黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究 被引量：10

1

作者 余静 赵海岚 +2 位作者 程凯尧 沈平宇 金黄林 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第4期361-368,共8页

目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),黄芪皂苷... 目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),黄芪皂苷组(30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10μg/mL黄芪皂苷)。噻唑蓝比色(MTT)法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)表达水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。 展开更多

关键词 黄芪皂苷 蛋白激酶R样内质网激酶途径 人视网膜色素上皮细胞 细胞自噬 糖尿病视网膜病变

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枸杞多糖对LPS诱导的人视网膜色素上皮细胞炎性反应的影响及机制 被引量：10

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作者 闫梅 马倩 +2 位作者 马雅玲 刘媛 马立萍 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期411-416,共6页

目的:探索枸杞多糖(LBP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞的炎性反应的影响及其可能介导的信号通路。方法:通过LPS刺激体外培养的ARPE-19细胞构建炎性反应模型。将细胞随机分为5组,空白组使用完全培养基培养,LPS... 目的:探索枸杞多糖(LBP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞的炎性反应的影响及其可能介导的信号通路。方法:通过LPS刺激体外培养的ARPE-19细胞构建炎性反应模型。将细胞随机分为5组,空白组使用完全培养基培养,LPS组给予含10μg/mL LPS的完全培养基刺激24h,低、中、高浓度LBP组分别给予0.1、0.5、1mg/mL LBP完全培养基孵育24h后给予含10μg/mL LPS的完全培养基刺激24h。应用CCK-8观察细胞存活率、实时荧光定量PCR检测相关炎性因子的mRNA表达量及Western-blot检测NF-κB/MAPK信号通路相关磷酸化蛋白表达量的变化。结果:与正常细胞相比,LPS刺激后,ARPE-19的存活率下降。同时,随着外源性LBP浓度增加,ARPE-19的细胞存活率升高,且细胞内炎性因子IL-1β、IL-6和MCP-1的表达量降低,并伴随NF-κB/MAPK通路的相关磷酸化蛋白(p-p65、p-IκBα、p-JNK、p-ERK及p-p38)的表达下降。结论:枸杞多糖通过抑制胞内炎性因子及NF-κB/MAPK通路相关因子的磷酸化,从而阻止LPS诱导人视网膜色素上皮细胞产生的炎性反应。 展开更多

关键词 枸杞多糖 细菌脂多糖 人视网膜色素上皮细胞 炎性反应 NF-κB MAPK

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姜黄素通过AKT/HIF-1α/VEGF信号通路在体外抑制脉络膜新生血管的机制 被引量：8

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作者 陈水龄 亢泽峰 +4 位作者 褚文丽 郝雪莲 陶方方 张明明 李书娇 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第4期541-548,共8页

目的:探讨姜黄素在体外抑制脉络膜新生血管(CNV)生成的作用及机制。方法:氯化钴(CoCl_(2))诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞建立化学性缺氧模型,采用CCK-8法检测姜黄素对CoCl_(2)诱导的ARPE-19细胞活性的影响,采用RT-qPCR和Western b... 目的:探讨姜黄素在体外抑制脉络膜新生血管(CNV)生成的作用及机制。方法:氯化钴(CoCl_(2))诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞建立化学性缺氧模型,采用CCK-8法检测姜黄素对CoCl_(2)诱导的ARPE-19细胞活性的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测姜黄素对CoCl_(2)诱导的ARPE-19缺氧模型细胞内AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达的影响。采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验及Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。结果:100μmol/L CoCl_(2)可成功建立ARPE-19细胞化学缺氧模型。CoCl_(2)在100μmol/L浓度下促进ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。姜黄素在浓度为100μmol/L时可减少ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。ARPE-19细胞姜黄素低(6.25μmol/L)、中(25μmol/L)、高剂量组(100μmol/L)条件培养液可显著抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显著抑制HUVEC细胞垂直迁移和细胞侵袭。ARPE-19细胞姜黄素中、高剂量组条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。结论:姜黄素在100μmol/L对CoCl_(2)诱导ARPE-19细胞缺氧有保护作用。姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 姜黄素 血管内皮生长因子(VEGF) 缺氧诱导因子-1α(HIF-1α) 蛋白激酶B(AKT) 人视网膜色素上皮细胞 人脐静脉内皮细胞

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维生素E对大剂量蓝光诱导损伤视网膜色素上皮细胞的影响 被引量：6

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作者 王珊珊 李泳宁 +2 位作者 张月芬 陈鸿娇 张文贤 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期189-193,共5页

