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人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑替硝唑的跨膜转运 被引量:21
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作者 刘宇 刘洪臣 +2 位作者 吴霞 鄂玲玲 王东胜 《口腔颌面修复学杂志》 2007年第2期90-93,96,共5页
目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对甲硝唑和替硝唑的转运,为根管全身给药提供实验依据。方法:正畸拔除的前磨牙,组织块法作HPDLF原代培养。甲硝唑和替硝唑孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞一定时间... 目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对甲硝唑和替硝唑的转运,为根管全身给药提供实验依据。方法:正畸拔除的前磨牙,组织块法作HPDLF原代培养。甲硝唑和替硝唑孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞一定时间后,超声破碎细胞,高效液相色谱法测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果:(1)高效液相色谱法可以精确测量细胞内甲硝唑和替硝唑含量;(2)检测不到HPDLF胞内的甲硝唑,但是可以检测到MC3T3-E1细胞内的甲硝唑;(3)两种细胞胞内的替硝唑的含量存在差异,含量与细胞外液的药物浓度以及药物作用时间有关。结论:甲硝唑不存在人牙周膜成纤维细胞的跨细胞膜转运,但是替硝唑存在,转运与胞外药物浓度有关,甲硝唑与替硝唑的跨细胞膜转运存在细胞特异性。这种差异性为指导临床用药、特别是根管全身给药的筛选提供参考。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 甲硝唑 替硝唑 转运 高效液相色谱法
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骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞的生物学特性 被引量:8
2
作者 司晓辉 刘正 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第1期24-27,共4页
目的建立表达骨形成蛋白 2 (BMP2 )的人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs)并观察其生物学特性。方法利用脂质体将BMP2噬菌粒表达载体pBK -B2转染至HPDLFs,免疫组化ABC法检测BMP2基因的表达 ,并检测转染细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活力、骨钙素 (OC... 目的建立表达骨形成蛋白 2 (BMP2 )的人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs)并观察其生物学特性。方法利用脂质体将BMP2噬菌粒表达载体pBK -B2转染至HPDLFs,免疫组化ABC法检测BMP2基因的表达 ,并检测转染细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活力、骨钙素 (OC)含量和矿化能力。 结果转染BMP2基因后 ,HPDLFs内有BMP2蛋白的表达 ,ALP活力、OC含量和矿化结节数量均显著增加。 结论BMP2基因在HPDLFs中得到表达并促进其向成骨样细胞分化。 展开更多
关键词 骨形成蛋白 人牙周膜成纤维细胞 基因转染
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原代人牙周膜成纤维细胞的培养及培养方法的改进 被引量:8
3
作者 张明珠 雷雅燕 +2 位作者 刘晓 朱红 欧炯光 《昆明医学院学报》 2004年第1期53-56,共4页
目的 :探讨如何提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率 .方法 :组织来源于 11~ 15岁青少年因正畸而拔除的前磨牙 ,刮取牙根中 1/ 3的牙周膜组织 ,组织贴壁培养法进行培养 .采用冠根分离控制取材中的污染 ,首次传代前进行细胞分散的... 目的 :探讨如何提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率 .方法 :组织来源于 11~ 15岁青少年因正畸而拔除的前磨牙 ,刮取牙根中 1/ 3的牙周膜组织 ,组织贴壁培养法进行培养 .采用冠根分离控制取材中的污染 ,首次传代前进行细胞分散的方法来提高传代的成功率 ,并对培养细胞的形态及超微结构进行了观察 .结果 :经免疫组化染色证实所培养的细胞为牙周膜成纤维细胞 ,通过冠根分离法可有效的控制组织污染 ,首次传代前进行细胞分散可提高细胞传代成功率 ,从而使细胞培养成功率提高 .结论 :获得人牙周膜成纤维细胞 ,培养成功率在 15 %~ 2 0 % . 展开更多
关键词 牙周膜成纤维细胞 培养方法 组织培养法 原代培养
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茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响 被引量:14
4
作者 王珺 欧龙 +2 位作者 罗芸 谢潇 李华 《中华老年口腔医学杂志》 2015年第2期80-84,共5页
目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg... 目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 茶多酚 脂多糖 肿瘤坏死因子-α 白介素-6 细胞凋亡
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动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架变化 被引量:10
5
作者 朱庆党 巢永烈 +1 位作者 陈新民 杨艳丽 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期559-562,共4页
目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化。方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1000、2000、4000μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12h),... 目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化。方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1000、2000、4000μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12h),经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张、压应力后细胞形态变化,细胞骨架荧光染色强度测定分析细胞骨架F-actin表达量的变化。结果:加力后细胞骨架形态和微丝蛋白发生规律性变化;细胞F-actin荧光染色强度正常→下降→正常;细胞骨架对张、压应力作用的反应敏感程度无明显差异。结论:在一定的张、压应力范围内人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的形态结构具有一定的稳定性。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 张应力 压应力 细胞骨架
