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甲基对硫磷单克隆抗体的研制及鉴定 被引量:7
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作者 王刚垛 鱼涛 +2 位作者 马兆扬 李秋生 何凤生 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期265-267,共3页
目的 研制甲基对硫磷 (M160 5 )单克隆抗体 (McAb)。方法 人工抗原M160 5 TTH免疫BALB/C小鼠 ,用被免疫的脾脏淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0在融合剂PEG40 0 0 作用下融合。经过HAT培养液选择性培养、间接ELISA法筛选和有限稀释克隆... 目的 研制甲基对硫磷 (M160 5 )单克隆抗体 (McAb)。方法 人工抗原M160 5 TTH免疫BALB/C小鼠 ,用被免疫的脾脏淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0在融合剂PEG40 0 0 作用下融合。经过HAT培养液选择性培养、间接ELISA法筛选和有限稀释克隆后 ,鉴定该杂交瘤细胞株和McAb。结果 获得 2株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株G12、H0 2 ,其培养液和腹水滴度为 1∶10 3和 1∶10 5。进一步研究G12发现 ,该杂交瘤细胞株的染色体数为 99~ 10 8,其McAb分类为IgM ,该McAb的亲和力常数为 1.67× 10 5L/mol,且具有较好的特异性。结论 获得抗M160 5的特异性McAb ,为建立M160 5简便、快速、特异的生物检测方法提供了必要条件。 展开更多
关键词 甲基对硫磷 人工抗原 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 研制 鉴定
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生物反应器中杂交瘤细胞的物理破损 被引量:8
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作者 谭文松 戴干策 +1 位作者 陈志宏 陈因良 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第3期276-282,共7页
结合高速搅拌转瓶试验和鼓泡柱试验,考察了生物反应器中流体主体湍流剪切和气泡对杂交瘤细胞的破损作用。实验发现在没有气泡的情况下,只有当Kolmogorov湍流涡旋尺度与细胞大小相当或小于细胞时,生物反应器中流体主体湍流... 结合高速搅拌转瓶试验和鼓泡柱试验,考察了生物反应器中流体主体湍流剪切和气泡对杂交瘤细胞的破损作用。实验发现在没有气泡的情况下,只有当Kolmogorov湍流涡旋尺度与细胞大小相当或小于细胞时,生物反应器中流体主体湍流剪切才能导致细胞破损。而在有气泡存在时,造成细胞破损的主要原因是气泡,增加气体流量和减少气泡直径都将加速细胞死亡。此外,还对气泡破损细胞的作用及其机理作了讨论。 展开更多
关键词 生物反应器 杂交瘤细胞 物理损伤 损伤 细胞培养
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新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析 被引量:7
3
作者 温贵兰 李永明 +1 位作者 陈锡龙 吴彤 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期22-26,共5页
以蔗糖反透析浓缩及SephadexG 200层析纯化F48E8和LaSota新城疫病毒(NDV),取纯化的病毒液免疫接种BALB c小鼠,将小鼠脾细胞与NS 1骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT)培养基选择,间接ELI... 以蔗糖反透析浓缩及SephadexG 200层析纯化F48E8和LaSota新城疫病毒(NDV),取纯化的病毒液免疫接种BALB c小鼠,将小鼠脾细胞与NS 1骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT)培养基选择,间接ELISA检测,有限稀释法克隆,筛选出了3株杂交瘤细胞,依次命名为1D4、1D5、16G12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80~100,并能稳定传代,其产生的单克隆抗体重链属于IgG1,轻链属于κ链;ELISA检测时仅与NDV发生特异性反应,而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应,应用这些单克隆抗体对NDV分离株进行了分群研究。 展开更多
关键词 新城疫病毒 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立 被引量:9
4
作者 尹家祥 陈平 +2 位作者 杜春红 董兴齐 于国林 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期566-568,共3页
目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处... 目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞混合,50%的PEG作为细胞融合剂,HAT培养液选择培养融合后的细胞,间接ELISA法检测细胞培养上清中的F1抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆及再克隆。结果获得共计100余株分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株进行了4次克隆化,经8个月保存后抗体分泌稳定。结论应用杂交瘤技术,在云南首次成功制备了3株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了杂交瘤技术的实验程序。 展开更多
关键词 耶尔森菌 鼠疫 F1抗原 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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气升式生物反应器在杂交瘤细胞培养中的应用 被引量:8
5
作者 谭文松 陆健 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期477-481,共5页
在前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞,通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而... 在前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞,通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而且细胞破损被彻底消除,表明该气升式生物反应器给细胞生长、代谢和产物生成提供了理想的培养环境,其设计是成功的。 展开更多
关键词 生物反应器 杂交瘤细胞 细胞培养 生物制品
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谷氨酰胺在杂交瘤细胞培养中的降解与代谢 被引量:5
6
作者 辛艳 杨艳 +2 位作者 李强 孔健 曹竹安 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期478-480,共3页
