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题名亲水突变法提高抗VEGFR2单链抗体的体外亲和力
被引量：1
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作者
齐海迪
缪小牛
张娟
谷凯
张斯维
王旻
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机构
中国药科大学
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出处
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1323-1328,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(81072561)
江苏省普通高校研究生科研创新计划(CX10B-376Z)
江苏省省级大学生实践创新训练计划项目
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文摘
为了提高抗VEGFR2单链抗体AK404R的亲和力,本研究采用亲水突变法将AK404R的重链CDR3区进行突变,建立次级突变单链抗体库。利用噬菌体展示技术从次级突变库中筛选具有抗VEGFR2特异性、高亲和力抗体,获得的抗体突变株经大肠杆菌HB2151分泌表达,镍亲和色谱柱纯化,并采用竞争性ELISA法、生物信息学方法分别对其亲和力和结构进行了分析。本研究最终建立了6.4×105的次级突变单链抗体库,其中两株突变株的亲和力有明显提高,两株突变株经分离纯化得到电泳纯的蛋白,竞争性ELISA结果显示突变体WZ01和WZ02的亲和力比亲本提高了3倍;生物信息学方法分析突变体与抗原的作用面增大、契合紧密,这可能是亲和力提高的原因之一。研究结果表明,在重链CDR3区引入亲水性氨基酸构建抗体突变库,可有效提高scFv的亲和力。
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关键词
VEGFR2
亲水突变
亲和力成熟
噬菌体展示
单链抗体
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Keywords
VEGFR2
hydrophilic shuffling
affinity maturation
phage display
scFv
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分类号
R963
[医药卫生—微生物与生化药学]
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