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hIGF-1基因治疗老龄大鼠勃起功能障碍的剂量及时效研究 被引量:13
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作者 蒲小勇 王行环 +5 位作者 王怀鹏 高炜城 杨中华 李世林 邓春华 毛向明 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期690-694,共5页
目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μ... 目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组,注射后在不同时间段4周和8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)的测定,分析比较不同剂量和不同时间hIGF-1基因治疗的效果;RT-PCR检测hIGF-1基因mRNA的表达。结果:电刺激发现老年组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P<0.05)。4和8周的治疗之后,10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组较PBS对照组ICP/MAP和总ICP均明显提高(P<0.05);100μg注射组和1000μg注射组在4和8周时ICP/MAP和总ICP值和青年组相仿;10μg注射组虽然不能达到和青年组相仿的治疗效果,但仍然有治疗意义;所有hIGF-1基因治疗组均可检测到hIGF-1 mRNA的表达。结论:hIGF-1基因治疗能够提高老龄大鼠的勃起功能,100μg即可达到有效的治疗,hIGF-1基因治疗至少能够维持8周时间。 展开更多
关键词 勃起功能障碍 老龄 胰岛素样生长因子1 基因治疗 大鼠
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联合注射外源性IFNγ和IGF-1治疗小鼠骨骼肌损伤 被引量:5
2
作者 陈疾忤 陈世益 +2 位作者 李宏云 尚西亮 吴子英 《中国骨伤》 CAS 2008年第6期434-437,共4页
目的:观察局部联合注射外源性人胰岛素样生长因子1(human insulin like growth factor1,hIGF1)和人γ干扰素(human interferonγ,hIFNγ)对于小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程中再生和纤维化的影响。方法:64只8周龄雄性C3H小鼠,制作右侧腓... 目的:观察局部联合注射外源性人胰岛素样生长因子1(human insulin like growth factor1,hIGF1)和人γ干扰素(human interferonγ,hIFNγ)对于小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程中再生和纤维化的影响。方法:64只8周龄雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分为4组,即A组(注射hIFNγ)、B组(注射hIGF1)、C组(联合注射hIFNγ和hIGF1)、D组(注射生理盐水)。挫伤后第10天,A、B、C、D组小鼠,腓肠肌损伤处分别注射不同药物进行干预。于干预前(伤后7d),和干预后4、18、32d,各组随机抽取4只小鼠进行损伤腓肠肌取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色方法检测不同时点Ⅱb型肌球蛋白重链(myosin heavy chainⅡb,MHCⅡb)及波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:①干预后各时点,B、C组小鼠损伤骨骼肌局部MHCⅡb表达较A、D组明显高;②干预后各时间点A、B、C组小鼠损伤骨骼肌局部Vimentin表达较D组低,其中以A组和B组更明显。结论:①骨骼肌急性损伤后,局部注射hIGF1有明显促进骨骼肌纤维再生,和一定程度抑制纤维化的作用。②局部注射hIFNγ仅表现出抑制纤维化的作用,且比hIGF1更加明显。③联合应用hIGF1和hIFNγ,能够同时促进骨骼肌再生和抑制纤维化,有效地促进损伤骨骼肌的愈合。 展开更多
关键词 人γ干扰素 胰岛素样生长因子-1 创伤和损伤 骨骼 肌球蛋白重链 波形蛋白
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重组人胰岛素样生长因子-1大肠杆菌高密度发酵研究 被引量:5
3
作者 陈理 杨渐 俞昌喜 《福建医科大学学报》 2013年第1期6-10,共5页
目的建立重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)在大肠杆菌高密度发酵中表达的工艺。方法以工程菌DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,通过分批发酵培养优化溶解氧浓度、pH及温度等发酵条件,在此基础上以甘油为限制性基质进行分批补料发酵,考察不同... 目的建立重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)在大肠杆菌高密度发酵中表达的工艺。方法以工程菌DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,通过分批发酵培养优化溶解氧浓度、pH及温度等发酵条件,在此基础上以甘油为限制性基质进行分批补料发酵,考察不同补料方式对发酵的影响。结果适合重组hIGF-1在工程菌高密度发酵中表达的条件:在菌株活化与初始培养后,诱导时控制发酵系统溶解氧浓度为20%,温度为30℃,pH为7.2并以恒定pH反馈补料,发酵12h菌体密度OD600达44.53,得菌体干质量17.49g/L,平均生产强度为1.458g.L-1.h-1,其中重组hIGF-1的相对表达量为32.5%。结论研究为工业化生产hIGF-1奠定了基础。 展开更多
关键词 高密度发酵 重组大肠杆菌 人胰岛素样生长因子-1
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scAAV9-IGF-1转导至G93A-SOD1小鼠神经元及其作用机制
4