目的:研究维生素E(Vit E)对大剂量蓝光诱导人视网膜色素上皮(hRPE)细胞损伤的影响,为减少蓝光损伤hRPE细胞的预后方案提供思路。方法:用3000±150Lx蓝光建立hRPE细胞损伤模型;利用流式细胞术检测照射时间分别为0、3、6、9、12、24h... 目的:研究维生素E(Vit E)对大剂量蓝光诱导人视网膜色素上皮(hRPE)细胞损伤的影响,为减少蓝光损伤hRPE细胞的预后方案提供思路。方法:用3000±150Lx蓝光建立hRPE细胞损伤模型;利用流式细胞术检测照射时间分别为0、3、6、9、12、24h的6组hRPE细胞凋亡率及活性氧相对量;利用流式细胞术检测照射0h组、照射6h组、照射6h前或后加不同浓度Vit E组(Vit E的浓度分别为10、50、100μmol/L)的hRPE细胞凋亡情况和活性氧相对量,并采用Hoechst 33258试剂染色在荧光显微镜下观察hRPE细胞的荧光强度。结果:与照射0h组相比,照射3、6、9、12、24h组的hRPE细胞活性氧相对量明显增加(均P<0.01),照射6、9、12、24h组的hRPE细胞凋亡率也明显增加(均P<0.01),但照射3h组的hRPE细胞凋亡率无明显增加,差异无统计学意义(P=0.46)。与照射6h组相比,除照射6h前加入10μmol/L的hRPE细胞凋亡率(P=0.66)外,其他加Vit E的实验组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率明显减少、细胞中Hoechst 33258释放蓝色荧光逐渐减弱,且呈浓度依赖(均P<0.01)。与照射0h组相比,加Vit E的6组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率有差异(均P<0.01)。同一浓度的Vit E,除10μmol/L Vit E的hRPE细胞凋亡率在照射前或后加无差异(P=0.08)外,照射后加Vit E组比照射前加Vit E组的hRPE细胞活性氧相对量、凋亡率明显减少(均P<0.01)。结论:hRPE细胞经蓝光照射后出现胞内活性氧相对量增多的现象早于细胞凋亡,清除胞内活性氧是减少大剂量蓝光诱导hRPE细胞损伤的思路。Vit E可保护由大剂量蓝光诱导的RPE细胞损伤,这种效应随Vit E浓度增加而增强,且照射后加入比照射前加入的效果更好。但需要一定剂量的Vit E才能显效,而且无法完全修复损伤。 展开更多

关键词 大剂量蓝光 维生素E 人视网膜色素上皮细胞 体外培养 影响

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DRP1调控线粒体稳态对人视网膜色素上皮细胞上皮-间充质转化的影响

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作者 汤中 唐云骢 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第6期443-448,共6页

目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)... 目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)O_(2)组:先采用650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预细胞,此后培养方式及时间与NG组相同;H_(2)O_(2)+Mdivi-1组:先采用10μmol·L^(-1)Mdivi-1处理ARPE-19细胞2 h,再给予650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预,此后培养方式及时间与NG组相同。Western blot检测各组细胞p-DRP-1/DRP1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白(Vimintin)及紧密连接蛋白(ZO-1)表达水平;线粒体红色荧光探针检测各组细胞线粒体形态;线粒体超氧化物红色荧光探针检测各组细胞线粒体活性氧(ROS)水平;JC-1染色试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位;免疫荧光检测各组细胞中ZO-1表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值高于NG组,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值低于H_(2)O_(2)组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞较H_(2)O_(2)组线粒体碎片化程度得到改善。H_(2)O_(2)组细胞线粒体ROS水平(4.42±0.29)与NG组(1.00±0.17)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(2.15±0.18)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞红/绿荧光强度比值(0.16±0.12)与NG组(1.00±0.09)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(0.42±0.05)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞上皮样标志物表达下降,间质样标志物表达上升,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞上皮样标志物表达上升,间质样标志物表达下降。各组细胞α-SMA、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、Vimintin及ZO-1相对表达量比较,H_(2)O_(2)组与NG组及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ZO-1免疫荧光染色实验显示,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组的细胞连接紧密程度优于H_(2)O_(2)组。结论DRP1� 展开更多

关键词 线粒体动力相关蛋白 线粒体功能 人视网膜色素上皮细胞 上皮-间充质转化 年龄相关性黄斑变性

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高糖对人视网膜色素上皮细胞VEGF及PEDF表达的影响 被引量：5

6

作者 张春侠 胡建民 庄铭忠 《中国实用眼科杂志》 CSCD 北大核心 2012年第11期1373-1376,共4页

目的探讨高糖对人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮源性生长因子（PEDF）的干预作用。方法采用HRPE细胞株，将细胞分为正常对照组（NG，5．6mmol／L葡萄糖）、高糖组（HG，15、20、30mmol／L葡萄糖）... 目的探讨高糖对人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮源性生长因子（PEDF）的干预作用。方法采用HRPE细胞株，将细胞分为正常对照组（NG，5．6mmol／L葡萄糖）、高糖组（HG，15、20、30mmol／L葡萄糖）、高渗组（HM，24．4mmol／L甘露醇＋5．6mmol/L葡萄糖）。应用逆转录PCR（RT—PCR）技术检测VEGF及PEDF mRNA的表达。用ELISA技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达。结果高糖作用下VEGF mRNA和蛋白表达显著增高，PED FmRNA的表达受到显著抑制。结论高糖可从转录水平及蛋白水平诱导HRPE细胞VEGF的表达，并抑制PEDF的表达。 展开更多

