2,2’,4,4’-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响 被引量：9

1

作者 何平 何卫红 +3 位作者 王爱国 张明 夏涛 陈学敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期266-268,共3页

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/m... 目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/mlPBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况。结果与对照组相比,1μg/ml和2μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P<0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P<0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P<0.05)、尾矩显著上升(P<0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P<0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P<0.05)、SOD活力明显低于对照组(P<0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P<0.05)。结论PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤中起重要作用。 展开更多

关键词 2 2’4 4’-四溴联苯醚 神经母细胞瘤细胞株 氧化应激 DNA损伤

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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 被引量：8

2

作者 何卫红 徐八一 +4 位作者 徐志霞 夏涛 何平 高萍 王爱国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期381-384,共4页

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-... 目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。 展开更多

关键词 氟化物 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞株 细胞凋亡 CASPASE-3 CASPASE-8

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SARS-CoV-2刺突糖蛋白对神经细胞的损伤效应及机制

3

作者 王娇 李佳佳 +3 位作者 肖文一 韦冬晖 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期375-383,共9页

目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳... 目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;EdU试剂盒检测细胞增殖;荧光素酶发光法检测细胞内ATP含量;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位(MMP);Seahorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平。结果与细胞对照组相比,S蛋白25,50,75和100 mg·L^(-1)组细胞活力显著降低(P<0.01),半数抑制浓度(IC_(50))为65.05 mg·L^(-1);LDH释放率显著增加(P<0.01);EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.01);S蛋白75和100 mg·L^(-1)组细胞内ATP含量显著降低(P<0.01);S蛋白50和75 mg·L^(-1)组细胞内MMP显著降低(P<0.05,P<0.01);S蛋白50 mg·L^(-1)组基础糖酵解水平和糖酵解能力的最大值显著升高(P<0.05,P<0.01),S蛋白25和50 mg·L^(-1)组呼吸能力最大值显著升高(P<0.05,P<0.01)。SH-SY5Y细胞活力与细胞内ATP含量和MMP均呈正相关(r^(2)=0.9209,P=0.001;r^(2)=0.6170,P=0.0025);与反映细胞糖酵解水平的细胞基础糖酵解水平和糖酵解能力最大值呈负相关(r^(2)=0.5194,P=0.0285;r^(2)=0.6664,P=0.0073),与反映线粒体氧化磷酸化水平的ATP生成能力呈负相关(r^(2)=0.8204,P=0.0008)。结论S蛋白使SH-SY5Y细胞活力下降,抑制细胞增殖,其机制可能与干扰神经细胞内能量代谢密切相关。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 刺突糖蛋白 人神经母细胞瘤细胞 神经损伤 糖酵解 能量代谢

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虎杖苷通过调控Keap1/Nrf2/HO⁃1抑制H_(2)O_(2)诱导的SH⁃SY5Y细胞氧化应激和线粒体损伤 被引量：1

4

作者 朱萍 李嘉旗 +3 位作者 尹萌辰 王睿瑞 刘保成 任光为 《上海中医药大学学报》 CAS 2023年第4期28-35,共8页

目的:探讨虎杖苷(PD)对由过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的影响及其作用机制。方法:采用SH-SY5Y细胞进行实验,细胞用不同浓度的H2O2处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力,以确定H2O2的诱导浓... 目的:探讨虎杖苷(PD)对由过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的影响及其作用机制。方法:采用SH-SY5Y细胞进行实验,细胞用不同浓度的H2O2处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力,以确定H2O2的诱导浓度。PD预处理细胞2 h后,加入H2O2诱导22 h,CCK-8法检测细胞活力,以确定PD的浓度。将细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、H2O2组、H2O2+PD 20μmol/L组和H2O2+PD 40μmol/L组。膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测细胞凋亡,流式细胞术测定细胞内总活性氧(ROS),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,JC-1线粒体荧光探针检测线粒体膜电位,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切的多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved-PARP)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的含量。结果:①CCK-8实验结果显示,400μmol/L浓度H_(2)O_(2)处理后,SH-SY5Y细胞活力为60%,故选择400μmol/L H_(2)O_(2)作为后续SH-SY5Y细胞的刺激条件;20、40、50、80μmol/L PD可显著抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞活力下降(P<0.05)。②Annexin V-FITC/PI凋亡实验结果显示,20、40μmol/L PD能够抑制H_(2)O_(2) 诱导的SH-SY5Y细胞凋亡(P<0.05)。Western blot结果显示,20、40μmol/L PD能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞中凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达(P<0.05),并促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。③20、40μmol/L PD能减少H_(2)O_(2) 诱导的SH-SY5Y细胞中ROS、MDA的含量(P<0.05),以及增加GSH、SOD含量(P<0.05)。④JC-1线粒体膜电位检测结果表明,20、40μmol/L PD能够缓解H_(2)O_(2) 诱导的SH-SY5Y细胞线粒体损伤。⑤Western blot结果显示,20、40μmol/L PD能够显著抑制H_(2)O_(2) 诱导的SH-SY5Y细胞中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白水� 展开更多