作者 温迪 吉盈肖 +4 位作者 刘亚坤 李秋生 段伟松 陈相 于秀军 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第12期766-771,共6页
目的探索自我互补腺相关病毒载体介导的人胰岛素样生长因子-1(scAAV9-IGF-1)转导至G93A-SOD1转基因小鼠神经元及其对线粒体的作用。方法采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的转基因G93A-SOD1及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠为动物模型,在60 ... 目的探索自我互补腺相关病毒载体介导的人胰岛素样生长因子-1(scAAV9-IGF-1)转导至G93A-SOD1转基因小鼠神经元及其对线粒体的作用。方法采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的转基因G93A-SOD1及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠为动物模型,在60 d龄时,同窝阳性G93A-SOD1转基因雌性小鼠采用随机的方法分配到治疗组肌肉注射scAAV9-IGF-1,载体对照组肌肉注射AAV9-GFP,及同年龄WT-SOD1作为阴性对照。在肌肉注射后约40~50 d时,通过免疫组化染色观察IGF-1在腰髓神经元中的表达,利用免疫荧光染色观测腰髓组织绿色荧光蛋白(GFP)的表达特点;用透射电镜观察腰髓前角运动神经元中线粒体的形态学变化;提取小鼠脊髓细胞进行流式细胞学分析线粒体膜电位变化;腓肠肌进行免疫组化染色观察线粒体变化。结果免疫荧光染色观测腰髓组织GFP的表达主要在神经元,免疫组化染色观察IGF-1表达于腰髓神经元中。透射电镜观察GFP组线粒体存在嵴消失、空泡化、胞浆水肿、核染色质疏松,而IGF-1组线粒体形态与WT组相似,为长椭圆形,未见嵴消失、空泡化等现象。流式细胞学分析IGF-1组降低了线粒体膜电位的除极。在GFP对照组中腓肠肌的苏木精-伊红染色中观察到严重萎缩的肌纤维,而在IGF-1处理的小鼠中肌肉萎缩减少。Gomori染色显示IGF-1处理后,肌肉细胞的线粒体染色增多,同WT组相当。结论scAAV9-IGF-1可以保护G93A-SOD1转基因小鼠模型中的线粒体,其通过减少线粒体膜电位除极,改善线粒体形态,减少腓肠肌肌肉萎缩,从而产生保护线粒体的作用。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 转基因小鼠 腺相关病毒 人胰岛素样生长因子-1 线粒体膜电位
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人胰岛素样生长因子前体基因的重组、表达及其蛋白纯化 被引量:3
5
作者 施有为 刘莉 程蕴琳 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期825-828,845,共5页
目的:构建含有人胰岛素样生长因子(humaninsulin-likegrowthfactor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coliBL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值。方法:采用PCR法,扩增编码h... 目的:构建含有人胰岛素样生长因子(humaninsulin-likegrowthfactor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coliBL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值。方法:采用PCR法,扩增编码hIGF-1前体cDNA的片段,通过双酶切、胶回收纯化、连接后得到pET32a(+)/hIGF-1重组载体,然后将其转化入BL21(DE3)中,经IPTG诱导后表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Westernblot法检测重组蛋白的抗原活性。结果:重组质粒pET32a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。BL21(DE3)表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳后显示,其表达量占细菌总蛋白量的25%左右,该重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后其纯度高达90%以上。Westernblot结果显示非常清晰的免疫印迹条带,表明此重组蛋白具有免疫学特异性。结论:pET32a(+)/hIGF-1重组载体构建成功,并能够高效表达。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 前体PCR 重组蛋白 亲和层析
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人胰岛素样生长因子-1真核表达载体的构建及在神经干细胞中的表达 被引量:3
6
作者 朱登纳 王军 +3 位作者 贾延劼 牛国辉 张博爱 吴值荣 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第2期156-159,共4页
目的:构建人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)真核表达载体,并在人脐血神经干细胞(NSCs)中表达。方法:采用RT-PCR法从人胎肝中克隆IGF-1基因,将其导入真核表达载体pcDNA3.1中,用脂质体转染法将重组质粒转染人脐血NSCs。分别采用RT-PCR和免疫... 目的:构建人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)真核表达载体,并在人脐血神经干细胞(NSCs)中表达。方法:采用RT-PCR法从人胎肝中克隆IGF-1基因,将其导入真核表达载体pcDNA3.1中,用脂质体转染法将重组质粒转染人脐血NSCs。分别采用RT-PCR和免疫荧光细胞化学法检测转基因NSCs中IGF-1mRNA和蛋白的表达。结果:琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出462bp的条带;重组载体pcDNA3.1-IGF-1经HindⅢ与BamHⅠ双酶切后,得到5428bp和462bp的两个条带;目的基因转染的NSCs经RT-PCR扩增出一条与目的基因一致的条带;免疫荧光细胞化学检测到IGF-1蛋白的表达。结论:成功构建了人IGF-1基因的真核表达载体,转染后IGF-1重组蛋白在人脐血NSCs中能成功表达。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 基因转染 人脐带血 神经干细胞