关键词 人视网膜色素上皮细胞 高浓度葡萄糖 VEGF PEDF

原文传递

蓝光照射人视网膜色素上皮细胞后通过增加细胞内钙离子浓度促进凋亡的机制 被引量：5

7

作者 朱红娜 乔瑛 +3 位作者 苏安乐 张婷 柏凌 梁厚成 《中国医药导报》 CAS 2016年第17期4-7,共4页

目的观察蓝光对人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法细胞株分为蓝光照射组和对照组。蓝光照射组,利用35 W白色冷光灯加用蓝色滤光片建立蓝光损伤体外培养的RPE细胞模型,蓝光控制波长范围470-520 nm,光照强度在2000 l... 目的观察蓝光对人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法细胞株分为蓝光照射组和对照组。蓝光照射组,利用35 W白色冷光灯加用蓝色滤光片建立蓝光损伤体外培养的RPE细胞模型,蓝光控制波长范围470-520 nm,光照强度在2000 lx左右,光照时间24-96 h,实验过程中保证光照在细胞培养孵箱内密进行。对照组为常规避光孵箱培养细胞,除无光线照射外,各培养条件相同。利用流式细胞仪检测RPE细胞的凋亡变化,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测RPE细胞内游离钙离子浓度。结果与对照组比较,蓝光照射组的RPE细胞凋亡增加（P〈0.05）;照射组的RPE细胞内游离钙离子浓度增加（P〈0.05）;通过特异性抑制L型电压依赖性钙离子通道功能降低RPE细胞内游离钙离子浓度,在一定程度上降低了蓝光引起的RPE细胞凋亡。结论蓝光可以通过增加RPE细胞内游离钙离子浓度促进RPE细胞的凋亡,L型电压依赖性钙离子通道有望成为治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜变性疾病的新靶点。 展开更多

关键词 蓝光 人视网膜色素上皮细胞 凋亡 细胞内钙离子浓度

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滋阴补肾片对H_(2)O_(2)诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用 被引量：1

8

作者 苏晶 方越 +1 位作者 刘新泉 张殷建 《中国中医眼科杂志》 2023年第7期601-605,共5页

目的探讨滋阴补肾片(ZYBS)对H_(2)O_(2)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞ARPE-19氧化应激损伤的保护作用。方法将ARPE-19细胞分为对照组(CG)、模型组(MG)、低剂量ZYBS组(LZYBS)、中剂量ZYBS组(MZYBS)、高剂量ZYBS组(HZYBS),CG组不作任... 目的探讨滋阴补肾片(ZYBS)对H_(2)O_(2)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞ARPE-19氧化应激损伤的保护作用。方法将ARPE-19细胞分为对照组(CG)、模型组(MG)、低剂量ZYBS组(LZYBS)、中剂量ZYBS组(MZYBS)、高剂量ZYBS组(HZYBS),CG组不作任何处理,MG组加入200 mM H_(2)O_(2)处理24 h,LZYBS、MZYBS、HZYBS组分别加入0.5%、1.0%、2.0%的ZYBS含药血清后,再加入200 mM H_(2)O_(2)处理24 h。细胞计数试剂-8(CCK-8)测定各组细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)细胞原位凋亡试剂盒测定细胞凋亡,生化试剂盒检测细胞上清液中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的表达水平。结果(1)细胞活性:与CG组比较,MG组ARPE-19细胞活性降低(t=27.844,P=0.000);与MG组比较,LZYBS、MZYBS、HZYBS组ARPE-19细胞活性升高(t_(LZYBS)=3.550,P=0.003;t_(MZYBS)=7.402,t_(HZYBS)=10.930,均P=0.000),差异均有统计学意义,且细胞活性随浓度的升高呈剂量依赖性。(2)细胞凋亡:与CG组比较,MG组ARPE-19细胞凋亡率升高(t=25.611,P=0.000);与MG组比较,MZYBS、HZYBS组ARPE-19细胞凋亡率降低(t_(MZYBS)=4.376,P=0.001;t_(HZYBS)=8.166,P=0.000),差异均有统计学意义,且细胞凋亡率随浓度的升高呈剂量依赖性。(3)氧化应激:与CG组比较,MG组ARPE-19细胞ROS、MDA水平升高(t_(ROS)=27.333,t_(MDA)=23.922,均P=0.000),SOD、GSH-Px水平降低(t_(SOD)=11.083,t_(GSH-Px)=14.192,均P=0.000);与MG组比较,LZYBS、MZYBS、HZYBS组ARPE-19细胞ROS(t_(LZYBS)=6.410,t_(MZYBS)=10.417,t_(HZYBS)=10.116,均P=0.000)、MDA(t_(LZYBS)=4.998,t_(MZYBS)=12.319,t_(HZYBS)=19.922,均P=0.000)水平降低,SOD(t_(LZYBS)=6.268,t_(MZYBS)=7.889,t_(HZYBS)=14.894,均P=0.000)、GSH-Px(GSH-Px:t_(LZYBS)=4.453,P=0.001;t_(MZYBS)=6.162,t_(HZYBS)=11.501,均P=0.000)水平升高,差异均有统计学意义,且呈剂量依赖性。结论ZYBS可降低H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞的氧化应激损伤,抑制凋亡并减轻氧化应激水平。 展开更多

