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稳定表达hMATE1及共表达hMATE1与hOCT1或hOCT2细胞模型的构建 被引量：1
1
作者 雷红梅 孙思源 +4 位作者 李丽萍 涂美娟 周慧 曾苏 蒋惠娣 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期842-847,共6页
为构建稳定表达人多药及毒素外排转运体1(h MATE1)的转基因细胞模型,提取人肾总m RNA,经逆转录PCR获得h MATE1 c DNA,借助HindⅢ、KpnⅠ两个酶切位点与pc DNA3.1(+)重组获得重组质粒。将pc DNA3.1(+)-h MATE1重组质粒转染至MDCK、MDCK-h... 为构建稳定表达人多药及毒素外排转运体1(h MATE1)的转基因细胞模型,提取人肾总m RNA,经逆转录PCR获得h MATE1 c DNA,借助HindⅢ、KpnⅠ两个酶切位点与pc DNA3.1(+)重组获得重组质粒。将pc DNA3.1(+)-h MATE1重组质粒转染至MDCK、MDCK-h OCT1和MDCK-h OCT2细胞中,经潮霉素B抗性筛选后,以4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的积聚实验筛选获得具有良好h MATE1功能的单克隆。测定筛选获得的细胞中转运体m RNA的表达量,并表征其对二甲双胍的积聚或对西咪替丁的转运能力。结果表明,本研究构建的MDCK-h MATE1、MDCK-h OCT1/h MATE1、MDCK-h OCT2/h MATE1细胞模型均高表达h MATE1 m RNA,MDCK-h MATE1细胞对二甲双胍的积聚为转染空载体细胞的17.6倍;MDCK-h OCT1/h MATE1和MDCK-h OCT2/h MATE1细胞对西咪替丁的净外排率分别为17.5和3.65。因此,本研究成功构建了稳定表达h MATE1及共表达h MATE1与h OCT1或h OCT2的细胞模型,可用于h MATE1及其与h OCT1或h OCT2共同参与的药物转运或药物-药物相互作用的体外研究。 展开更多
关键词 细胞模型 人多药及毒素外排转运体1 人有机阳离子转运体1 人有机阳离子转运体2 共表达
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稳定表达人OCTN1/OCTN2的细胞模型构建及应用 被引量：2
2
作者 翁娅韵 金李莎 +5 位作者 汪宇清 宋飞凤 李丽萍 周慧 曾苏 蒋惠娣 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期931-937,共7页
人肉碱/有机阳离子转运体1和2(human carnitine/organic cation transporters,hOCTN1/hOCTN2)参与多种内、外源物质转运。本研究拟构建稳定表达hOCTN1/2的细胞模型,用于药物与转运体相互作用的研究。将重组质粒pcDNA3.1(+)-hOCTN1/2转染... 人肉碱/有机阳离子转运体1和2(human carnitine/organic cation transporters,hOCTN1/hOCTN2)参与多种内、外源物质转运。本研究拟构建稳定表达hOCTN1/2的细胞模型,用于药物与转运体相互作用的研究。将重组质粒pcDNA3.1(+)-hOCTN1/2转染MDCK细胞,经G418抗性筛选挑取单克隆细胞株,以麦角硫因(OCTN1经典底物)或米屈肼(OCTN2经典底物)进行细胞积聚研究,挑选功能最优的MDCK-hOCTN1/2细胞株为模型细胞。进一步考察经典底物的积聚动力学,并探究内源物、生物碱、黄酮及普利类药物对hOCTN1/2的抑制作用。结果显示,麦角硫因在MDCK-hOCTN1细胞上的积聚量为mock细胞的122倍,K_m和V_(max)为8.19±0.61μmol·L^(-1)和1 427±49 pmol·mg^(-1)(protein)·min^(-1);米屈肼在MDCK-hOCTN2细胞上的积聚量为阴性对照(mock细胞)的108倍,K_m和V_(max)为52.3±4.3μmol·L^(-1)和2 454±64 pmol·mg^(-1)(protein)·min^(-1)。多巴胺、谷氨酰胺、胡椒碱、黄连素、荷叶碱、赖诺普利和福辛普利对hOCTN1/2有显著的抑制作用。因此,本研究构建的MDCK-hOCTN1/2细胞模型可应用于药物与hOCTN1/hOCTN2相互作用研究。 展开更多
关键词 人肉碱/有机阳离子转运体1和2 麦角硫因 米屈肼 抑制作用 犬肾上皮细胞
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