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骨碎补结合组织工程软骨促进软骨再生的实验研究 被引量:3
7
作者 牟明威 张陇豫 +2 位作者 汪冠球 白松绵 王泽茂 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第23期4421-4425,共5页
目的:评估骨碎补结合组织工程软骨治疗对实验兔软骨缺陷模型软骨再生的疗效。方法:将h IGF-1基因转染MSCs,并与脱细胞真皮基质(ADM)构建组织工程软骨。24只新西兰白兔随机分为A、B、C、D四组,A、C组进行自体软骨移植,B、D组进行改建的细... 目的:评估骨碎补结合组织工程软骨治疗对实验兔软骨缺陷模型软骨再生的疗效。方法:将h IGF-1基因转染MSCs,并与脱细胞真皮基质(ADM)构建组织工程软骨。24只新西兰白兔随机分为A、B、C、D四组,A、C组进行自体软骨移植,B、D组进行改建的细胞-ADM移植。C、D组用40%骨碎补汤喂养4周,150 m L/d。第12周处死实验动物,分离缺损关节软骨部位,蜡块包埋染色,通过总体形态评价软骨再生组织。采用组织学评分评估再生软骨质量。采用甲苯胺蓝染色评价缺损部位产生软骨糖胺聚糖的情况。结果:与B组比较,C组和D组的新生软骨覆盖度、新骨髓的颜色、缺损边缘和表面粗糙度均显著提高(P<0.05);再生软骨的组织学评分软骨表面评分显著改善(P<0.05)。C组与D组具有比其他组更好的基质、细胞分布和表面指数。并且有较厚的透明样软骨组织,具有正常的糖胺聚糖产生。表明该治疗方法可以通过再生透明样软骨且没有不良事件来减少软骨缺陷。结论:工程软骨结合骨碎补治疗可显著改善兔膝关节软骨缺损修复的质量,为临床治疗软骨病变提供重要理论依据。 展开更多
关键词 骨碎补 人胰岛素样生长因子-1 关节软骨缺损
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人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位 被引量:3
8
作者 蒲小勇 胡礼泉 +7 位作者 王行环 廖庆娇 韩雪 叶林柏 田斌群 李世文 郑新民 宋健 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S1期-,共3页
目的观察人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位情况,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。方法采用Lipofectamine2000包裹PCDB-hIGF-1质粒和PCDB空载体,转染原代培养的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,转染... 目的观察人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位情况,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。方法采用Lipofectamine2000包裹PCDB-hIGF-1质粒和PCDB空载体,转染原代培养的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,转染后24h分别采用RT-PCR法检测hIGF-1基因mRNA表达,Westernblot法检测hIGF-1蛋白表达,荧光免疫细胞化学法检测hIGF-1细胞定位及蛋白表达。结果RT-PCR检测到hIGF-1mRNA表达,Westernblot和荧光免疫细胞化学法均检测到hIGF-1蛋白表达,荧光免疫细胞化学法可见hIGF-1蛋白定位于阴茎海绵体细胞胞质中。结论PCDB-hIGF-1成功转染入大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞可表达hIGF-1基因,蛋白定位于胞质。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子1 海绵体平滑肌细胞
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重组人胰岛素样生长因子-1工程菌发酵培养基的优化 被引量:1
9
作者 杨渐 陈理 俞昌喜 《化学与生物工程》 CAS 2013年第4期36-40,共5页
在摇瓶条件下,以M9培养基为基础,采用单因素实验和正交实验,对适合于表达重组人胰岛素样生长因子-1工程菌生长的高密度发酵培养基进行了优化。确定最佳培养基配方为:葡萄糖0.4%、甘油1.5%、酵母粉3%、胰蛋白胨3%、Na2HPO41.2%、KH2PO40... 在摇瓶条件下,以M9培养基为基础,采用单因素实验和正交实验,对适合于表达重组人胰岛素样生长因子-1工程菌生长的高密度发酵培养基进行了优化。确定最佳培养基配方为:葡萄糖0.4%、甘油1.5%、酵母粉3%、胰蛋白胨3%、Na2HPO41.2%、KH2PO40.6%、NH4Cl 0.1%、NaCl 0.20%、MgSO40.048%,在此优化培养基中培养14h,工程菌菌体密度OD600达7.5。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 大肠杆菌 发酵培养基 优化
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抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
10
作者 毕立清 刘莉 +3 位作者 程蕴琳 施有为 仇镇宁 姜苏蓉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期712-716,741,共6页