关键词 滋阴补肾片 年龄相关性黄斑变性 人视网膜色素上皮细胞 氧化应激

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α-平滑肌肌动蛋白在PVR增生膜中的表达以及PDGF对其在人RPE细胞中表达的影响 被引量：5

9

作者 司艳芳 王君 +2 位作者 关娟 韩泉洪 惠延年 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第11期1010-1013,共4页

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)增生膜中的表达以及血小板源性生长因子(PDGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达α-SMA的影响。方法通过免疫荧光实验和免疫组化法对14... 目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)增生膜中的表达以及血小板源性生长因子(PDGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达α-SMA的影响。方法通过免疫荧光实验和免疫组化法对14例PVR患者视网膜表面增生膜(PRM)中α-SMA的表达进行定性及定量分析;用外源性PDGF-BB处理体外培养的人RPE细胞,并通过免疫荧光实验检测PDGF-BB对RPE细胞表达α-SMA的影响。结果免疫组织化学结果显示:α-SMA在14例不同级别的PRM中均有表达,主要分布在胞浆中,但其表达的程度有差异。α-SMA阳性细胞在PVR/C级PRM膜中比率为35/80,在PVR/D级PRM膜中的比率为50/60。免疫荧光定量分析结果显示:α-SMA在C级PRM膜和D级PRM膜中的平均荧光强度分别为12.31和23.09,二者差异有统计学意义(P<0.01)。外源性的PDGF-BB(50μg.L-1)能显著促进人RPE细胞中α-SMA的表达(50μg.L-1PDGF-BB处理前后平均荧光强度分别为10.08和17.23),差异有统计学意义(P<0.05),这种促进作用在培养基中有血清存在时明显增强。结论α-SMA在PVR增生膜中广泛表达,其表达量与PVR病变程度有关,提示α-SMA可作为检测PVR病变程度的一个潜在因子;PDGF促进α-SMA的表达,这提示PDGF在PVR发病中有重要作用,为临床上PVR的预防和治疗提出新的思路。 展开更多

关键词 Α-平滑肌肌动蛋白 增生性玻璃体视网膜病变 血小板源性生长因子 人视网膜色素上皮细胞

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转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义 被引量：4

10

作者 刘亚军 闫峰 +2 位作者 叶巍 朱欣悦 黄振平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第11期1001-1005,共5页

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后... 目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。 展开更多

关键词 人视网膜色素上皮层细胞 上皮-间质转分化 转化生长因子-Β2 miRNA-29b 增生性玻璃体视网膜病变

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辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究 被引量：4

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作者 邓莹莹 丁慰祖 《川北医学院学报》 CAS 2019年第5期612-614,共3页

目的:分析辅酶Q100对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)细胞氧化应激损伤的作用效果与机制。方法:实验分为4组:氧化应激模型组,用H2O2进行处理;实验高、低剂量组,采用不同剂量辅酶Q10预处理细胞,然后再经H2O2... 目的:分析辅酶Q100对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)细胞氧化应激损伤的作用效果与机制。方法:实验分为4组:氧化应激模型组,用H2O2进行处理;实验高、低剂量组,采用不同剂量辅酶Q10预处理细胞,然后再经H2O2诱导;正常细胞对照组,不用辅酶Q10和H2O2处理。采用CCK-8法检测细胞活性;应用DCFH-DA荧光探针检测法检测细胞内活性氧含量;Western blot法检测细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、磷酸化-Akt、Akt的表达量。结果:辅酶Q10能够增强H2O2处理后的人视网膜色素上皮细胞的活性;降低由于H2O2引起的细胞内活性氧的水平,抑制人视网膜色素上皮细胞中Caspase-3、Bax的表达,促进细胞中Bcl-2的表达水平;抑制人视网膜色素上皮细胞中Akt的磷酸化水平。结论:辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制细胞氧化损伤与凋亡发生相关因子的表达,促进凋亡抑制因子Bcl-2表达,抑制Akt发生磷酸化等多个方面起作用。 展开更多

关键词 辅酶Q10 氧化应激 人视网膜色素上皮细胞

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基于VEGF/MAPKs通路探讨益肾养肝明目方对RPE细胞凋亡作用的影响

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作者 龚雁 李萌 +3 位作者 廖燕红 高健 章晓林 王桑桑 《中国中医眼科杂志》 2023年第11期1007-1013,共7页

