肝肿瘤 实验性 白细胞介素24 增殖性腺病毒 缺氧反应元件

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开发缺氧调控载体用于肾性贫血的基因治疗 被引量：2

7

作者 杨洁 杜德伟 +5 位作者 李占亭 贾林涛 赵晶 许彦鸣 杨安钢 孙脊峰 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期22-24,共3页

目的:开发具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于肾性贫血的逆转和治疗。方法:合成源于各种缺氧应答基因的缺氧应答元件(HRE)寡核苷酸序列,与CMV启动子连接组合,测定荧光素酶的相对活性以确定缺氧转录活性。结... 目的:开发具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于肾性贫血的逆转和治疗。方法:合成源于各种缺氧应答基因的缺氧应答元件(HRE)寡核苷酸序列,与CMV启动子连接组合,测定荧光素酶的相对活性以确定缺氧转录活性。结果:在各种缺氧调控载体中,由鼠PGK(mPGK)基因的HRE序列和CMV启动子组合成的缺氧应答启动子显示出14.6倍的高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMVI.E启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论:3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于肾性贫血等一系列疾病实现目的基因的精确调控表达可能非常有用。 展开更多

关键词 转录 调控 缺氧调控元件 荧光素酶 报告基因

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人肝癌细胞中缺氧反应元件对微环境的反应 被引量：1

8

作者 王丰 陈霞芳 +6 位作者 韦芳 吴继红 谢匡成 田毓华 易苗英 李川源 黄倩 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期367-371,共5页

目的:通过观察缺氧反应元件(hypoxia-response element,HRE)调控下,绿色荧光蛋白质(green fluorescent protein,GFP)构建的肝癌细胞Bel-7402/5HRE-EGFP在缺氧条件下,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、血管内皮... 目的:通过观察缺氧反应元件(hypoxia-response element,HRE)调控下,绿色荧光蛋白质(green fluorescent protein,GFP)构建的肝癌细胞Bel-7402/5HRE-EGFP在缺氧条件下,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等表达水平的变化,研究HRE对微环境的反应特性。方法:以5个串连的HRE和巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)的微小启动子为转录调控元件、GFP为报告基因构建表达载体,应用FCM和细胞免疫染色法观察缺氧、一氧化氮、过氧化物和酸性pH等微环境的变化对人肝癌细胞Bel-7402中HRE活性的影响,以及缺氧条件下HIF-1α、VEGF表达水平的变化。观察缺氧探针哌莫硝唑的染色强度和分布与HIF-1α、VEGF和GFP表达强度和分布之间的关系,探求裸鼠体内肿瘤组织缺氧对HRE活性及其相关基因表达的影响。结果:肝癌细胞中HRE对缺氧非常敏感,肿瘤细胞和组织缺氧时可上调HIF-1α和VEGF的表达,两者的分布也基本一致。结论:缺氧在调控肝癌血管生成因子表达方面可能起着重要的作用。 展开更多

关键词 肝肿瘤 实验性 缺氧 缺氧诱导因子1 缺氧反应元件 绿色荧光蛋白质类 细胞 Bel-7402

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低氧诱导因子调控肾透明细胞癌进程的分子机制研究进展

9

作者 陈延萍 吴果 +2 位作者 马孟丹 杨育宾 陈巍 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第10期1641-1645,共5页

肾透明细胞癌(ccRCC)是泌尿系统最常见的肾恶性肿瘤之一,低氧诱导因子(HIF)在大多数肾透明细胞癌中高表达,是肿瘤生长过程中关键的调节因子。HIF通过与低氧反应元件(HER)结合介导其下游多个靶基因的转录,从而调控ccRCC发生、发展及多种... 肾透明细胞癌(ccRCC)是泌尿系统最常见的肾恶性肿瘤之一,低氧诱导因子(HIF)在大多数肾透明细胞癌中高表达,是肿瘤生长过程中关键的调节因子。HIF通过与低氧反应元件(HER)结合介导其下游多个靶基因的转录,从而调控ccRCC发生、发展及多种生物学行为。本文主要围绕HIF基因对ccRCC的调控作用及机制进行综述,以期进一步明确其对基础医学的科学价值及对临床研究的指导作用。 展开更多

关键词 肾透明细胞癌 低氧诱导因子 低氧反应元件 调控机制

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低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用 被引量：1

10

作者 姜桢 曹永梅 +4 位作者 曾真 顾玉春 季莹莹 赵宇鹏 李颖川 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期674-681,共8页

目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)... 目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。 展开更多