目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性... 目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类。结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合。腹水mAb效价可达6×104。mAb相对亲和力为2.1×109/mol~7.8×109/mol。2株单抗属IgM亚类。染色体分析符合杂交瘤细胞特征。结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 单克隆抗体 重组蛋白
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自制鼠源性胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的初步应用
11
作者 毕立清 刘莉 +2 位作者 程蕴琳 张伟明 施有为 《临床和实验医学杂志》 2010年第23期1761-1762,共2页
目的观察自制鼠源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)单克隆抗体(mAb)的初步应用,探讨其在实验研究中的应用价值。方法小鼠腹水mAb经初步纯化后,应用于免疫印迹检测及胃癌组织的免疫组化研究。结果免疫印迹分析显示,该mAb可特异性地与家蚕成... 目的观察自制鼠源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)单克隆抗体(mAb)的初步应用,探讨其在实验研究中的应用价值。方法小鼠腹水mAb经初步纯化后,应用于免疫印迹检测及胃癌组织的免疫组化研究。结果免疫印迹分析显示,该mAb可特异性地与家蚕成熟分泌型IGF-1及大肠杆菌表达的IGF-1重组蛋白结合,免疫组化显示其相应抗原在人胃腺癌组织中阳性表达,且人胃癌组织中IGF-1表达水平显著高于正常胃腺体组织。结论本研究所获单抗具有一定的科研应用价值,同时证实IGF-1能作为胃腺癌发生的诊断标记,为IGF-1的临床检测和实验研究创造了物质基础。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 单克隆抗体 免疫组化 胃癌
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胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形态发生蛋白-2对人牙周膜细胞增殖的作用 被引量:10
12
作者 刘宏 吴织芬 王勤涛 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1999年第1期31-33,共3页
目的:重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)分别或联合应用对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法:采用组织块法体外培养人PDL细胞,MTT法测定PDL细胞在不同生长... 目的:重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)分别或联合应用对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法:采用组织块法体外培养人PDL细胞,MTT法测定PDL细胞在不同生长因子刺激下的增殖情况。结果:rhIGF-I、rhBMP-2都可促进人PDL细胞的增殖,这种促增殖作用呈一定的浓度依赖性,rhIGF-I与rhBMP-2联合应用对人PDL细胞的增殖有协同作用,且与单独应用相比相差显著。结论:rhIGF-I、rhBMP-2可望作为牙周再生的生物活性介质,rhIGF-I与rhBMP-2联合应用对PDL细胞的促增殖作用更强。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 细胞培养 胰岛素样 生长因子 RHBMP2
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hIGF-1基因修饰骨髓基质干细胞复合PLGA移植修复关节软骨缺损 被引量:5
13
作者 丁幸坡 金先庆 刘伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期354-357,390,共5页
目的:研究人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因修饰的骨髓基质干细胞(MSCs)复合PLGA材料移植对关节软骨缺损的修复作用。方法:从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出hIGF-1基因,亚克隆后酶切出目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建成真核表达载体pIRES... 目的:研究人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因修饰的骨髓基质干细胞(MSCs)复合PLGA材料移植对关节软骨缺损的修复作用。方法:从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出hIGF-1基因,亚克隆后酶切出目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,鉴定后转染兔MSCs并检测hIGF-1在其中的表达;将转染细胞复合PLGA支架材料立体培养后植入实验性兔关节软骨缺损处,不同时间取材,检测对软骨缺损修复的效果。结果:成功构建了GFP标记的真核载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并在靶细胞中得到理想表达;hIGF1基因修饰的MSCs复合支架材料移植明显促进了缺损软骨的修复质量,组织学评分与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:IGF-1是软骨组织工程种子细胞MSCs基因修饰的理想候选基因,以之修饰的MSCs作为种子细胞可以明显提高组织工程方法对软骨缺损的修复效果。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 骨髓基质干细胞 关节软骨缺损
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人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达 被引量:3