关键词 虎杖苷 人神经母细胞瘤细胞 氧化应激 线粒体损伤 过氧化物 Keap1/Nrf2/HO-1信号通路

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唑尼沙胺对创伤性脑损伤糖氧剥夺细胞模型的保护作用及机制研究 被引量：1

5

作者 滕陈怀 吴芳芳 +4 位作者 张开睿 张仁侃 徐绩 卢磊磊 陈大庆 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期912-918,共7页

目的探讨唑尼沙胺(zonisamide,ZNS)对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)细胞模型的保护作用及其机制。方法体外培养人神经母细胞瘤(human neuroblastoma cells,SH-SY5Y)细胞,按随机数... 目的探讨唑尼沙胺(zonisamide,ZNS)对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)细胞模型的保护作用及其机制。方法体外培养人神经母细胞瘤(human neuroblastoma cells,SH-SY5Y)细胞,按随机数字表法分为对照组(Control组)、糖氧剥夺组(OGD组)和给药组(OGD+ZNS组)。采用糖氧剥夺法建立创伤性脑损伤细胞模型。造模后,检测细胞活性;检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放情况;β-半乳糖苷酶试剂盒对细胞染色,观察细胞衰老情况;线粒体红色荧光探针(Mito Tracker Red)、JC-1线粒体膜电位试剂盒对线粒体染色,观察线粒体形态及膜电位变化;检测细胞ATP浓度;从SH-SY5Y细胞中提取蛋白,用蛋白质印迹法(Western blot)法检测内质网应激相关指标:葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78),增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP-homologous protein antibody,CHOP)、蛋白二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)以及内参β-肌动蛋白(β-actin)的表达变化。结果OGD组细胞存活率较Control组明显减少(P<0.01),OGD+ZNS组细胞存活率较OGD组明显增加(P<0.01);OGD组LDH释放率较Control组明显增加(P<0.01),OGD+ZNS组LDH释放率较OGD组明显减少(P<0.01)。细胞染色结果显示,与Control组和OGD+ZNS组相比,OGD组细胞明显受损衰老严重,染色更深。线粒体染色结果显示,与Control组和OGD+ZNS组相比,OGD组线粒体线性连接明显减少,线粒体活性明显下降。与Control组和OGD+ZNS组相比,OGD组细胞线粒体染色红色荧光明显减弱,绿色荧光明显增强,线粒体膜电位明显下降;OGD组ATP浓度较Control组明显下降(P<0.01),OGD+ZNS组ATP浓度较OGD组明显上升(P<0.01)。Western blot结果显示OGD组GRP78、CHOP、PDI表达较Control组明显增加(P均<0.05),OGD+ZNS组GRP78、CHOP、PDI较OGD组明显下降(P均<0.05)。结论唑尼沙胺可以通过保护线粒体活性以及抑制内质网应激保护创伤性脑损伤糖氧剥夺细� 展开更多

关键词 唑尼沙胺 创伤性脑损伤 糖氧剥夺 人神经母细胞瘤细胞 线粒体 内质网应激

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脑红蛋白在氧糖剥夺-复氧复糖诱导人神经母细胞瘤细胞线粒体膜电位去极化及活性氧生成中的作用 被引量：5

6

作者 邓松筠 艾宇航 +6 位作者 张丽娜 吴龙 陈采霞 王译民 刘志勇 黄立 彭倩宜 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期44-48,共5页