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Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用 被引量:10
6
作者 于鑫 王月秋 +3 位作者 李明恒 苏勤 许海平 邢路 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期325-328,共4页
目的观察在脂多糖(LPS)刺激下,人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响。方法选用100 ng.mL-1、1μg.mL-1、10μg.mL-1大肠杆菌LPS分别... 目的观察在脂多糖(LPS)刺激下,人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响。方法选用100 ng.mL-1、1μg.mL-1、10μg.mL-1大肠杆菌LPS分别刺激HPDLFs,刺激6、12、24、48 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HPDLFs表达RANKL的水平。分别运用不同滴度的anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,观察1μg.mL-1LPS刺激下,其RANKL表达水平的变化。结果 LPS刺激HPDLFs 6 h后,即可检测到RANKL的表达,24h达到顶峰,然后逐渐下降;各LPS质量浓度组的规律基本一致。分别用anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,在1μg.mL-1LPS刺激下,其产生RANKL的水平明显下降(P<0.05);3组中,RANKL的表达水平有明显差异(P<0.05),其中anti-TLR2+anti-TLR4抗体处理组RANKL表达量最少,anti-TLR4抗体处理组次之,anti-TLR2抗体处理组RANKL的表达量最高。结论 TLR2、TLR4均参与了LPS诱导HPDLFs表达RANKL的过程;与anti-TLR2抗体相比,anti-TLR4抗体能更有效地抑制LPS刺激后HPDLFs表达RANKL的能力。 展开更多
关键词 TOLL样受体 人牙周膜成纤维细胞 脂多糖 细胞核因子-κB受体活化因子配基
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TGF-β_1在应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用及其机制 被引量:9
7
作者 薛敏 于江波 +5 位作者 张月 袁晓 张广耘 贾萍萍 刘丽娟 孙仙蕊 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第7期1240-1243,1344,共5页
目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β(1TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响。方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加... 目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β(1TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响。方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加载系统,对细胞分别施加2、6、12与24 h的周期性张应力,以不加力组为对照组,观察各组细胞形态变化,利用细胞计数试剂8检测细胞增殖活性,并利用ELISA试剂盒检测加力后各组TGF-β1的表达,并对加力12 h组加入TGF-β1抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测对I型胶原基因表达的影响。结果:与对照组比较,加力2 h细胞增殖稍降低,6 h增殖活性增强,12 h达到峰值,24 h增殖活性明显受到抑制;TGF-β1的表达与细胞增殖成正相关;TGF-β1受到抑制后细胞增殖受到影响,I型胶原的表达也受到影响。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖在一定时间的周期性张应力作用下先增加然后再抑制,其中TGF-β1参与细胞增殖,并且TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞I型胶原的表达起促进作用。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 周期性张应力 TGF-β1 细胞增殖 I型胶原
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TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用 被引量:7
8
作者 司晓辉 刘正 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2002年第1期53-56,共4页
目的 研究转化生长因子 β(TGFβ)和重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP2 )对人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素 (OC)合成及矿化... 目的 研究转化生长因子 β(TGFβ)和重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP2 )对人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素 (OC)合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖 ,对ALP活性 ,OC合成和矿化结节形成无明显影响 ;rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用 ,却显著提高其ALP活性 ,刺激OC合成和矿化结节形成 ;两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间 ;先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响 ;先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。 结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型 ,TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用 。 展开更多
关键词 转化生长因子 重组人骨形成蛋白2 人牙周膜成纤维细胞 碱性磷酸酶 骨钙素 矿化
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机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响 被引量:5
9
作者 汤楚华 施生根 +1 位作者 牛忠英 党平 《口腔颌面修复学杂志》 2007年第2期87-89,共3页
目的:探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)蛋白表达的关系。方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实... 目的:探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)蛋白表达的关系。方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果:加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论:人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。 展开更多