14
作者 徐岩 贡成良 +2 位作者 薛仁宇 沈卫德 曹广力 《常熟理工学院学报》 2006年第4期72-77,共6页
将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状... 将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒Bm-Bac-hIGF-Ⅰ。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫血淋巴中可以检测到一条分子量约为7.5 kD的特异性条带,ELISA检测表达量达4.51μg/mL蚕血淋巴。 展开更多
关键词 人重组胰岛素样生长因子Ⅰ型 大肠杆菌 家蚕 重组病毒 基因表达
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长链人胰岛素样生长因子-1在毕赤酵母中表达条件的优化 被引量:5
15
作者 张文明 洪静 +4 位作者 孙天玮 黄国团 梁军 王大力 林殿海 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期499-501,共3页
目的优化长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)在毕赤酵母中的表达条件。方法考察甲醇诱导浓度(0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%和1.50%)、诱导温度(25、28、30℃)、pH值(4.75、5... 目的优化长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)在毕赤酵母中的表达条件。方法考察甲醇诱导浓度(0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%和1.50%)、诱导温度(25、28、30℃)、pH值(4.75、5.00、5.25、5.50、5.75和6.00)及添加剂(0.1%的精氨酸、甘氨酸、组氨酸、吐温-20和吐温-80)对LR3IGF-1在毕赤酵母中表达的影响,优化LR3IGF-1的表达条件。以最佳表达条件在发酵罐中诱导表达LR3IGF-1,检测其表达量,并与初始发酵条件的表达量进行比较。结果甲醇浓度为0.75%及诱导温度为25℃时,LR3IGF-1的表达量最高,分别为76.5和98 mg/L;pH值为5.25,诱导24 h,LR3IGF-1的表达量较高,且降解程度低;添加吐温-20可使LR3IGF-1的表达量提高至271 mg/L。以优化的条件进行发酵,LR3IGF-1的表达量可达497 mg/L,较优化前(52 mg/L)提高了近9倍,且诱导时间从48 h缩短至24 h。结论优化了LR3IGF-1在毕赤酵母中的表达条件,为其规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 长链人胰岛素样生长因子-1 毕赤酵母 基因表达 优化
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含hIGF-1基因腺病毒的构建及在兔骨髓间充质干细胞的表达 被引量:3
16
作者 丁幸坡 金先庆 +2 位作者 罗小辑 邱林 刘伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1495-1498,共4页
目的用Adeasy系统构建荧光蛋白基因标记的腺病毒载体Ad-hIGF-1,然后转染兔骨髓间充质干细胞并检测其表达。方法根据GenBank公布的hIGF-1序列设计PCR引物,从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短型hIGF-1,亚克隆至pMD-T载体,鉴定后酶切出目... 目的用Adeasy系统构建荧光蛋白基因标记的腺病毒载体Ad-hIGF-1,然后转染兔骨髓间充质干细胞并检测其表达。方法根据GenBank公布的hIGF-1序列设计PCR引物,从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短型hIGF-1,亚克隆至pMD-T载体,鉴定后酶切出目的基因插入pAdtrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdtrack-hIGF-1,经Pm eⅠ线性化后采用电穿孔法转化至已包含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的B J5183大肠杆菌中,挑选同源重组质粒线性化后转染HEK293细胞收获腺病毒,然后转染靶细胞兔骨髓间充质干细胞,通过绿色荧光蛋白表达情况以及流式细胞仪、免疫细胞化学等方法检测hIGF-1的表达。结果成功构建了绿色荧光蛋白基因标记的腺病毒Ad-hIGF-1,并在兔骨髓间充质干细胞得以高效表达。结论Adeasy腺病毒系统是基因转染的高效载体系统。腺病毒Ad-hIGF-1转染的骨髓间充质干细胞可作为基因修饰的软骨组织工程种子细胞。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 腺病毒载体 骨髓间充质干细胞
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重组人胰岛素样生长因子-1纯化及其鉴定的研究 被引量:3
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作者 段宇 赵红 +1 位作者 汪承亚 陈家伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期557-560,共4页
目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除... 目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除杂质,采用亲和层析法纯化rhIGF鄄1。以ELISA法测定纯化产物中rhIGF鄄1含量,用SDS鄄PAGE和Western鄄blot分析鉴定rhIGF鄄1纯度及免疫学活性,4-甲基偶氮唑蓝(tetrazoliumsalt,MTT)法观察其对MCF鄄7细胞增殖的影响。结果:纯化后rhIGF鄄1纯度约为40%,Westernblot分析发现,主要纯化产物相对分子质量为7.5ku的成熟hIGF鄄1,所含非目的产物与hIGF鄄1无免疫交叉反应。细胞活性刺激实验显示,rhIGF鄄1纯品对MCF鄄7细胞有较好的刺激活性,促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF鄄1产品。结论:蚕血淋巴中的rhIGF鄄1经亲和层析后初步得到纯化,并显示良好的免疫学活性和生物学活性。 展开更多