关键词 BCL-2 低氧反应元件 抗凋亡肺血管内皮细胞 基因调控

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缺氧调控载体功能活性的研究 被引量：1

11

作者 杨洁 张翔 +5 位作者 陈锐 杜德伟 李占亭 赵晶 杨安钢 孙脊峰 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期400-403,共4页

目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞... 目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞生成素（hEPO）的转录。检测荧光素酶的活性和hEPO的表达以确定其缺氧转录活性。结果在各种缺氧调控载体中,由鼠磷酸甘油酸激酶（mPGK）的HRE与CMV启动子组合而成的缺氧应答启动子显示出高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMV启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于实现治疗基因的精确调控表达可能非常有用。 展开更多

关键词 转录 调控 缺氧应答元件 荧光素酶 报告基因

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缺氧反应元件嵌合特异性启动子调控的溶瘤腺病毒对肾癌细胞的杀伤作用

12

作者 秦静 张晨 +2 位作者 田伟平 陈静 方琳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期90-92,共3页

目的观察低氧条件下缺氧反应元件(HRE)与肿瘤特异性细胞增殖相关核抗原Ki-67(MKI67)启动子构成的嵌合型启动子调控的溶瘤腺病毒在肾癌细胞中的增殖能力和杀伤作用。方法将HRE序列作为增强子嵌合至肿瘤特异性强的Ki-67启动子上游,同时携... 目的观察低氧条件下缺氧反应元件(HRE)与肿瘤特异性细胞增殖相关核抗原Ki-67(MKI67)启动子构成的嵌合型启动子调控的溶瘤腺病毒在肾癌细胞中的增殖能力和杀伤作用。方法将HRE序列作为增强子嵌合至肿瘤特异性强的Ki-67启动子上游,同时携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP),构建溶瘤腺病毒Ad-HRE-Ki-67-EGFP,组织半数感染剂量法(TCID50)测定滴度;两种病毒分别在常氧(21%O2)和低氧(1%O2)条件下感染正常肾上皮细胞人肾小管上皮细胞(HK-2)和肾癌细胞人肾细胞腺癌细胞(OSRC-2)、人肾腺癌细胞(ACHN),24 h后荧光显微镜及流式细胞仪检测病毒的靶向性;蛋白质印迹法(Western blot)检测低氧条件下细胞中低氧相关蛋白缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测病毒对细胞的杀伤能力。应用SPSS 19.0统计软件分析,组间均数比较采用t检验。结果成功构建重组溶瘤腺病毒Ad-HRE-Ki-67-EGFP;Ad-HRE-Ki-67-EGFP感染肾癌细胞ACHN和OSRC-2,常氧条件下Ad-HRE-Ki-67-EGFP的感染效率分别为(47.5±2.6)%和(35.2±3.4)%,低氧条件下分别为(86.4±3.4)%和(73.5?±2.3)%,即低氧条件下感染效率更高(ACHN:t=15.760;OSRC-2:t=16.190;P<0.01);正常肾小管上皮细胞HK-2在常氧条件下Ad-Ki-67-EGFP、Ad-HRE-Ki-67-EGFP两种病毒的感染效率为(22.4±3.1)%和(22.9±2.2)%,与肾癌细胞ACHN、OSRC-2比较(ACHN:(68.4±3.3)%和(72.1±2.9)%;OSRC-2:(56.1±3.1)%和(61.4±2.3)%),差异有统计学意义(Ad-Ki-67-EGFP:t=17.650、13.390;Ad-HRE-Ki-67-EGFP:t=23.680、21.430,P<0.01),说明2种腺病毒对肾癌细胞具有靶向性;Western blot结果显示低氧条件下缺氧诱导因子HIF-1α、血管内皮生长因子VEGF、p53蛋白的表达增多且表现为时间依赖性,说明低氧可以调节HIF-1α、VEGF、p53蛋白的转录及翻译水平;在低氧条件下,感染Ad-HRE-Ki-67-EGFP的两种肿瘤细胞的早期区域1A(E1A)蛋白表达水平明显高于Ad-Ki-67 展开更多

关键词 肾细胞癌 溶瘤腺病毒 缺氧反应元件 低氧

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高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

13

作者 张翔 杨洁 +6 位作者 丁蓉 陈锐 杜德伟 李占亭 赵晶 杨安钢 孙脊峰 《生物技术通讯》 CAS 2008年第2期191-193,共3页

目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载... 目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。 展开更多

关键词 缺氧应答元件 最小CMV启动子 报告基因 缺氧诱导表达

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低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡

