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题名Cdk5/p35抑制剂高通量筛选方法的建立及应用
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作者
杨然耀
方坚松
周丹
刘艾林
杜冠华
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机构
中国医学科学院北京协和医学院药物研究所
"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室
"天然药物活性物质与功能"国家重点实验室
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出处
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期781-786,共6页
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基金
国家"重大新药创制"科技重大专项(2014ZX09507003-002)
国际合作项目(2011DFR31240)
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文摘
目的:建立适于高通量筛选的Cdk5/p35抑制剂筛选模型。方法:Cdk5/p35与其底物Histone H1反应时需消耗ATP,通过测定体系中ATP的剩余量,考察ATP浓度、酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间及体系pH等因素对酶促反应的影响,进而确定酶与底物反应的最佳条件,并采用Z'因子评价该模型的可靠性和可行性。应用已建立的Cdk5/p35抑制剂高通量筛选模型筛选和发现活性化合物。结果:反应体系的最佳反应条件为:ATP终浓度3μmol·L-1,Cdk5/p35终浓度30 nmol·L-1,Histone H1终浓度70μmol·L-1,孵育温度37℃,孵育时间60 min,体系pH 7,Z'-因子为0.66。应用该模型对222个虚拟筛选挑选出的化合物进行筛选,发现了13个对Cdk5/p35抑制活性较好的化合物。结论:实验结果表明,该模型具有稳定、灵敏、高效等特点,可用于Cdk5/p35抑制剂的高通量筛选。该模型的建立,为Cdk5/p35抑制剂的发现以及Cdk5/p35调控AD的机制研究奠定基础。
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关键词
阿尔茨海默病
CDK5
p35抑制剂
tau蛋白磷酸化
高通量筛选
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Keywords
Alzheimer＇s disease
Cdk5/p35 inhibitors
hyper-phosphorylation of tau protein
high-through-put screening
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分类号
R965.1
[医药卫生—药理学]
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