目的探讨脑红蛋白（NGB）在氧糖剥夺-复氧复糖诱导的人神经母细胞瘤细胞线粒体膜电位去极化及活性氧生成中的作用。方法在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中，使用慢病毒干扰NGB表达，建立NGB表达敲减及相应的空载病毒稳转株。细胞行... 目的探讨脑红蛋白（NGB）在氧糖剥夺-复氧复糖诱导的人神经母细胞瘤细胞线粒体膜电位去极化及活性氧生成中的作用。方法在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中，使用慢病毒干扰NGB表达，建立NGB表达敲减及相应的空载病毒稳转株。细胞行氧糖剥夺-复氧复糖处理。荧光实时定量PCR检测人神经母细胞瘤细胞NGBmRNA表达水平，免疫印迹检测人神经母细胞瘤细胞NGB蛋白表达水平。线粒体膜电位特异性染料JC-1染色，观察线粒体膜电位变化。DCFH-DA染色，检测细胞内总活性氧水平。检测人神经母细胞瘤细胞释放乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果氧糖剥夺-复氧复糖后，NGB mRNA及蛋白水平升高，分别于4h和8h达高峰（2．04±0．35，1．69±0．18）。NGB转染干扰NGB慢病毒较转染空载病毒线粒体膜电位去极化水平降低[荧光比值（JC-1红色／绿色比值）1．10±0．10比1．46±0．11，P〈0．05]，总活性氧产生增多[（36．30±5．32）荧光强度／细胞比（16．26±2．97）荧光强度／细胞，P〈0．05]，且LDH释放增多[（63．42±6．14）％比（49．65±5．09）％，P〈0．05]。结论NGB对维持线粒体稳态起重要作用。干扰NGB表达可导致细胞在缺血缺氧状况下线粒体损伤加重，活性氧释放增多，细胞损伤加重。 展开更多

关键词 脑红蛋白 膜电位 线粒体 活性氧 乳酸脱氢酶类 人神经母细胞瘤细胞 氧糖剥夺

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CXCL10基因对SH-SY5Y细胞氧化损伤、钙稳态及Nrf2/BNIP3的影响

7

作者 刘琳 马倩 +1 位作者 万光宇 田玲 《解剖学研究》 CAS 2023年第6期511-517,522,共8页

目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、... 目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、模型组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞)、NC-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染NC-siRNA)及CXCL10-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10-siRNA),peDNA3.1.D组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染空载体)及CXCLl0/peDNA3.1组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10/peDNA3.1)。采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞CXCL10 mRNA、MTT检测各组细胞活性、相关试剂盒检测氧化应激指标、流式细胞仪检测各组细胞Ca2+荧光强度和免疫印迹检测各组细胞Nrf2、BNIP3表达。结果 对照组、模型组、NC-siRNA组、CXCL10-siRNA组、peDNA3.1.D组和CXCLl0/peDNA3.1组中CXCL10 mRNA水平分别为1.02±0.08、1.44±0.14、1.40±0.17、0.73±0.05、1.49±0.18和2.20±0.16,差异有统计学意义(F=77.400,P<0.05);与对照组相比,模型组细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、Nrf2、BNIP3降低,丙二醛(MDA)、Ca2+荧光强度升高(P<0.05);模型组、NC-siRNA组、peDNA3.1.D组上述指标比较无意义(P>0.05),与模型组相比,CXCL10-siRNA组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3升高(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升降低(P<0.05),CXCL10/peDNA3.1组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3降低(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升高(P<0.05)。结论 下调CX-CL10基因可提高H2O2损伤后SH-SY5Y细胞活性,并可抗氧化应激,降低细胞内游离Ca2+水平,这可能与激活Nrf2/BNIP3信号通路相关。 展开更多

关键词 帕金森病 人神经母细胞瘤细胞 CXC趋化因子配体10 氧化损伤 钙稳态失衡

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Fer-1和DFO对Erastin诱导人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用

8

作者 郭璨璨 李朝菲 +3 位作者 夏双爽 任学科 吕懿 郑金平 《毒理学杂志》 CAS 2023年第1期1-5,11,共6页

目的 研究Erastin对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤作用及Ferrostatin-1(Fer-1)和Deferoxamine(DFO)对细胞损伤的保护效果,为Fer-1和DFO应用于神经退行性疾病提供依据。方法 将SH-SY5Y细胞分为溶剂对照组(DMSO)、Erastin组(10μmol... 目的 研究Erastin对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤作用及Ferrostatin-1(Fer-1)和Deferoxamine(DFO)对细胞损伤的保护效果,为Fer-1和DFO应用于神经退行性疾病提供依据。方法 将SH-SY5Y细胞分为溶剂对照组(DMSO)、Erastin组(10μmol/L)、Fer-1组(10μmol/L)、DFO组(100μmol/L)、Erastin+Fer-1组(10μmol/L Erastin+10μmol/L Fer-1)和Erastin+DFO组(10μmol/L Erastin+100μmol/L DFO),染毒24 h。CCK-8法检测细胞活力;显微镜观察细胞形态结构;透射电子显微镜观察细胞线粒体结构变化;流式细胞仪检测细胞脂质ROS水平;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、细胞铁含量;Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、人胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7a11)和突触素(SYN)蛋白表达。结果 Erastin暴露可导致细胞存活率降低至73.19%±3.51%,明显低于对照组100%±0.00%(P<0.01);细胞形态不规则,突触减少,SYN蛋白表达明显降低(P<0.01);细胞线粒体明显皱缩,膜增厚,线粒体嵴减少。与对照组相比,Erastin暴露组细胞GSH含量、GSH-Px的活力、SOD的活力明显降低(P<0.01),脂质ROS含量、MDA含量、细胞内铁离子水平明显升高(P<0.01),GPX4、SLC7a11蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与Erastin暴露组相比,Erastin+Fer-1组、Erastin+DFO组细胞的存活率明显提高(P<0.01),不规则形态和突触缺失的细胞数目减少,SYN蛋白表达水平明显增加(P<0.01);异常形态线粒体数量减少,线粒体形态结构趋于正常,脂质活性氧(ROS)、MDA和细胞铁离子水平明显下降(P<0.01),GSH含量、GSH-Px和SOD活力明显提升(P<0.01),GPX4、SLC7a11蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。结论 Erastin可以诱导SH-SY5Y细胞损伤及铁死亡;Fer-1和DFO通过抑制细胞铁死亡而起到细胞保护作用。 展开更多