关键词 机械压力 牙周膜 成纤维细胞 人牙周膜成纤维细胞 转化生长因子Β1
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人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性 被引量:7
10
作者 张云飞 段银钟 +2 位作者 冯雪 刘源 赵宇 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第2期68-71,共4页
目的 :探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性。方法 :用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长和增殖变化。结果 :人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液条件下可以生长和增殖 ,但与含血清培养液相... 目的 :探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性。方法 :用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长和增殖变化。结果 :人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液条件下可以生长和增殖 ,但与含血清培养液相比 ,其增殖速率变缓 ,分化明显。结论 :无血清培养液可应用于人牙周膜成纤维细胞的体外培养和实验研究中。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 无血清培养液 体外培养 细胞增殖
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AGEs对牙周膜成纤维细胞炎症因子、Cx43及血管生成的影响 被引量:3
11
作者 钟智红 余何 +1 位作者 房莹 朱金娟 《临床口腔医学杂志》 2023年第2期77-82,共6页
目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人原代牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)炎症因子、缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)及血管生成的影响,明确AGEs参与牙周炎病程... 目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人原代牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)炎症因子、缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)及血管生成的影响,明确AGEs参与牙周炎病程的机制。方法:组织块接种法培养hPDLFs并用波形蛋白鉴定;CCK8法检测AGEs对hPDLFs活力的影响并筛选合适浓度进行后续实验;细胞分为空白组、高糖培养基组、空白组+AGEs组(10μg/mL)、高糖培养基+AGEs组(10μg/mL),AGEs干预24 h;酶联免疫试剂盒(ELISA)检测各组上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量。免疫荧光或蛋白质印迹法检测hPDLFs晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、Cx43、核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、血管内皮生长因子受体(receptor of vascular endothelial growth factor,VEGFR)蛋白表达量;检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)VEGF、VEGFR蛋白表达量。划痕实验、Transwell实验及小管形成实验检测各组条件培养基对HUVEC血管形成能力的影响。结果:组织块接种法能够培养hPDLFs,AGEs在10μg/mL时对hPDLFs活力无明显影响;与空白对照组相比,AGEs显著提高了hPDLFs中VEGF、IL-1β、TNF-α含量(P<0.05),RAGE、p-NF-κB蛋白表达量(P<0.05),降低了Cx43蛋白表达(P<0.05),其条件培养基显著提高HUVEC的血管形成能力(P<0.05),提高HUVEC中VEGF、VEGFR蛋白表达(P<0.05);与AGEs组相比,高糖+AGEs显著增强了AGEs促炎、促血管生成作用及对Cx43的抑制作用。结论:AGEs能够促进体外培养的hPDLFs细胞RGAE表达及炎症因子分泌,并间接促进血管形成,抑制Cx43表达;高糖环境能够增强AGEs的促炎、促血管生成作用及对Cx43的抑制作用。 展开更多
关键词 晚期糖基化终产物 牙周膜成纤维细胞 炎症 缝隙连接蛋白43 血管生成
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骨膜素通过p38 MAPK信号通路抑制缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞的氧化应激和细胞凋亡 被引量:7
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作者 刘惠莉 王一丹 +3 位作者 岳阳丽 张朋 孙亚丽 陈巧华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期942-948,共7页
目的探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度(25、50、100 ng/mL)的骨膜素处理细胞,随机分为空白组、缺氧组、骨膜... 目的探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度(25、50、100 ng/mL)的骨膜素处理细胞,随机分为空白组、缺氧组、骨膜素低浓度组、骨膜素中浓度组、骨膜素高浓度组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;应用荧光酶标仪检测细胞活性氧(ROS)水平;ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HIF-1α、P21、CyclinD1、Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2、P38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果缺氧处理后可明显降低细胞存活率(P<0.05),提高P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平(P<0.05);与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。与空白组相比,缺氧组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05)。结论骨膜素可促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡,增强细胞抗氧化能力,减轻炎症损伤,其可能通过抑制p38 MAPK信号通路的活化而发挥作用。 展开更多
关键词 骨膜素 人牙周膜成纤维细胞 缺氧 凋亡 p38 MAPK信号通路 氧化应激
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TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用 被引量:2