The chemical decomposition of glutamine is a first-order reaction. Its reaction constants under storage and culture conditions were determined as 0 0009 h\+\{-1\} and 0 0032 h\+\{-1\} respectively. Batch culture of hy... The chemical decomposition of glutamine is a first-order reaction. Its reaction constants under storage and culture conditions were determined as 0 0009 h\+\{-1\} and 0 0032 h\+\{-1\} respectively. Batch culture of hybridoma cell C50 with different initial contents of glutamine helped to understand its real metabolic characteristic. The results show that when the initial concentration of glutamine is lower than 5 mmol/L, more than 80% is used by cells. And the lower the initial content, the more being used. As the initial glutamine concentration increases, the ratio of its utilization decreases. When it reaches 10 mmol/L, the ratio decreases dramatically. 展开更多
关键词 谷氨酰胺 化学降解 杂交瘤细胞 培养条件 降解 代谢
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抗犬细小病毒的单克隆抗体的制备 被引量:6
7
作者 王彦红 杨跃飞 +3 位作者 殷俊 杨玲 徐向明 李厚达 《江苏农业研究》 CSCD 2001年第3期65-67,共3页
CPV YZ株的细胞培养液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为免疫原免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术筛选出 8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,分别命名为F5G10、3F11F4、F11G6、6C5C2、6E4G3、6C2B11、F11D6、3D9C4株 ,各株单抗均为IgG型 ... CPV YZ株的细胞培养液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为免疫原免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术筛选出 8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,分别命名为F5G10、3F11F4、F11G6、6C5C2、6E4G3、6C2B11、F11D6、3D9C4株 ,各株单抗均为IgG型 ;中和试验表明 :F11G6、3D9C4、6E4G3、6C5B114株单抗有中和作用 ,Dot ELISA试验证明了 8株单抗仅针对病毒抗原决定簇的空间结构。 展开更多
关键词 犬细小病毒 杂交瘤细胞 单克隆抗体 犬病
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用 被引量:8
8
作者 赵洪哲 范峻豪 +3 位作者 李新培 王昊 关平原 温永俊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期287-293,共7页
为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间... 为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度。经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化。结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11。稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好。ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好。经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800。直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0~4.0之间,符合标准。上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(MAb) 直标荧光抗体
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阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立 被引量:8
9
作者 汪琳 李勐伟 +8 位作者 刑佑尚 柏亚铎 尹羿 蒲静 乔彩霞 高志强 魏学良 李朝明 李琴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期52-55,共4页
试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大... 试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D450nm值及P/N值选择1∶20000稀释的5C10作为包被抗体,1∶40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 ELISA检测
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平均分布细胞进行鼠疫杂交瘤株克隆化的实验研究 被引量:3
10
作者 杜春红 陈平 +3 位作者 尹家祥 钟佑宏 于国林 王鹏 《地方病通报》 2007年第2期1-3,共3页
目的探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法。方法对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体。... 目的探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法。方法对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体。结果用该方法进行克隆化,在96孔板中单克隆生长孔平均为26孔、多克隆为15孔,在1~2次克隆后,上清抗体检测均达到100%,与有限稀释法无差异。结论采用计数100个细胞进行克隆化的方法是可行的。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体 鼠疫 克隆化
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在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响I.乳酸的作用 被引量:4