关键词 Erastin 人神经母细胞瘤细胞 铁死亡 突触 保护作用

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富硒蛹虫草子实体多肽对SH-SY5Y细胞及脑缺血/再灌注损伤大鼠保护作用的机制研究

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作者 陈克成 郑毅男 +1 位作者 杨力 李庆杰 《中国现代中药》 CAS 2023年第10期2128-2134,共7页

目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下... 目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下对细胞增殖的影响,以观察SECM对SH-SY5Y细胞的保护修复作用;使用改进的推注线技术制备大鼠I/R损伤模型,24 h后进行神经功能评分,检测各组大鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性,核转录因子(NF)-κB、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平。结果:过氧化氢和冈田酸对SH-SY5Y细胞的IC50分别为420、35 nmol·L^(-1),而SECM在IC50过氧化氢和冈田酸作用下对SH-SY5Y细胞具有很好的保护和修复作用;与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑组织中MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均升高,GSH-Px及SOD活性均下降。与模型组比较,SECM高、中剂量组大鼠神经功能评分有所改善;SECM高、中、低剂量组大鼠脑组织中GSH-Px和SOD活性均上升,MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均降低。结论:SECM对预先暴露于损伤因子过氧化氢及冈田酸的SH-SY5Y细胞均具有很好的保护和修复作用,同时对I/R损伤大鼠具有脑保护作用。 展开更多

关键词 富硒蛹虫草子实体多肽 人神经母细胞瘤细胞 细胞增殖 脑缺血/再灌注 作用机制

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硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制

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作者 张赔 徐斌 +1 位作者 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期263-273,共11页

目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育... 目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞,calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖;免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞后,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量;试剂盒检测细胞内NAD+/NADH和ATP含量;SM 10μmol·L^(-1)处理细胞后,超高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内SM-DNA加合物种类。结果与溶剂组相比,SM染毒后2 h时,SM 800μmol·L^(-1)组细胞融合率降至<5%且不再增加;SM染毒6~8 h后,SM 10~400μmol·L^(-1)组细胞融合率曲线逐渐降低。SM染毒后24 h时,细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05,P<0.01,r=-0.6681),半数抑制浓度(IC50)为15.92μmol·L^(-1)。SM 25~400μmol·L^(-1)显著增加死细胞比例(P<0.01),浓度依赖性显著增加LDH释放率(P<0.01,r=0.9401);SM 400μmol·L^(-1)显著降低EdU阳性细胞比例(P<0.01)。SM 1.0~100μmol·L^(-1)均可显著增加细胞内ROS含量(P<0.01),且显著降低细胞内NAD+/NADH和ATP含量(P<0.01),均呈浓度依赖性(r分别为0.8074,-0.8885和-0.9514);SM 25~400μmol·L^(-1)可浓度依赖性增加γ-H2AX阳性细胞比例(P<0.01,r=0.8550)。在SM 10μmol·L^(-1)染毒细胞中检测到2种SM与DNA加合物——单加合物N7-HETEG和双加合物Bis-G。结论SM对SH-SY5Y细胞具有明显的细胞毒性作用,可破坏细胞膜结构,阻碍细胞增殖,降低细胞存活率,其机制可能与引起神� 展开更多

关键词 硫芥 人神经母细胞瘤细胞 DNA损伤 氧化应激 能量代谢

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氟及7-NI共培养的SH-SY5Y细胞nNOS表达、增殖情况观察 被引量：4

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作者 邓明芬 朱丹 +1 位作者 桂传枝 官志忠 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第11期22-25,共4页