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作者 朱嘉皓 芦婷 钟良军 《口腔疾病防治》 2023年第2期94-103,共10页
目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fi... 目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。 展开更多
关键词 转化生长因子⁃β1 牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖 转录因子叉头盒p3 白细胞介素6 IL⁃35亚基 EB病毒诱导基因3 牙周炎 人牙周膜成纤维细胞 细胞周期 免疫治疗
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康复新治疗牙周炎的机制研究
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作者 汤雁利 龚斌 +1 位作者 沈涛 李启艳 《现代医药卫生》 2024年第7期1098-1104,共7页
目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤... 目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)、人牙龈上皮细胞(hGECs)、人单核巨噬细胞(THP-1)和小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)活性的影响;(2)通过细菌脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症模型,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测康复新对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、一氧化氮合酶(NOS)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平的影响。结果(1)与对照组比较:0.1000、0.0500、0.0250、0.0125 mg/mL的康复新组在24 h和48 h时间点均可刺激hPDLFs、THP-1和MC3T3-E1增殖(P<0.01),且促增殖作用具有浓度依赖性;(2)在炎症细胞模型中,与对照组比较,0.0500 mg/mL和0.0125 mg/mL的康复新组IL-1β和IL-10 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),NOS和MMP-13 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论康复新在一定浓度范围内能促进hPDLFs、hGECs、THP-1和MC3T3-E1增殖;康复新可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎机制可能是降低NOS和MMP-13 mRNA表达水平。康复新可能是通过促进牙周组织再生和抗感染治疗牙周炎。 展开更多
关键词 康复新 细胞增殖 抗炎 细胞炎症模型 人牙周膜成纤维细胞
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IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 张兰 孙琳琳 +1 位作者 丁岩 宋健玲 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期440-444,457,共6页
目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定... 目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01~10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01~100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 白细胞介素-1Β 骨保护素 核因子κB受体活化剂配体
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超声微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙周膜成纤维细胞的实验研究 被引量:5
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作者 张云燕 李有强 +3 位作者 骆书美 钟晓波 王六 王志刚 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2009年第5期745-748,共4页
目的探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下,介导质粒pEGFP-N1转染人牙周膜成纤维细胞(HP-DLFs)的效率及安全性。方法体外原代培养HPDLFs,以EGFP基因为报告基因,脂质微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HPDLFs。实... 目的探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下,介导质粒pEGFP-N1转染人牙周膜成纤维细胞(HP-DLFs)的效率及安全性。方法体外原代培养HPDLFs,以EGFP基因为报告基因,脂质微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HPDLFs。实验组超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成不同亚组,对照组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组和脂质体+质粒组。转染48h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP表达。同时用MTT法检测HPDLFs的活力。结果超声微泡介导的质粒对HPDLFs的转染效率与脂质体介导的质粒转染效率相似,明显高于其他对照组。超声+微泡+质粒组中HPDLFs的活力明显高于脂质体+质粒组。结论在一定条件下,超声微泡能安全、有效地介导外源基因的转染与表达。 展开更多
关键词 超声检查 微泡 人牙周膜成纤维细胞 基因转染
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低能量激光对机械压力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化作用的研究
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作者 柳强 刘亚辉 +1 位作者 李利坤 郭建茹 《中国激光医学杂志》 CAS 2024年第4期181-186,237,238,共8页