关键词 重组人胰岛素样生长因子—1 家蚕幼虫 亲和层析 纯化产物 活性
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胰岛素样生长因子-1基因原核表达载体的构建及表达蛋白的生物学活性 被引量:3
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作者 曹传平 陈晓虹 +6 位作者 吴建国 商阿丽 虞慧华 康五朋 郑玲莉 张敬 鞠佃文 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期848-851,共4页
目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆... 目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。MTT法检测rhIGF-1促MCF-7细胞的增殖作用。结果转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7700的目的蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%。Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用。结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 原核表达 纯化 生物学活性
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人胰岛素样生长因子1前体基因的重组、表达及纯化 被引量:2
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作者 姜苏蓉 刘莉 +1 位作者 陈晨 程蕴琳 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期136-138,共3页
目的构建含有人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)前体编码基因的重组载体,在E.coliBL21中表达,并探讨其抗原性和应用价值。方法用PCR法,从现有重组质粒pBakPAK8/hIGF-1中,扩增编码hIGF-1前体的基因片段,经双酶切、纯化、连接后得到pET29a(+)/h... 目的构建含有人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)前体编码基因的重组载体,在E.coliBL21中表达,并探讨其抗原性和应用价值。方法用PCR法,从现有重组质粒pBakPAK8/hIGF-1中,扩增编码hIGF-1前体的基因片段,经双酶切、纯化、连接后得到pET29a(+)/hIGF-1重组体,再将其转化大肠杆菌BL21-CodonPlus并诱导表达。表达产物经镍柱亲和层析纯化后,用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性。结果重组持粒pET29a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析证实构建成功。在大肠杆菌BL21-CodonPlus中经IPTG诱导表达,有一相对分子质量15000的重组蛋白hIGF-1前体,该蛋白经镍柱亲和层析获得了良好的纯化效果,具有特异的抗原活性。结论成功地克隆并表达相对分子质量为15000的hIGF-1前体编码基因,为进一步制备抗hIGF-1抗体和后续hIGF-1生物学功能研究打下了良好基础。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子1前体 基因 抗原性 人胰岛素样生长因子1 亲和层析纯化 前体基因 重组载体 相对分子质量 WESTERN 编码基因
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靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究 被引量:2
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作者 牛坚 钱海鑫 +1 位作者 李向农 韩泽广 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期703-708,共6页
背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMM... 背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段,构建SMMC7721-IGF1R-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞。通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤。同时设立对照组。根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Westernblot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721-IGF1R-mutation组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P<0.05)。SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调。SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P<0.05)。结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长。 展开更多
关键词 RNA干扰 人胰岛素样生长因子1类受体 微血 管密度 基因表达 SMMC7721细胞 移植瘤 裸鼠
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