目的观察氟及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)特异性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)共培养的SH-SY5Y细胞增殖情况和nNOS表达变化。方法将体外培养SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、7-NI组、低氟+7-NI组、高氟+7-NI组,每组6个复孔。低氟组加... 目的观察氟及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)特异性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)共培养的SH-SY5Y细胞增殖情况和nNOS表达变化。方法将体外培养SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、7-NI组、低氟+7-NI组、高氟+7-NI组,每组6个复孔。低氟组加入0.2 mmol/L Na F,高氟组加入2.0 mmol/L Na F,7-NI组加入1μmol/L 7-NI,低氟+7-NI组加入0.2 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,高氟+7-NI组加入2.0 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,对照组加入等体积培养液,继续培养24 h。采用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞增殖情况(以OD450表示);采用实时荧光定量PCR法检测各组SH-SY5Y细胞NOS mRNA;采用Western blotting法检测各组SH-SY5Y细胞NOS蛋白。结果低氟组、高氟组细胞OD450均低于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞OD450低于低氟组(P<0.05);7-NI组细胞OD450与对照组相比P>0.05;低氟+7-NI组细胞OD450高于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞OD450高于高氟组(P<0.05)。低氟组、高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于低氟组(P均<0.05);7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05);低氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于高氟组(P<0.05)。结论氟可以抑制SHSY5Y细胞增殖,7-NI共培养可以减轻氟对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用。 展开更多

关键词 氟 氟中毒 人神经母细胞瘤细胞 7-硝基吲唑 神经型一氧化氮合成酶 一氧化氮

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EV71入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞机制的初步研究 被引量：3

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作者 郭晓丽 刘泉波 +1 位作者 张祯祯 毛华伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期50-54,共5页

目的:初步研究肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的机制。方法:将临床EV71分离株接种于人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞,扩增和纯化病毒;MTT法检测不同病毒胞吞途径阻断剂对SKN-SH细胞生长... 目的:初步研究肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的机制。方法:将临床EV71分离株接种于人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞,扩增和纯化病毒;MTT法检测不同病毒胞吞途径阻断剂对SKN-SH细胞生长抑制作用;用特异性的化学阻断剂预处理靶细胞后,Taq Man real-time PCR验证其对EV71 m RNA表达的影响。结果:RD细胞能够成功扩增出EV71病毒,病毒滴度为1×105 TCID50。随着药物浓度梯度的增加,SK-N-SH细胞的生长增殖受到抑制。Taq Man荧光定量RT-PCR结果显示氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)能够抑制EV71 m RNA的表达(Ρ<0.05),制霉菌素(nystatin,NT)对其影响不大(Ρ>0.05)。结论:初步推测EV71入侵SK-N-SH细胞是通过网格蛋白依赖性的内吞作用入胞。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 人神经母细胞瘤细胞 网格蛋白 内吞途径

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660 nm红光照射对营养缺乏人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用及其机制 被引量：2

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作者 刘岩松 张洁 卢涛 《山东医药》 CAS 2022年第14期36-40,共5页

目的观察660 nm红光对营养缺乏状态下人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用,并探讨其作用机制与线粒体功能的关系。方法取人神经瘤细胞母细胞,培养于低营养培养基(RPMI1640培养基中加入终体积5%FBS和1%青—链霉素溶液),用CCK-8法验证营养... 目的观察660 nm红光对营养缺乏状态下人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用,并探讨其作用机制与线粒体功能的关系。方法取人神经瘤细胞母细胞,培养于低营养培养基(RPMI1640培养基中加入终体积5%FBS和1%青—链霉素溶液),用CCK-8法验证营养缺乏模型。使用LED芯片与可调直流稳压电源制作光照装置,对营养缺乏细胞分别给予能量密度为2、4、8、16 J/cm^(2)和功率密度为2、4、8 mW/cm^(2)的660 nm红光照射,采用CCK-8试剂检测细胞活力,以细胞活力最高组对应的功率密度和能量密度作为最佳光照条件。取营养缺乏细胞,随机分为两组,光照组在最佳光照条件下接受红光照射1 h,对照组在相同环境下避光孵育1 h,运用长时程活细胞成像仪器Incucyte监测细胞增殖情况,计算光照后8、16、24 h时各组细胞平均汇合度;使用荧光探针JC-1检测光照后1~6 h线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果在功率密度2 mW/cm^(2)、能量密度8 J/cm^(2)时,光照组细胞活力最高(P均<0.01)。光照组光照后8、16、24 h的细胞汇合度与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。光照组线粒体膜电位水平随光照时间延长逐渐升高,光照后2、3 h时达到高峰(P<0.05或<0.01),此后随着时间增加逐渐回落至光照前水平;ROS水平随光照时间延长逐渐降低,在光照后3 h达到最低(P<0.05),此后随着时间增加又出现上升(P<0.05)。结论在功率密度2 mW/cm^(2)、能量密度8 J/cm^(2)条件下,660 nm红光照射能够增加处于营养缺乏状态下的人神经母细胞瘤细胞活力;其机制可能是通过快速超极化线粒体膜电位、降低ROS生成,从而增强线粒体功能,以提高细胞活力。 展开更多