目的探讨益肾养肝明目方(YYM)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的保护作用及药理机制。方法常规培养ARPE-19细胞,筛选H_(2)O_(2)、康柏西普和YYM的最佳浓度,之后将细胞分为空白组(BG)、模型组(MG)、益肾养肝... 目的探讨益肾养肝明目方(YYM)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的保护作用及药理机制。方法常规培养ARPE-19细胞,筛选H_(2)O_(2)、康柏西普和YYM的最佳浓度,之后将细胞分为空白组(BG)、模型组(MG)、益肾养肝明目方组(YYM)、阳性对照药康柏西普组(CB)、益肾养肝明目方+康柏西普组(YYM+CB)、益肾养肝明目方对照组(YYM-CG),以400μM H_(2)O_(2)、2μg/mL康柏西普和40μg/mL YYM的最佳浓度处理。使用相差显微镜观察各组ARPE-19细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)表达,Western Blot检测血管内皮生长因子/丝裂原活化蛋白激酶(VEGF/MAPKs)通路相关蛋白外源性调节蛋白激酶1/2(eERK1/2)、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、细胞色素c(Cyc)表达。结果(1)细胞形态:MG组细胞出现皱缩,部分脱落;而YYM、CB组的细胞损伤明显减少,凋亡细胞数量下降。(2)细胞凋亡:与BG组比较,MG组细胞凋亡率较高(t=12.408,P=0.000);与MG组比较,YYM、CB、YYM+CB组细胞凋亡率均降低(t_(YYM)=6.023,t_(CB)=5.967,t_(YYM+CB)=9.804,均P=0.000)。(3)ROS:与BG组比较,MG组ROS表达较高(t=14.388,P=0.000);与MG组比较,YYM、CB、YYM+CB组ROS表达较低(t_(YYM)=8.621,t_(CB)=8.774,t_(YYM+CB)=12.620,均P=0.000)。(4)VEGF/MAPKs:与BG组比较,MG组VEGF、p-p38 MAPKs、p-SAPK/JNK、p-ERK1/2、Bax、Bcl-2、Cyc蛋白表达均较高(t_(VEGF)=18.569,t_(p-p38 MAPK)=22.097,t_(p-SAPK/JNK)=17.548,t_(p-ERK1/2)=18.567,t_(Bax)=20.575,t_(Bcl-2)=18.879,t_(Cyc)=28.196,均P=0.000);与MG组比较,YYM、CB、YYM+CB组VEGF、p-p38 MAPK、p-SAPK/JNK、p-ERK1/2、Bax、Bcl-2、Cyc蛋白表达均较低(YYM组:t_(VEGF)=9.493,t_(p-p38 MAPK)=8.942,t_(p-SAPK/JNK)=8.683,t_(p-ERK1/2)=8.929,t_(Bax)=8.849,t_(Bcl-2)=4.863,t_(Cyc)=11.832,均P=0.000;CB组:t_(VEGF)=16.065,t_(p-p38 MAPK)=16.033,t_(p-SAPK/JNK)=15.558,t_(p-ERK1/2)=13.890,t_(Bax)=16.043,t_(Bcl-2)=6.579,t_(Cyc)=22.028,均P=0.000;YYM+CB� 展开更多

关键词 益肾养肝明目方 VEGF MAPKS 人视网膜色素上皮细胞 氧化应激

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溶血磷脂酸对人类视网膜色素上皮细胞生物学功能的影响研究 被引量：2

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作者 徐国兴 谢茂松 +3 位作者 傅冷西 郭健 杨娟 胡建章 《国际眼科杂志》 CAS 2007年第5期1281-1284,共4页

目的:研究溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对体外培养人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelia-lium,hRPE)细胞增殖活力、分化特性及免疫活性等生物学功能的影响。方法:采用MTT法检测体外培养hRPE细胞增殖活力;角蛋... 目的:研究溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对体外培养人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelia-lium,hRPE)细胞增殖活力、分化特性及免疫活性等生物学功能的影响。方法:采用MTT法检测体外培养hRPE细胞增殖活力;角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫细胞化学染色方法分析体外培养hRPE细胞分化特性;流式细胞术检测hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-1的表达。结果:加药后第2d开始LPA组吸光度明显高于对照组(P<0.001);角蛋白18表达对照组较LPA组强(uc=-12.683,P<0.001),α-SMA表达对照组较LPA组弱(uc=10.402,P<0.001);hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-1的阳性细胞率和平均荧光强度组间差异无统计学意义(各指标均P>0.05)。结论:LPA明显促进hRPE的增殖活力,促进hRPE转分化,在PVR形成过程中起潜在的促进作用,但对hRPE免疫活性无影响。 展开更多

关键词 人类视网膜色素上皮细胞 溶血磷脂酸 细胞增殖 转分化 免疫活性

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枸杞多糖对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响

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作者 梁念孩 杜丽君 +4 位作者 马燕 夏会东 窦凯凯 姚青 摆茹 《宁夏医科大学学报》 2023年第7期649-654,共6页

