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人脐带非酶解法培养MSCs的方法建立 被引量：1
1
作者 李素萍 王震 +5 位作者 王超 王永珍 周学勇 吴学忠 杨宏友 吕蓉 《中国输血杂志》 北大核心 2017年第8期885-889,共5页
目的建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法。方法将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20%FBS的LG-DMEM培... 目的建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法。方法将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20%FBS的LG-DMEM培养基连续培养10 d;移去脐带组织后,培养皿中的细胞继续培养至80%-90%融合。传代和扩增3代(次)后,以倒置光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型及细胞周期,用含有成骨细胞诱导剂、脂肪细胞诱导剂对传代培养至第3代的细胞分别定向诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞,并对诱导后细胞用碱性磷酸酶检测试剂、Von-Kossa染色检测试剂和茜苏红染色试剂作细胞生物学检测。结果脐带组织在贴壁培养5 d,组织周围可见有少量细胞贴壁生长,主要呈"成纤维样",形状不规则,移去脐带组织后继续培养至14-15 d时,细胞达到80%-90%汇合;细胞表面表达CD73、CD105、CD90、CD44、CD29、CD71及CD13,不表达CD34、CD14、CD133、CD45、HLA-DR;培养至第4代时约72.724%的细胞处在G1期,S期细胞占18.069%,第6代时,G1期细胞约为83.875%、S期细胞仅为9.606%左右。细胞经成骨细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色显示呈强阳性,茜苏红染色和Von-Kossa染色显示细胞有钙盐沉积并形成钙结节;细胞经成脂细胞诱导分化后,油红O染色呈红色,显示胞浆内有大量甘油三酯的聚集。结论采用非酶解法从人脐带Wharton's jelly中分离及培养扩增的细胞具备MSCs的基本特性,具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力。 展开更多
关键词 间充质干细胞 人脐带 Wharton’s JELLY 成骨细胞 脂肪细胞 非酶解法
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脐带间充质干细胞治疗严重膝骨关节炎的对照研究 被引量：13
2
作者 杨孝兵 蒋峰 +3 位作者 张帆 施星芬 刘丽敏 徐志国 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2017年第3期305-311,共7页
目的:对照透明质酸钠(sodium hyaluronate or hyaluronic acid,HA)与人源脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)膝关节腔两种注射方法治疗中重度膝骨关节炎(osteoarthritis,OA),观察关节疼... 目的:对照透明质酸钠(sodium hyaluronate or hyaluronic acid,HA)与人源脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)膝关节腔两种注射方法治疗中重度膝骨关节炎(osteoarthritis,OA),观察关节疼痛、功能的疗效、放射学变化以及安全性。方法:采用随机半盲平行对照的研究方法,将44例中重度膝骨关节炎的患者分为3组:A组16例,5次透明质酸钠注射组;B组15例,2次h UC-MSCs注射组;C组13例,4次h UC-MSCs注射组。观察指标:静止VAP评分,美国膝关节协会(AKS)的膝骨关节炎关节性和功能性评分,Kellgren-Lawrence(K-L)放射学评估。随访期12个月,治疗前和治疗后3、6、12个月进行随访记录临床体检、观察指标结果及安全性评估;治疗前和治疗后6、12个月进行实验室检查和膝关节X片检查。结果:3组治疗前比较,静止VAP评分、AKS关节性评分、AKS功能评分、K-L放射学评估均无统计学差异(P>0.05)。治疗后3、6、12个月时,3组间静止VAP评分、AKS关节性评分、AKS功能评分比较均有统计学差异(P<0.05,P<0.01);K-L放射学评估各时段各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:h UC-MSCs移植治疗严重OA较透明质酸钠能更快速、更显著、更持久地减轻关节疼痛、改善关节功能,4次注射疗效优于2次注射。 展开更多
关键词 骨关节炎 脐带间充质干细胞 透明质酸钠
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慢病毒重组同源盒基因HOXA4表达载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的实验性研究
3
作者 贺玲 贺文凤 +1 位作者 郭玲玲 李剑 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期471-474,共4页
目的 构建携带同源基因HOXA4的慢病毒表达载体,并测定其对人脐带间充质干细胞的感染效率.方法 使用酶切及PCR技术从含有HOXA4基因的质粒克隆模版HOXA4-MSCV逆转录载体中获取目的 基因HOXA4,并将HOXA4基因重组到慢病毒载体表达质粒上Lent... 目的 构建携带同源基因HOXA4的慢病毒表达载体,并测定其对人脐带间充质干细胞的感染效率.方法 使用酶切及PCR技术从含有HOXA4基因的质粒克隆模版HOXA4-MSCV逆转录载体中获取目的 基因HOXA4,并将HOXA4基因重组到慢病毒载体表达质粒上Lenti-GFP-CTB,通过酶切、测序验证HOXA4基因后,将Lenti-GFP-HOXA4质粒、和辅助包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、PMD2G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带HOXA4基因的重组慢病毒Lentiviral-HOXA4;然后感染人脐带间充质干细胞,通过荧光显微镜及流式细胞术检测其感染效率.结果 成功构建携带HOXA4基因的慢病毒表达载体Lentiviral-HOXA4,并获得高纯度的慢病毒浓缩液.经检测病毒滴度达2.11×108 TU/ml.成功转染HOXA4基因的脐带间充质干细胞表达绿色荧光蛋白,当病毒感染复数（MOI）值为60时转染效率最高,达（95.4±4.3）%.结论 成功构建携带人HOXA4基因的慢病毒,并可以在体外有效转染人脐带间充质干细胞. 展开更多
关键词 同源基因HOXA4 慢病毒表达载体 人脐带间充质干细胞
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