关键词 人神经母细胞瘤细胞 光生物调节 660 nm红光 细胞活力 线粒体 活性氧

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和厚朴酚对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用及机制研究 被引量：3

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作者 钱保进 王玉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第10期1520-1524,共5页

目的观察和厚朴酚(HNK)对过氧化氢(H2O2)诱导的人来源神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护现象,并探究其可能机制。方法用400μmol/L H2O2处理SH-SY5Y细胞24 h,建立细胞损伤模型。保护组用HNK预孵SH-SY5Y细胞6 h后,加入400μmol/L H2O... 目的观察和厚朴酚(HNK)对过氧化氢(H2O2)诱导的人来源神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护现象,并探究其可能机制。方法用400μmol/L H2O2处理SH-SY5Y细胞24 h,建立细胞损伤模型。保护组用HNK预孵SH-SY5Y细胞6 h后,加入400μmol/L H2O2共同作用24 h,探讨HNK的作用。采用CCK-8比色法测定细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达,以及内质网应激(ERS)相关蛋白BIP、CHOP及Caspase-12表达。结果HNK增加H2O2作用下SH-SY5Y细胞活力(P<0.01),降低细胞凋亡率,增高Bcl-2/Bax比值,降低Caspase-3(P<0.05)、BIP、CHOP及Caspase-12蛋白表达(P<0.01)。结论HNK通过抑制ERS相关的凋亡保护H2O2对SH-SY5Y细胞的损伤作用。 展开更多

关键词 和厚朴酚 神经母细胞瘤细胞 内质网应激

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氟化钠诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及其机制研究 被引量：2

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作者 徐八一 王普生 +3 位作者 黄建云 徐志霞 夏涛 王爱国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期944-946,共3页

目的研究氟化钠(NaF)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤及致凋亡作用,并初步探讨NaF致神经毒性的作用机制。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞(1×107/ml),先加入0(对照)、20、40、80 mg/L的NaF溶液对SH-SY5Y细胞染毒24 h;再选择40 m... 目的研究氟化钠(NaF)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤及致凋亡作用,并初步探讨NaF致神经毒性的作用机制。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞(1×107/ml),先加入0(对照)、20、40、80 mg/L的NaF溶液对SH-SY5Y细胞染毒24 h;再选择40 mg/L的NaF溶液与380.40 mg/L的乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)溶液或38.23 mg/L的胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)溶液(提前30 min加入)联合染毒24 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和胞内钙离子([Ca2+]i)水平,并用激光共聚焦(laser scanningconfocal microscopy,LSCM)技术,从单个细胞水平检测NaF对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响。结果与对照组比较,40、80 mg/L NaF染毒组SH-SY5Y细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P<0.05);各NaF染毒组SH-SY5Y细胞的[Ca2+]i水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着NaF染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率和[Ca2+]i水平均呈上升趋势。LSCM连续扫描显示,40和80 mg/L NaF染毒组SH-SY5Y细胞[Ca2+]i的FI值达到峰值的时间分别为6 000～7 000 s和1 000～2 000 s,20 mg/L NaF染毒组未见明显的峰值;且NaF的浓度越高,[Ca2+]i达到峰值的时间越短。析因分析表明,胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高存在交互作用(F值分别为10.69、366.14,均P<0.05),BAPTA-AM可拮抗NaF对SH-SY5Y细胞的损伤作用;胞外钙离子螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高无交互作用(F值分别为0.02、0.03,均P>0.05)。结论 NaF对SH-SY5Y细胞的升钙作用可能参与了NaF的致细胞损伤和诱导凋亡作用,[Ca2+]i的升高可能与胞内钙库的释放有关。 展开更多

关键词 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞株 细胞凋亡 钙离子

原文传递

牛磺酸对毒胡萝卜素致人神经母细胞瘤细胞凋亡的保护作用研究 被引量：2

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作者 王晶 宋云飞 《中医药导报》 2021年第5期54-57,77,共5页