目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高... 目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、LBP低浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+100μg·mL^(-1)LBP)、LBP中浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+200μg·mL^(-1)LBP)和LBP高浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+400μg·mL^(-1)LBP)。采用免疫荧光观察各组细胞中NLRP3蛋白的表达,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和其下游细胞焦亡蛋白消皮素D(GSDMD)的相对表达量,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(interleukm,IL)-1β和IL-18的表达水平。结果 免疫荧光结果显示,NLRP3蛋白主要在视网膜色素上皮细胞胞质中表达,且与正常组相比,高糖组NLRP3蛋白的表达水平升高(P<0.05);而与高糖组相比,LBP中、高浓度组NLRP3蛋白的表达水平降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量降低(P均<0.05)。ELISA结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中IL-1β和IL-18表达水平均升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中IL-1β、IL-18表达水平均降低(P均<0.05)。结论 LBP可通过抑制NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的激活,从而对高糖环境下的人视网膜色素上皮细胞产生保护作用。 展开更多

关键词 枸杞多糖 人视网膜色素上皮细胞 NLRP3炎症小体 细胞焦亡 白细胞介素

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康柏西普联合PDGF受体抑制剂对缺氧条件下视网膜色素上皮细胞增殖、迁移及VEGF表达的影响 被引量：4

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作者 赵洁文 李明新 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第12期1127-1131,共5页

目的探讨康柏西普联合血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)受体抑制剂对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞增殖、迁移以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)m RNA及蛋白表达... 目的探讨康柏西普联合血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)受体抑制剂对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞增殖、迁移以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)m RNA及蛋白表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞,用不同浓度CoCl_2诱导培养,细胞增殖与CCK-8法检测ARPE-19细胞增殖活性,筛选最佳CoC l2浓度用于构建缺氧模型;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度康柏西普组,CCK-8法检测不同浓度康柏西普对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳康柏西普浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度PDGF受体抑制剂组,CCK-8法检测不同浓度PDGF受体抑制剂对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳PDGF受体抑制剂浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、20 mg·L^(-1)康柏西普组、20μmol·L^(-1)PDGF受体抑制剂组、康柏西普联合PDGF受体抑制剂组(最佳药物浓度组合);CCK-8法检测缺氧损伤后各组ARPE-19细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞的迁移情况,ELISA法检测细胞上清液中VEGF蛋白浓度,应用实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF mR NA的表达水平。结果 CCK-8筛选结果显示,100μmol·L^(-1)CoC l2处理组ARPE-19细胞的吸光度值最大(1.063±0.031),设立为缺氧细胞模型浓度。CCK-8筛选结果显示,20 mg·L^(-1)康柏西普组细胞增殖率为(94.58±3.80)%、20μmol·L^(-1)PDGF受体抑制剂组细胞增殖率为(96.72±5.44)%,效果均较其他相应组好,选取该浓度进行后续实验。析因分析发现缺氧损伤后各药物处理组(康柏西普、PDGF受体抑制剂、康柏西普联合PDGF受体抑制剂)与缺氧组比较,细胞增殖活性下降,细胞迁移数降低,VEGF蛋白浓度亦下降,其中康柏西普联合PDGF受体抑制剂组下降最明显,康柏西普组及两药联合处理组ARPE-19细胞VEGF mR NA表达较� 展开更多

关键词 康柏西普 血小板衍生生长因子受体抑制剂 缺氧 人视网膜色素上皮细胞 血管内皮生长因子

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白藜芦醇对脂多糖诱导人视网膜色素上皮ARPE-19细胞损伤的保护机制研究 被引量：3

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作者 宋慧 王英豪 《中国中医眼科杂志》 2021年第4期238-244,共7页