11
作者 张立 金亦辉 张元兴 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期157-160,共4页
研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。当乳酸浓度低于 5 .3mmol/L时 ,乳酸对细胞生长和代谢无明显影响 ;当乳酸浓度在 1 0 mmol/L~ 2 5 mmol/L时 ,对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制 ;当乳酸浓度高于 34mmol/L时 。
关键词 杂交瘤细胞 细胞培养 乳酸 无血清培养
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谷氨酰胺对JAL1杂交瘤细胞生长代谢的影响 被引量:6
12
作者 陆苹 赵冰 李晖 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期388-391,共4页
为研究不同浓度的谷氨的酰胺对JAL1 杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中 ,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养细胞 ,培养条件为pH 7 0~ 7 5 ,温度 37℃ ,5 %CO2 。实验表明 ,适宜于该株杂交瘤... 为研究不同浓度的谷氨的酰胺对JAL1 杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中 ,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养细胞 ,培养条件为pH 7 0~ 7 5 ,温度 37℃ ,5 %CO2 。实验表明 ,适宜于该株杂交瘤细胞生长的谷氨酰胺浓度为 2mmol/L ,谷氨酰胺浓度与细胞的葡萄糖消耗呈反比 ,与乳酸生成浓度呈反比 。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 JAL1杂交瘤 细胞生长 代谢
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制备分泌单克隆抗体杂交瘤细胞小鼠腹水的方法 被引量:5
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作者 孙广瑞 李小兵 王哲 《中国现代医生》 2007年第06Z期3-4,共2页
探讨利用从小鼠腹水中分离获得的分泌单克隆抗体杂交瘤细胞,大量制备含有小鼠单克隆抗体腹水的方法。收集已接种单克隆抗体杂交瘤细胞的小鼠腹水,用淋巴细胞分离液离心分离腹水中的杂交瘤细胞,再将此分离出的杂交瘤细胞,注入其他经预处... 探讨利用从小鼠腹水中分离获得的分泌单克隆抗体杂交瘤细胞,大量制备含有小鼠单克隆抗体腹水的方法。收集已接种单克隆抗体杂交瘤细胞的小鼠腹水,用淋巴细胞分离液离心分离腹水中的杂交瘤细胞,再将此分离出的杂交瘤细胞,注入其他经预处理的小鼠腹腔以制得腹水。每只小鼠分离得到的杂交瘤细胞可供5只小鼠腹腔注射,平均每只小鼠产腹水3.97mL。此法可规模性制备大量高效价的含有单克隆抗体腹水。 展开更多
关键词 抗体 单克隆抗体 腹水 小鼠
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抗IBDV独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及其产物生物学特性测定 被引量:3
14
作者 朱瑞良 崔治中 赵静 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期462-466,共5页
用纯化的抗IBDVIgG免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0细胞在聚乙二醇 (PEG)作用下融合 ,ELISA法检测筛选 ,经有限稀释法克隆 3次 ,获得 2株 (5F4株 ,2B6 株 )分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株 ,其能诱生Balb c小鼠产生ELISA抗体效... 用纯化的抗IBDVIgG免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 0细胞在聚乙二醇 (PEG)作用下融合 ,ELISA法检测筛选 ,经有限稀释法克隆 3次 ,获得 2株 (5F4株 ,2B6 株 )分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株 ,其能诱生Balb c小鼠产生ELISA抗体效价分别为 1∶12 80 0和 1∶2 5 60 0的含抗IBDV独特型抗体的腹水。用此独特型抗体与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗 ,免疫接种SPF鸡和普通京白公鸡 ,然后用IBDV强毒株 (SD株 ) 2 0 0 0ELD50 攻毒 ,SPF鸡免疫组 5 0只 ,有 5只发病、2只死亡 ;对照组 10只全部发病 ,8只死亡。普通京白鸡免疫组 3 0只 ,有 7只发病 ,1只死亡 ;对照组 10只全部发病 ,6只死亡。经X2 检验 ,SPF鸡X2 =3 4 15 ,普通鸡X2 =16 68,查X2 值表得X2(1 ) 0 0 1 =6 63 ,SPF鸡X2 和普通鸡X2 均大于X2(1 ) 0 0 1 (P <0 0 1) ,由此表明抗IBDV独特型抗体疫苗具有很好的免疫原性 ,对易感日龄的SPF鸡和普通鸡均具有极其明显的保护作用。 展开更多
关键词 IBDV 杂交瘤细胞株 产物 生物学特性 抗独特型抗体 鸡传染性法氏囊病
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小分子单克隆抗体的制备与敲除技术研究进展 被引量:7
15
作者 刘菁 毛新民 +3 位作者 李琳琳 李新霞 王烨 兰怡 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第19期3737-3741,共5页
随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善。小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题。中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持。该文就小分子单克隆抗体... 随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善。小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题。中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持。该文就小分子单克隆抗体制备与敲除技术进行了综述。就其制备过程中的几个步骤,如:半抗原的制备,半抗原与载体偶联,人工抗原的鉴定及偶联比率的测定,动物免疫与单克隆杂交瘤细胞株的建立,单克隆抗体的大规模制备;小分子单克隆抗体的敲除技术的免疫亲和色谱柱的方法进行了详尽的阐述。笔者相信这门技术会使得中药的研究上更高一个层次,并且提高中药研究的国际化水平。 展开更多
关键词 半抗原 人工抗原 偶联比率 单克隆抗体 动物免疫 杂交瘤细胞 免疫亲和色谱柱
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杂交瘤细胞染色体制备及生物学意义初探 被引量:5
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作者 秦璐璐 耿建萍 《医学理论与实践》 2008年第4期375-376,共2页