目的:探讨牛磺酸调控内质网应激对毒胡萝卜素(TG)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激模型的保护作用。方法:采用不同浓度的TG制备内质网TG+应激细胞模型,MTT法检测各组细胞的存活率筛选出适用于造模浓度。将细胞分为对照组、TG... 目的:探讨牛磺酸调控内质网应激对毒胡萝卜素(TG)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激模型的保护作用。方法:采用不同浓度的TG制备内质网TG+应激细胞模型,MTT法检测各组细胞的存活率筛选出适用于造模浓度。将细胞分为对照组、TG组、TG+10μmol/L牛磺酸组、20μmol/L牛磺酸组及TG+4-苯基丁酸(4-PBA)阳性药组;MTT检测各组细胞存活能力;TUNEL染色检测各组细胞凋亡情况;试剂盒检测各组细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Western blotting法检测各组细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和转录因子C/EBP的同源蛋白(CHOP)蛋白表达的水平。结果:与对照组比较,用不同浓度TG处理的SH-SY5Y细胞存活能力显著降低,且TG致细胞内质网应激损伤的最佳造模条件为10μmol/L孵育24 h;与TG组比较,给予高、低剂量的牛磺酸均能显著改善受损细胞的形态,提高损伤细胞的存活率,减少TUNEL阳性细胞数,抑制Caspase-3的活性,降低GRP78和CHOP的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:牛磺酸可显著改善TG诱导SH-SY5Y细胞的形态,提高其存活能力,减少细胞凋亡,这种作用可能与抑制内质网应激活化有关。 展开更多

关键词 牛磺酸 内质网应激 毒胡萝卜素 细胞凋亡 葡萄糖调节蛋白78 人神经母细胞瘤细胞

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Sirt3基因过表达慢病毒载体的构建及其在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中的表达 被引量：2

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作者 张静怡 邓永宁 +1 位作者 张萌 屈秋民 《新乡医学院学报》 CAS 2021年第1期6-10,共5页

目的构建Sirt3基因过表达慢病毒载体,通过稳定感染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立Sirt3基因过表达的SH-SY5Y细胞株,为研究Sirt3在帕金森病细胞模型中的作用提供新的方法。方法从GenBank中检索Sirt3基因序列,根据此序列设计并合成人Sirt... 目的构建Sirt3基因过表达慢病毒载体,通过稳定感染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立Sirt3基因过表达的SH-SY5Y细胞株,为研究Sirt3在帕金森病细胞模型中的作用提供新的方法。方法从GenBank中检索Sirt3基因序列,根据此序列设计并合成人Sirt3基因引物,扩增Sirt3基因的cDNA片段,将其克隆至慢病毒载体Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin中,构建慢病毒表达质粒。采用聚合酶链反应方法对阳性克隆进行鉴定和测序分析。将重组过表达病毒质粒及其2种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,测定病毒滴度。取对数生长期SH-SY5Y细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和Sirt3组,空白对照组SH-SY5Y细胞仅加入普通培养基,阴性对照组SH-SY5Y细胞转染阴性对照病毒,Sirt3组SH-SY5Y细胞转染Sirt3过表达慢病毒。转染后加入嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞。使用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot检测各组细胞中Sirt3mRNA和蛋白相对表达量。结果成功扩增Sirt3基因片段,大小1242bp;测序分析结果显示,过表达慢病毒Sirt3与GenBank中Sirt3基因序列完全一致,病毒滴度为1.2×10^12TU·L^-1。Sirt3组细胞中Sirt3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);空白对照组与阴性对照组细胞中Sirt3 mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Sirt3基因过表达慢病毒载体可成功构建,并获得稳定表达Sirt3基因的SH-SY5Y细胞株。 展开更多

关键词 Sirt3基因 慢病毒 人神经母细胞瘤细胞 帕金森病

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沉默Fis1基因对METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞增殖能力、线粒体膜电位和超微结构的影响 被引量：2

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作者 黄仕美 牟登峰 +5 位作者 王琪 郑丹 齐晓岚 官志忠 于燕妮 楼迪栋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1725-1730,共6页

目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 ... 目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 h。利用Western blot检测Fis1蛋白表达水平,使用CCK-8细胞毒性增殖实验分析METH对SH-SY5Y细胞增殖能力的影响,利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测METH对SH-SY5Y细胞MMP水平的影响,使用透射电镜观察METH对SH-SY5Y细胞线粒体超微结构的影响。结果未沉默组、沉默阴性组和沉默组中,与对照组比较,各组组内随METH诱导SH-SY5Y细胞的浓度升高,Fis1蛋白表达水平升高(P<0.05)、增殖能力减弱(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05);与未沉默组和沉默阴性组相同浓度比较,沉默组SH-SY5Y细胞Fis1蛋白表达水平降低(P<0.05),增殖能力增强(P<0.05),MMP水平升高(P<0.05)。组内与对照组比较,2.0mmol·L^-1 METH诱导未沉默组、沉默阴性组和沉默组,透射电镜观察见线粒体小球状结构增多(P<0.01)。结论Fis1可能在METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞损伤中起关键作用。 展开更多