目的观察白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导人视网膜色素上皮(hRPE)ARPE-19细胞损伤的保护作用,及其对Aldolase/AMPK信号通路的影响。方法将细胞分为5组:(1)对照组(NC组),采用正常完全培养液培养;(2)LPS组,采用含100 ng/mL的LPS培养液培养... 目的观察白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导人视网膜色素上皮(hRPE)ARPE-19细胞损伤的保护作用,及其对Aldolase/AMPK信号通路的影响。方法将细胞分为5组:(1)对照组(NC组),采用正常完全培养液培养;(2)LPS组,采用含100 ng/mL的LPS培养液培养;(3)LPS+RES组(LR组),采用100 ng/mL的LPS和40μM的RES共同处理;(4)LPS+二氢脱氧吗啡(CC)组(LC组),采用100 ng/mL的LPS和10μM的CC共同处理;(5)LPS+CC+RES组(LCR组),采用100 ng/mL的LPS和10μM的CC和40μM的RES共同处理。5组均处理24 h后,通过CCK8法和Hoechst染色法检测ARPE-19细胞增殖活性,流式细胞术检测ARPE-19细胞凋亡率和线粒体膜电压(MMP),ATP测定试剂盒分析ARPE-19细胞中ATP含量,Westernblot分析ARPE-19细胞中Aldolase和p-AMPK蛋白的表达水平。结果(1)ARPE-19细胞增殖:NC组、LPS组和LR组之间比较,差异具有统计学意义(F=108.412,P=0.000)。组间两两比较均有统计学意义(P<0.05)。(2)ARPE-19细胞凋亡:NC组、LPS组和LR组之间比较,差异具有统计学意义(F=43.437,P=0.000)。组间两两比较均有统计学意义(P<0.05)。(3)ARPE-19细胞ATP水平:NC组、LPS组和LR组之间比较,差异具有统计学意义(F=46.803,P=0.000)。组间两两比较均有统计学意义(P<0.05)。(4)ARPE-19细胞的MMP:NC组、LPS组和LR组之间比较,差异具有统计学意义(F=57.815,P=0.000)。与NC组比较,LPS组明显降低(P<0.05),LR组降低不明显(P>0.05);与LPS组比较,LR组明显升高(P<0.05)。(5)p-AMPK蛋白表达水平:5组比较,差异有统计学意义(F=19.804,P=0.000)。与NC组比较,LPS组、LR组和LC组升高(P<0.05),LCR组升高不明显(P>0.05)。与LPS组比较,各组均有统计学意义(P<0.05)。与LR组比较,各组均有统计学意义(P<0.05)。与LC组比较,LCR组升高不明显(P>0.05)。(6)细胞增殖活力:5组比较,差异有统计学意义(F=31.209,P=0.000)。与NC组比较,各组均有统计学意义(P<0.05)。与LPS组比较,LR组和LC组有统计学意义(P<0.05),LCR组升高不明显(P> 展开更多

关键词 白藜芦醇 人视网膜色素上皮细胞 Aldolase/AMPK信号通路

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枸杞多糖对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响 被引量：3

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作者 闫梅 马倩 +2 位作者 马雅玲 刘媛 蒋璐 《宁夏医科大学学报》 2021年第6期595-602,共8页

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)预处理对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人视网膜色素上皮细胞(adult retinal pigment epithelial cells-19,ARPE-19)炎性反应相关细胞凋亡的影响。方法将体外培养的ARPE-1... 目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)预处理对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人视网膜色素上皮细胞(adult retinal pigment epithelial cells-19,ARPE-19)炎性反应相关细胞凋亡的影响。方法将体外培养的ARPE-19随机分为空白组,模型组,0.1、0.5、1 mg·mL^(-1)LBP组,不同浓度LBP预处理24 h后与模型组同时给予10μg·mL^(-1)LPS诱导24 h。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot观察凋亡相关因子Bcl-2、Bax的mRNA及蛋白表达量,ELISA检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL^(-1)β及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度。结果与空白组相比,模型组细胞活力下降,细胞凋亡率增加(P均<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达量下降,Bax升高(P均<0.05),细胞上清液中炎症因子浓度上调(P<0.05)。各LBP处理组CCK-8结果示细胞活力增加(P<0.05);流式细胞仪检测细胞凋亡率降低(P<0.05);RT-PCR显示Bcl-2的mRNA表达量增加、Bax表达量减少(P均<0.05);Western blot观察到Bcl-2的蛋白相对表达量上调、Bax的表达量下调(P均<0.05);ELISA结果示细胞上清液中炎症因子IL-6、IL^(-1)β及MCP-1的蛋白浓度降低(P均<0.05)。结论LBP可减少LPS诱导ARPE-19细胞外分泌炎症因子IL-6、IL^(-1)β及MCP-1,并通过逆转细胞内Bcl-2、Bax的转录和翻译过程,抑制炎性反应相关的RPE细胞凋亡。 展开更多

关键词 枸杞多糖 细胞凋亡 炎性反应 人视网膜色素上皮细胞 脂多糖

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不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响 被引量：3

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作者 宋超 俞洋 《宁夏医科大学学报》 2014年第6期625-627,637,I0002,共5页

目的研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)凋亡的影响,筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长,为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE),用三基色冷光灯... 目的研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)凋亡的影响,筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长,为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE),用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,以不同光照时长(2、4、6h)对细胞进行照射,建立光损伤模型。分别采用MTS法和流式细胞术检测细胞活力及早期凋亡率,比较给予不同光照时长后,hRPE的活力及早期凋亡率的差异。结果与空白对照组比较,不同光照时长(2、4、6h)均能抑制细胞活力及引起细胞凋亡;光照时间越长,细胞损伤越严重,光照6h组细胞活力下降明显(P<0.05);光照组细胞早期凋亡率较空白对照组升高(P<0.05),光照组间比较,光照4h组早期凋亡率升高明显(P<0.05)。结论不同光照时长均可造成hRPE不同程度的损害;给予4h时长光照后,hRPE损伤以早期凋亡为主,同时又保有较高的细胞活力,故选取4h作为最佳建造光损伤模型的光照时长。 展开更多

关键词 光损伤 人视网膜色素上皮细胞 早期凋亡率

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紫杉醇对视网膜色素上皮细胞功能的破坏及其潜在机制 被引量：2