14

作者 张军峰 史利利 +5 位作者 张力 赵朝华 杨蓬勃 张建水 刘勇 徐曦 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期581-586,共6页

目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表... 目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。 展开更多

关键词 低氧反应元件 神经营养因子-3 低氧 免疫印迹法

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双重调控增殖型腺病毒AdTPHre-hEndo的构建及鉴定

15

作者 方益锋 单云峰 +1 位作者 高申孟 张启瑜 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期488-491,共4页

目的构建新型双重调控肿瘤特异性增殖型腺病毒载体治疗系统。方法通过基因重组技术构建受端粒酶逆转录酶启动子控制腺病毒E1A表达、缺氧反应元件启动子控制EIB表达并携带人内皮抑素基因的质粒pTPHre-hEndo。将质粒pTPHre-hEndo与含有腺... 目的构建新型双重调控肿瘤特异性增殖型腺病毒载体治疗系统。方法通过基因重组技术构建受端粒酶逆转录酶启动子控制腺病毒E1A表达、缺氧反应元件启动子控制EIB表达并携带人内皮抑素基因的质粒pTPHre-hEndo。将质粒pTPHre-hEndo与含有腺病毒右臂的质粒pB-GHE3共转染至293细胞中同源重组得到带抗肿瘤基因的双重调控增殖型腺病毒AdTPHre-hEndo。用TCID50方法测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用ELISA法检测人内皮抑素抗癌基因的表达。结果成功构建了由双重调控的选择增殖型腺病毒AdTPHre-hEndo，病毒滴度为3．25×10＾10pfu／ml。增殖实验结果证实AdTPHre-hEndo可以选择性地在端粒酶阳性的胰腺癌细胞中增殖。随着感染时间的延长，肿瘤细胞培养上清液中内皮抑素表达量不断增加，第7天达（310．25士1．41）ng／ml，明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体（112．53±4．41）ng／ml。结论AdTPHre-hEndo具有高效表达人内皮抑素和在胰腺癌细胞内增殖的能力，为胰腺癌的生物治疗提供了一种新型的基因-病毒治疗系统。 展开更多

关键词 腺病毒 端粒酶逆转录酶 缺氧反应元件 内皮抑素

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慢性间歇低氧对幼鼠认知及相关脑区CREB的影响 被引量：7

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作者 蔡晓红 张存雪 +6 位作者 周永海 倪丽艳 龚永生 张焕改 李美丽 宣妙燕 俞晨艺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期895-900,共6页

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观... 目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观察海马和前额叶皮层超微结构变化及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA和磷酸化CREB蛋白的表达。结果:4组幼鼠的记忆错误次数比较均有显著差别(均P<0.05);IH各组海马及前额叶皮层神经元均出现早期凋亡和变性,尤以4IH组最为明显,对照组则基本正常;与相应对照组相比,2IH、4IH组幼鼠海马和前额叶皮层CREB mRNA和p-CREB蛋白的表达水平显著降低(均P<0.05),且以4IH组最低(均P<0.01),差异显著,两对照组之间无显著差异(P>0.05)。结论:慢性间歇低氧诱导海马和前额叶皮层神经元超微结构改变,还下调CREB的基因转录和抑制CREB蛋白磷酸化,抑制记忆相关蛋白的合成,这可能是引起学习记忆能力下降的重要机制之一。 展开更多

关键词 慢性间歇低氧 认知 CAMP反应元件结合蛋白质 神经元

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7-羟乙基白杨素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制研究 被引量：3

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作者 蔡楠 刘天珍 +3 位作者 苗路伟 景临林 陈克明 马慧萍 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1417-1421,共5页