目的:改进杂交瘤细胞培养及染色体制备方法。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0常规融合,用不同的培养基制备杂交瘤细胞,并在制备杂交瘤染色体时改变秋水仙素作用的时间。结果:12孔板中加入DMEM培养液的杂交瘤细胞株生长良好,其中6孔... 目的:改进杂交瘤细胞培养及染色体制备方法。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0常规融合,用不同的培养基制备杂交瘤细胞,并在制备杂交瘤染色体时改变秋水仙素作用的时间。结果:12孔板中加入DMEM培养液的杂交瘤细胞株生长良好,其中6孔板加秋水仙素培养1h,染色体形态最佳,数目稳定。结论:DMEM培养液更适合此种杂交瘤细胞的培养。制作染色体时缩短秋水仙素培养时间,使得杂交瘤细胞染色体形态更接近于两种亲本细胞。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 染色体 小鼠脾细胞 髓瘤细胞 制备方法
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A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA的建立及验证
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作者 刘英 朱衍志 +6 位作者 陆俭 周易 马亚峰 张政 朱俐 张荣 张若晖 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第1期40-47,共8页
目的 建立A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA快速定量检测方法,并进行验证及初步应用。方法 通过杂交瘤细胞培养技术制备鼠抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,用ELISA及其他免疫学方法测定抗体效价、亚型及理化性质。优化出最佳试验方案,建立... 目的 建立A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA快速定量检测方法,并进行验证及初步应用。方法 通过杂交瘤细胞培养技术制备鼠抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,用ELISA及其他免疫学方法测定抗体效价、亚型及理化性质。优化出最佳试验方案,建立定量检测A型肉毒神经毒素的双抗体夹心ELISA,并对该方法的线性及范围、定量限、准确性、精密度(重复性、中间精密度)、专属性和耐用性进行验证。对本公司相关产品进行测试。结果 制备的A型肉毒神经毒素单克隆抗体纯度为88.15%,效价为1∶102 400,重链亚型为IgG1类,轻链为Kappa类;可与A型肉毒神经毒素的重链特异性结合。建立的A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA在5.000~80.000 ng/mL范围内线性良好(r>0.99);定量限为2.500 ng/mL;准确度介于80%~115%;CV<15%;该方法与破伤风毒素、B、C、D、E和F型肉毒甘油毒素均无交叉;且A型肉毒神经毒素产品复溶后在2~8℃储存3 d,检测结果不受影响。应用该方法检测本公司开发的新型A型肉毒神经毒素产品,结果符合预期。结论 制备了鼠抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,建立了特异性好且灵敏度较高的A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA,为A型肉毒神经毒素产品质量控制提供参考价值。 展开更多
关键词 A型肉毒神经毒素 单克隆抗体 杂交瘤细胞 双抗体夹心ELISA
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抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量:5
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作者 杨敬 丁天兵 +2 位作者 任君萍 宋建华 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期325-327,共3页
目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株... 目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 μ链 杂交瘤 ELISA
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小鼠仙台病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 李泽睿 王霄 +4 位作者 孙莉 费东亮 马跃宇 马鸣潇 李明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期66-70,共5页
为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL2... 为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对纯化的重组蛋白rHN进行SDS-PAGE分析。用重组蛋白rHN免疫Balb/c小鼠6次,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过亚克隆技术和间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,然后注入小鼠腹腔制备抗HN蛋白单克隆抗体,分析单克隆抗体的免疫活性、特异性和稳定性。结果表明:获得3株分泌抗SeV HN蛋白抗体的杂交瘤细胞2F9、5D8、10H2,分泌的抗体效价均为1∶16 000左右。3株单克隆抗体的亚型均为IgG1,均可特异性识别SeV,并不与其他小鼠病毒产生交叉反应,具有良好的特异性。经过10次传代,3株单克隆抗体的效价均在1∶8 000以上,稳定性较好。说明试验成功制备了具备良好免疫活性、特异性和稳定性的抗SeV HN蛋白单克隆抗体,可以为SeV的检测提供有效试剂。 展开更多
关键词 小鼠 仙台病毒 HN蛋白 单克隆抗体 原核表达 杂交瘤细胞
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β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:5
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作者 胥亚 许国莹 +4 位作者 周红 解鸿翔 夏龙飞 刘敬敬 张晓蕾 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期649-652,共4页
目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水... 目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99~108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 β2GPⅠ 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 抗磷脂综合征
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