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人p16基因的重组腺病毒构建及鉴定
1
作者 田文标 陈丽芬 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第22期2213-2215,共3页
目的构建含有人p16基因的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定。方法用基因工程技术将人p16基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞,并在其中包... 目的构建含有人p16基因的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定。方法用基因工程技术将人p16基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞,并在其中包装扩增病毒。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果酶切鉴定及PCR结果证明p16基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达6.1×1010pfu/m l,对人成纤维细胞有较强感染能力。结论应用细菌内同源重组方法成功构建了含人p16基因的重组腺病毒载体。 展开更多
关键词 腺病毒 p16基因 同源重组
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人原发性肝癌中p16基因表达及CpG岛甲基化状态的研究 被引量：9
2
作者 刘建余 覃扬 +2 位作者 李波 孙芝琳 孙泽芳 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期540-543,共4页
目的　进一步探讨人原发性肝癌中 p16基因 m RNA转录水平变化与其基因启动子区 Cp G岛甲基化的关系 ,及其在肝癌发生中的意义。方法　采用狭缝印迹杂交检测 2 0例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及 2例正常人肝组织中 p16基因 m RN... 目的　进一步探讨人原发性肝癌中 p16基因 m RNA转录水平变化与其基因启动子区 Cp G岛甲基化的关系 ,及其在肝癌发生中的意义。方法　采用狭缝印迹杂交检测 2 0例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及 2例正常人肝组织中 p16基因 m RNA表达水平 ,以甲基化特异性 PCR分析各组织中 p16基因启动子区 Cp G岛的甲基化状况 ,并进行统计分析。结果　 2 0例人原发性肝癌中 14例 (70 % ) p16 m RNA水平比远癌组织显著降低 ;13例 (6 5 % )显示 p16基因启动子区 Cp G岛甲基化 ,其中 84 .6 % (11例 )伴 p16 m RNA转录水平降低。结论　人原发性肝癌中存在高频率的 p16基因表达失活 ,其主要机制可能是启动子区 Cp G岛甲基化抑制了基因的转录 ,在人原发性肝癌的发生发展中有重要作用。其临床诊断和治疗意义有待进一步深入研究。 展开更多
关键词 人肝细胞癌 p16基因 mRNA CpG岛 甲基化
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