目的探究7-羟乙基白杨素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其信号转导机制。方法将心肌细胞株H_(9)C_(2)传代后随机分为正常对照组(常氧条件培养24 h)、模型组(1%O_(2)浓度缺氧培养24 h)、白杨素组(1%O_(2)浓度缺氧培养24 h,1.0×10^(... 目的探究7-羟乙基白杨素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其信号转导机制。方法将心肌细胞株H_(9)C_(2)传代后随机分为正常对照组(常氧条件培养24 h)、模型组(1%O_(2)浓度缺氧培养24 h)、白杨素组(1%O_(2)浓度缺氧培养24 h,1.0×10^(-6)mol·L^(-1)白杨素处理)、7-羟乙基白杨素组(1%O_(2)浓度缺氧培养24 h,1.0×10^(-6)mol·L^(-1)7-羟乙基白杨素处理)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;用WST-1法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量;用钼酸铵法测定过氧化氢酶(CAT)含量;用蛋白质印迹法检测血红素加氧酶1(HO-1)、过氧化氢酶(CAT)蛋白表达水平。结果正常对照组、模型组、白杨素组和7-羟乙基白杨素组的细胞存活率分别为(100.00±4.48)%、(61.95±2.14)%、(86.01±3.60)%和(93.16±2.91)%;SOD活力分别为111.43±3.06、196.12±12.09、162.48±7.64和141.55±2.82;CAT活力分别为3.40±0.32、9.91±0.39、5.51±0.20和4.41±0.43;HO-1蛋白表达水平分别为0.58±0.01、1.22±0.02、0.68±0.01和0.34±0.01;SOD蛋白表达水平分别为0.38±0.01、1.07±0.01、0.92±0.01和0.49±0.01;CAT蛋白表达水平分别为0.73±0.02、1.10±0.02、0.94±0.02和0.67±0.01。模型组的上述指标与正常对照组比较,7-羟乙基白杨素组、白杨素组上述指标与模型组比较,7-羟乙基白杨素组上述指标与白杨素组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论7-羟乙基白杨素通过延缓核因子-E2相关因子/抗氧化应答元件信号途径的激活而提高了心肌细胞的抗氧化损伤能力。 展开更多

关键词 7-羟乙基白杨素 缺氧损伤 核因子NF-E2相关因子/抗氧化反应元件信号通路 氧化应激 抗氧化酶

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LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

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作者 谢小芳 赵展庆 符妹垂 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第9期1585-1590,共6页

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧... 目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 缺氧/复氧 FGD5反义RNA 1 微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1轴 心肌细胞凋亡

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慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白表达的影响 被引量：4

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作者 康晶 王月华 +2 位作者 何静雅 李清泉 胡克 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期5-7,55,共4页

目的:探讨慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的影响。方法:通过常压低氧仓建立间歇低氧大鼠模型,即对成年大鼠每90s交替给予10%氧和21%氧,每天8h,连续处理14d后,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习记... 目的:探讨慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的影响。方法:通过常压低氧仓建立间歇低氧大鼠模型,即对成年大鼠每90s交替给予10%氧和21%氧,每天8h,连续处理14d后,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习记忆的变化,并采用RT-PCR法观察大鼠皮层区及海马区环磷酸腺苷反应单元结合蛋白mRNA的表达。结果:与常压对照组比较,常压间歇低氧组大鼠在Morris水迷宫中的空间学习记忆能力明显下降,表现为平均逃避潜伏期延长和游泳总距离增加。同时,大鼠皮层区及海马区CREBmR-NA的表达水平明显降低。结论:慢性间歇低氧可引起大鼠空间学习记忆能力下降,而大鼠这种慢性脑功能损害可能与大脑CREBmRNA的表达下调有关。 展开更多

关键词 慢性间歇低氧 认知功能 环磷酸腺苷反应单元结合蛋白

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缺氧诱导的肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定 被引量：3

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作者 贺赛 郑见宝 +7 位作者 孙学军 陈南征 周培华 贾蓬勃 魏光兵 王晖 姚建锋 禄韶英 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期465-469,共5页

目的检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性。方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500μmol/L)CoCl2对LoVo细胞活力以及增殖的影响。收集... 目的检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性。方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500μmol/L)CoCl2对LoVo细胞活力以及增殖的影响。收集前期已包装成功的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和人端粒酶催化亚单位启动子hTERTp联合调控CDX2表达的慢病毒表达载体pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5HhC)病毒液,感染hTERT+LoVo细胞及hTERT-HK-2细胞,细胞免疫组化法验证该治疗载体的靶向性;复苏前期筛选的稳定表达5HhC的LoVo细胞(5HhC/LoVo),用缺氧模拟剂CoCl2模拟缺氧微环境,Western blot和RT-PCR分别检测缺氧调控下CDX2的表达水平。结果结肠癌细胞株LoVo在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力及增殖均受到抑制,在高浓度(300、400、500μmol/L)作用下抑制效果更加明显;5HhC病毒成功感染hTERT+LoVo细胞,而在hTERT-HK-2细胞中不表达;Western blot和RT-PCR证实缺氧可上调5HhC/LoVo细胞中CDX2蛋白和mRNA的表达,且在300μmol/L CoCl2作用24h其蛋白表达量最高。结论缺氧微环境可明显上调hTERTp靶向性的治疗载体5HhC中抑癌基因CDX2的表达。 展开更多

关键词 缺氧 hTERT靶向性 抑癌基因CDX2 基因治疗载体 缺氧反应元件(HRE)

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