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作者 叶亚婷 窦国睿 +4 位作者 常天芳 孙宇 牛亚丽 周子义 储昭节 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期194-199,共6页

目的:探究抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡、周期、形态和视网膜外屏障的潜在毒性作用。方法:体外培养ARPE-19细胞,将细胞分为对照组(正常培养基培养)、加药物组(PTX)。不同浓度PTX(0.005、0.05、0.5、... 目的:探究抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡、周期、形态和视网膜外屏障的潜在毒性作用。方法:体外培养ARPE-19细胞,将细胞分为对照组(正常培养基培养)、加药物组(PTX)。不同浓度PTX(0.005、0.05、0.5、5mg/L)处理ARPE-19细胞12、24、36、48、72h,CCK8法检测不同浓度PTX不同时间点对ARPE-19细胞增殖的影响;流式细胞术检测不同浓度PTX不同时间点对ARPE-19细胞凋亡的影响及周期阻滞作用;免疫荧光观察细胞形态变化;Western blot检测凋亡相关蛋白表达及屏障功能相关蛋白表达;通过测量细胞跨上皮电阻检测药物对细胞屏障的影响。结果:PTX使ARPE-19细胞的增殖能力降低,0.005mg/L PTX处理36h,细胞增殖开始受影响;同时,PTX加速细胞凋亡且与时间、药物浓度呈依赖性,流式检测细胞周期可明显得出细胞被阻滞于G2-M期。0.05mg/L PTX处理24h后,细胞形态发生明显改变,正常细胞呈梭形或不规则形,加药物组中,细胞数相对减少且形态趋于圆形;0.05mg/L PTX破坏视网膜屏障功能,药物处理后细胞跨上皮电阻显著降低且紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达较对照组显著降低(P<0.05)。Cleaved-caspase-3、Bax的表达量较对照组显著增加,Bcl-2的表达量较对照显著降低(P<0.05)。结论:PTX对ARPE-19细胞的增殖、凋亡,且依赖与时间及浓度;此外,PTX对ARPE-19细胞周期及形态均产生影响。同时PTX可破坏视网膜的屏障功能,提示抗肿瘤药物存在对视网膜潜在的毒性作用。 展开更多

关键词 紫杉醇 人视网膜色素上皮细胞 增殖 凋亡 周期 紧密连接

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止血化瘀利水方对缺氧诱导ARPE-19细胞VEGF及HIF-1α表达的影响 被引量：3

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作者 桑子瑾 吴文婷 +3 位作者 陈强 吴烈 张佳良 梁丽娜 《中国中医眼科杂志》 2020年第1期5-9,25,共6页

目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、... 目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、缺氧模型组、空白对照组、阳性对照组、中药组,以CCK-8法检测细胞增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白浓度,应用荧光定量PCR检测HIF-1α和VEGF的mRNA表达水平。结果 200μmol/LCoCl2对RPE细胞吸光度值(OD值)影响最大,设立为缺氧细胞模型浓度。与正常组比较,缺氧模型组细胞增殖活性增强,VEGF蛋白浓度增高,HIF-1α及VEGF的m RNA表达水平上调。与缺氧模型组比较,中药组、阳性对照组在24 h、48 h、72 h细胞VEGF蛋白均含量减少,差异均有统计学意义(中药组:t24 h=4.242,P24 h<0.001;t48 h=3.430,P48 h<0.001;t72 h=2.501,P72 h=0.006;阳性对照组:t24 h=2.897,P24 h=0.001;t48 h=2.308,P48 h=0.013;t72 h=4.748,P72 h<0.001),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中药组、阳性对照组在48 h细胞HIF-1αmRNA表达下调,与缺氧模型组比较,差异有统计学意义(中药组:t=15.358,P<0.001;阳性对照组:t=14.918,P<0.001),24 h、72 h差异无统计学意义(P>0.05)。中药组、阳性对照组在24 h、48 h细胞VEGF m RNA表达受到抑制,与缺氧模型组比较,差异均有统计学意义(中药组:t24 h=3.084,P24 h=0.003;t48 h=14.837,P48 h<0.001;阳性对照组:t24 h=3.437,P24 h=0.001;t48 h=13.554,P48 h<0.001)。结论缺氧损伤可诱导ARPE-19细胞增殖,VEGF蛋白表达量增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达水平上调;止血化瘀利水方对缺氧RPE细胞的增殖及VEGF蛋白、HIF-1α和VEGF mRNA的表达有抑制作用。与对照组复方血栓通胶囊比较,止血化瘀利水方对RPE细胞增殖的抑制作用更持久,在24 h、48 h控制VEGF蛋白表达水平更接近正常组;而二者在抑制VEGF和HIF-1αmRNA表达方面作用相似。 展开更多

关键词 止血化瘀利水方 缺氧诱导 人视网膜色素上皮细胞 血管内皮生长因子 缺氧诱导因子-1Α

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