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题名人输卵管蛋白全长cDNA克隆及真核细胞中的表达
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作者
罗金平
潘勇
颜桂军
顾正
左嘉客
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机构
复旦大学上海医学院
计划生育药具国家重点实验室上海市计划生育科学研究所
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出处
《生殖与避孕》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期259-265,共7页
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基金
国家重点基础研究发展基金(G1999055902)
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文摘
目的:克隆人输卵管蛋白(hOviductin)全长cDNA序列,真核细胞中表达,并了解hOviductin是否与大鼠卵母细胞结合。方法:构建人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库,以^(32)P标记的兔输卵管蛋白全长cDNA序列为探针,自文库中筛选hOviductin全长cDNA序列。将获得的hOviductin编码区cDNA序列插入pEGFP-N1真核表达载体,转染HeLa细胞,表达分泌重组的绿色荧光蛋白(EGFP)-hOviductin,并估量其浓度。激光扫描共聚焦显微镜下观察EGFP-hOviductin与大鼠卵巢的卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)或去除透明带后的裸卵的结合情况。结果:所构建的cDNA文库重组率为98.5％,滴度为1.1×10~6pfu/mL。克隆所得hOviductin全长cDNA约为2500 bp,Gen-Bank的登录号为AY189737。EGFP-hOviductin在条件培液中的浓度为0.236 nmol/L,能结合在去透明带的大鼠裸卵质膜外表面,而未见其与COC结合。结论:hOviductin能在HeLa细胞中表达分泌,其分泌产物可结合于大鼠裸卵质膜外表面。
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关键词
人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库
人输卵管蛋白
克隆
表达
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Keywords
human oviduct mucosa epithelial cells eDNA library
human oviductin
cloning
expression
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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