关键词 甲基苯丙胺 人神经母细胞瘤细胞 线粒体分裂蛋白1 线粒体膜电位 线粒体超微结构

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西尼罗病毒对人神经母细胞瘤细胞p38丝裂原活化蛋白激酶途径的调控 被引量：1

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作者 徐铮昊 唐海琳 +3 位作者 任瑞文 赵平 戚中田 赵兰娟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1169-1175,共7页

目的探讨西尼罗病毒(WNV)感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的影响,以及该途径在WNV复制及应激应答、炎性应答相关分子表达调控中的作用。方法 WNV分别短时孵育(5、15、30、60 min)和感染(12、24、48、... 目的探讨西尼罗病毒(WNV)感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的影响,以及该途径在WNV复制及应激应答、炎性应答相关分子表达调控中的作用。方法 WNV分别短时孵育(5、15、30、60 min)和感染(12、24、48、60 h)SH-SY5Y细胞,用蛋白质印迹法检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达,用qRT-PCR检测WNV感染细胞内C/EBP同源蛋白(CHOP)、白细胞介素6(IL-6)、活化转录因子6α(ATF6α)和干扰素刺激基因15(ISG15)mRNA表达水平的动态变化。用WNV感染p38 MAPK siRNA转染的SH-SY5Y细胞,用qRT-PCR检测WNV RNA水平及CHOP、IL-6、ATF6α和ISG15mRNA水平。结果与未孵育的细胞相比,WNV短时孵育细胞内p38 MAPK的磷酸化水平升高。WNV感染SH-SY5Y细胞12 h、24 h时激活了p38 MAPK途径,而感染48 h、60 h时明显抑制了p38 MAPK途径。WNV感染促进了CHOP、IL-6和ISG15 mRNA表达而抑制了ATF6αmRNA表达。与对照siRNA转染的细胞相比,p38MAPKsiRNA转染的细胞内WNVRNA(P<0.05)水平和ATF6αmRNA(P<0.01)水平升高,而CHOP mRNA水平降低(P<0.05)。结论 WNV感染早期激活了p38 MAPK途径,该途径的激活可能负反馈调控WNV的复制。WNV经p38 MAPK途径调控与应激应答相关的CHOP、ATF6α表达及与炎性应答相关的IL-6表达。 展开更多

关键词 西尼罗病毒 人神经母细胞瘤细胞 P38丝裂原活化蛋白激酶 病毒复制

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七氟醚通过mTOR信号通路诱导人神经母细胞瘤细胞自噬的发生

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作者 吕静静 程浩 +2 位作者 刘虎 金孝岠 陈永权 《皖南医学院学报》 CAS 2022年第2期173-176,共4页

目的:探讨七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)自噬的影响及mTOR信号通路在其中的作用。方法:将培养的SHSY-5Y细胞随机分为4组,空白对照组(C组)、空白对照+雷帕霉素50 nmol/L组(C+R组)、4.8%七氟醚12 h组(S组)和4.8%七氟醚12 h+雷... 目的:探讨七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)自噬的影响及mTOR信号通路在其中的作用。方法:将培养的SHSY-5Y细胞随机分为4组,空白对照组(C组)、空白对照+雷帕霉素50 nmol/L组(C+R组)、4.8%七氟醚12 h组(S组)和4.8%七氟醚12 h+雷帕霉素50 nmol/L组(S+R组)。各组分别于处理结束时采用Western blot法测定各组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Atg5以及p-mTOR、t-mTOR、β-actin的表达水平;利用mRFP-EGFP-LC3质粒转染,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬小体以及自噬溶酶体的数量,从而判断七氟醚对SHSY-5Y细胞自噬流的影响及其具体机制。结果:与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平均增高(P<0.05);与C+R组和S组比较,S+R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平也增高(P<0.01)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组p-mTOR/t-mTOR比值均降低(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组p-mTOR/t-mTOR比值也降低(P<0.001)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量均增加(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量也增加(P<0.001)。结论:吸入麻醉药七氟醚通过mTOR信号通路诱导SHSY-5Y细胞自噬的发生。 展开更多

关键词 七氟醚 人神经母细胞瘤细胞 细胞自噬 MTOR信号通路

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