目的探究低能量激光(low-level laser,LLL)对机械压力作用下人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化的作用。方法研究对象为体外培养hPDLFs,将细胞分为空白组、模型组和干预组,其中空白组细胞不给... 目的探究低能量激光(low-level laser,LLL)对机械压力作用下人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化的作用。方法研究对象为体外培养hPDLFs,将细胞分为空白组、模型组和干预组,其中空白组细胞不给予机械压力或LLL干预;模型组细胞给予2 g/cm^(2)的机械静压力干预;干预组细胞给予机械压力后再行LLL干预。LLL激光照射波长为810 nm,光纤直径400μm,频率2.46 Hz,功率100 mW,光斑面积9.6 cm^(2),功率密度10 mW/cm^(2),能量密度值为3.75 J/cm^(2),干预24 h后,qPCR检测细胞成骨基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的mRNA水平,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及茜素红(alizarin red,ARS)染色检测细胞成骨分化情况,Western blotting检测细胞BMP2蛋白及Smad1/5/9蛋白磷酸化水平。结果分离培养的hPDLFs表达波形丝蛋白及细胞角蛋白,符合hPDLFs特征。模型组和干预组细胞Runx2、OCN、BMP2的mRNA水平、ALP及ARS染色面积、BMP2蛋白及Smad1/5/9蛋白磷酸化水平显著高于空白组(P<0.05)。此外,干预组上述指标水平均显著高于模型组(P<0.05)。进一步对干预组细胞给予BMP/smad通路抑制剂LDN-193189处理,发现LDN-193189干预显著减少了细胞ALP及ARS染色面积(P<0.05)。结论LLL能够通过BMP2/Smad1/5/9通路促进机械压力作用下hPDLFs成骨分化。 展开更多
关键词 低能量激光 机械压力 牙周膜成纤维细胞 成骨分化
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槲皮素通过JAK/STAT信号通路预防吸烟牙周炎患者牙周病变的初步研究
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作者 沈益名 齐霞 +1 位作者 冯钰皓 杨冬茹 《现代口腔医学杂志》 CAS 2024年第2期100-107,共8页
目的通过建立牙周炎及伴吸烟牙周炎体外模型,探究在炎症环境下槲皮素对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)的迁移能力、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)和Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COLⅢ)分泌能力以及炎症因子... 目的通过建立牙周炎及伴吸烟牙周炎体外模型,探究在炎症环境下槲皮素对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)的迁移能力、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)和Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COLⅢ)分泌能力以及炎症因子白介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、环氧化物酶(cyclooxygenase,COX)-2 mRNA表达水平的影响。并探究槲皮素对JAK/STAT信号通路的影响。方法原代培养并鉴定HPLFs,使用香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立炎症及炎症伴吸烟模型,将细胞分为8组:正常组(N)、CSE组(S)、脂多糖组(L)、脂多糖+JAK/STAT阻断剂组(L+AG490)、脂多糖+CSE组(L+S)、脂多糖+CSE+JAK/STAT阻断剂组(L+S+AG490)、脂多糖+槲皮素组(L+Q)、脂多糖+CSE+槲皮素组(L+S+Q)。通过划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA检测细胞胶原分泌能力,RT-PCR检测炎症因子表达水平,免疫荧光染色检测细胞p-STAT3的表达情况。结果与N组相比,L、S、L+S组细胞迁移能力和胶原分泌能力降低(P<0.05),炎症因子表达水平和p-STAT3表达量上升(P<0.05);与L组相比,L+AG490组和L+Q组的细胞迁移能力和胶原分泌能力提高(P<0.05),炎症因子表达水平和p-STAT3表达量降低(P<0.05);与L+S组相比,L+S+AG490组和L+S+Q组的细胞迁移能力和胶原分泌能力提高(P<0.05),炎症因子表达水平和p-STAT3表达量降低(P<0.05)。结论香烟烟雾提取物和脂多糖可抑制HPLFs的迁移能力,诱导炎症因子表达,抑制胶原分泌,促进p-STAT3的表达,而AG490和槲皮素对HPLFs起到保护作用,抑制p-STAT3的表达,依据本实验结果,认为槲皮素可能通过抑制JAK/STAT通路对HPLFs起到保护作用。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 JAK/STAT信号通路 香烟烟雾提取物 槲皮素 牙周炎
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沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响 被引量:2
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作者 芦婷 朱嘉皓 +2 位作者 杨仕鹤 沈喆 钟良军 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期269-275,共7页
目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(W... 目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)来源脂多糖(LPS)模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8的表达。结果siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA表达,t=21.03,P<0.0001;蛋白表达,t=12.8,P<0.001)。在炎症环境下,Foxp3基因沉默对hPDLFs的增殖无显著影响(P>0.05);Foxp3基因沉默促进hPDLFs的迁移,IL-6、IL-8的表达升高(P<0.05)。结论在炎症环境下,Foxp3基因沉默可促进hPDLFs迁移和炎症因子表达升高,但对hPDLFs的增殖无明显影响。Foxp3基因在牙周炎中具有抑制炎症的作用。 展开更多
关键词 牙周膜成纤维细胞 FOXP3 脂多糖 小干扰RNA 牙周炎
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糖基化终产物对牙周膜成纤维细胞增殖的影响 被引量:3
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作者 王万春 吴宁 +1 位作者 尚振平 陈青 《临床口腔医学杂志》 2008年第9期526-528,共3页
目的:探讨糖基化终产物在糖尿病牙周病形成中的作用。方法:原代培养牙周膜成纤维细胞,将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与牙周膜成纤维细胞在体外共同培养,MTT法测定细胞增殖,用碱性磷酸酶测定法测定ALP。结果:糖... 目的:探讨糖基化终产物在糖尿病牙周病形成中的作用。方法:原代培养牙周膜成纤维细胞,将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与牙周膜成纤维细胞在体外共同培养,MTT法测定细胞增殖,用碱性磷酸酶测定法测定ALP。结果:糖基化终产物修饰的人血清白蛋白能以浓度依赖的方式抑制牙周膜细胞的增殖(p<0.05),而未修饰人血清白蛋白可使细胞增殖,但两种白蛋白均不诱导ALP的表达。结论:糖基化终产物可通过抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低糖尿病病人牙周组织对损伤的修复能力,导致牙周病。 展开更多
关键词 糖基化终产物 人牙周膜成纤维细胞 人血浆蛋白
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