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人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 被引量：14
1
作者 王英 何津 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期245-248,共4页
目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物... 目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。 展开更多
关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养
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人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题 被引量：3
2
作者 孟国良 尚克刚 丁明孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期131-135,共5页
人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可... 人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨 ;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用 ;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法 ;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法 ,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析 。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 人胚胎生殖细胞 多能性 分化 端粒酶
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人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究 被引量：3
3
作者 姜景岩 孔北华 +6 位作者 曲迅 马道新 孙丽 张友忠 王波 杨瑞芳 王明毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期633-637,共5页
目的 :研究人胚肺成纤维细胞 (humanEmbryonicLungFibroblast,HELF)饲养层对人胚胎干细胞 (HumanEmbryonicStemCells ,hES细胞 )生长的作用 ,摸索适宜的hES细胞培养与识别方法。方法 :以流产胎儿肺组织制备HELF饲养层 ,取生殖嵴或背肠... 目的 :研究人胚肺成纤维细胞 (humanEmbryonicLungFibroblast,HELF)饲养层对人胚胎干细胞 (HumanEmbryonicStemCells ,hES细胞 )生长的作用 ,摸索适宜的hES细胞培养与识别方法。方法 :以流产胎儿肺组织制备HELF饲养层 ,取生殖嵴或背肠系膜及其周围组织 ,获得由人原始生殖细胞 (humanPrimordialGermCells,hPGCs)转化成的hES细胞。比较其在不同条件下的增殖行为 ,并通过生物学特性鉴别该细胞系。结果 :HELF饲养层在LIF存在的条件下有利于支持hES细胞的体外生长 ;hES细胞碱性磷酸酶组织化学染色及端粒酶ELISA检测阳性 ;具有正常的核型 ;在体外发展为类胚体。结论 :HELF饲养层和LIF的协同作用能支持hES细胞的生长 ;建立通过生物学特性鉴别hES细胞的方法。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 培养条件 鉴别 方法学
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抗坏血酸体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化 被引量：1
4
作者 陈永珍 朱旻 +1 位作者 李芳 张于娟 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1551-1554,F0002,共5页
目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞... 目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学染色,鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。结果抗坏血酸诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,诱导第3周时分化率达(85.2±1.8)%,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。诱导后细胞形态变成梭形,4周时细胞突起相互连接成条索状,且排列方向趋于一致;诱导后1周即开始出现GATA-4弱表达,第3周时表达最强;诱导后2周,细胞内开始表达cTnT,3周强阳性表达,4周表达明显增强。结论抗坏血酸能够促进hEGC向心肌细胞分化,可用以建立体外诱导hEGC分化为心肌细胞的方法 。 展开更多
关键词 抗坏血酸 人胚胎生殖细胞 心肌细胞
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SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达 被引量：2
5
作者 李芳 陈永珍 +2 位作者 陈谦 朱旻 张苏 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期21-24,共4页
分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体... 分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体外培养得到的细胞或细胞集落均阳性表达SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT,说明组织块体外培养获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。 展开更多
关键词 人胚胎生殖细胞 SSEA-1 SSEA-3 OCT-4 HTERT 表达
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人胚胎生殖细胞移植于梗死心肌后不同时期心肌特异转录因子GATA-4的表达
6
作者 张于娟 李芳 +2 位作者 余水长 李金 陈永珍 《交通医学》 2008年第6期611-614,共4页
目的：探讨人胚胎生殖细胞（hEGCs）移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后，移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜，进行人EG细胞的组织块原代及传代培养，以传四代的人EG细胞为移植细胞... 目的：探讨人胚胎生殖细胞（hEGCs）移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后，移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜，进行人EG细胞的组织块原代及传代培养，以传四代的人EG细胞为移植细胞。40只SD大鼠随机分为两组，移植组将获得的人EG细胞移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌边缘：对照组用同样的方法给急性心肌梗死大鼠注入PBS。于移植后1天，1、2、4周处死大鼠。用免疫组化方法检测心肌特异转录因子GATA-4在移植细胞的表达。结果：移植后1天，1、2、4周移植组均有移植细胞稳定存活，GATA—4的表达在移植1天时呈弱阳性，1周及2周时呈阳性，4周时强阳性；对照组均未检测出移植细胞及心肌细胞转录因子。结论：随着移植时问的延长，移植细胞GATA-4表达呈增强趋势，移植后4周表达强度最大。 展开更多
关键词 人胚胎生殖细胞 GATA-4 心肌梗死
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人胚胎生殖细胞移植治疗猪心肌梗死
7
作者 陈彦君 李芳 +5 位作者 张于娟 孙辉 许梅杰 沈耀耀 朱旻 陈永珍 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1039-1042,共4页
目的：研究人胚胎生殖细胞（EG细胞）移植猪心肌梗死区存活及心肌再生作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，采用组织块培养法体外培养获得人胚胎生殖细胞。取太湖小型猪2只，分移植组和对照组，开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死... 目的：研究人胚胎生殖细胞（EG细胞）移植猪心肌梗死区存活及心肌再生作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，采用组织块培养法体外培养获得人胚胎生殖细胞。取太湖小型猪2只，分移植组和对照组，开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型。术后2周处死猪，取出心肌组织，以鼠抗人细胞核抗体MABl281作为示踪剂，免疫组织化学检测移植细胞的存活情况；并观察转录因子GATA_4、连接蛋白Cx43、心肌转录因子NKx-2．5和心肌肌钙蛋白T（cTnT）在移植猪心组织的表达。结果：成功地建立猪急性心肌梗死模型，结扎冠脉后可见心电图典型的心肌梗死变化；免疫组织化学显示移植组MABl281阳性细胞，GATA_4、Cx43、Nkx2．5和cTnT均阳性表达。结论：人EG细胞移植于此模型的心肌组织中不仅存活，而且能向心肌细胞分化，具有心肌再生能力。 展开更多
关键词 人胚胎生殖细胞 细胞移植 心肌再生
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