体外诱导人羊膜间充质干细胞向韧带细胞分化的实验研究 被引量：20

1

作者 金瑛 李豫皖 +3 位作者 张承昊 吴术红 陈代雄 刘毅 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期237-244,共8页

目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加入含不同诱导液的L-DMEM/F12培养基:A组TGF-β1+b FGF,B组透明质酸(hyaluronic acid,HA),C组TGF-β1+b FGF+HA,D组为空白对照组。倒置相差显微镜观察诱导后21 d各组细胞形态学变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测各组细胞生长活性;诱导后7、14、21 d分别采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白和基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、肌腱蛋白C(tenascin C,TNC)表达。结果流式细胞术鉴定结果表明h AMSCs表达MSCs表型。倒置相差显微镜观察示诱导21 d A、B、C组细胞均呈长梭形纤维细胞样生长,C组细胞形态更单一、有明显方向性且较A组排列更紧凑。SRB比色法检测示各组细胞于培养6 d左右达增殖高峰,6 d时A、B、C组细胞活性均显著高于D组。免疫组织化学结果示:诱导培养7 d,各组均未检测到TNC表达;7、14、21 d A、B、C组Ⅰ型胶原表达均显著高于D组,14、21 d A、B、C组Ⅲ型胶原表达显著高于D组,差异均有统计学意义(P<0.001)。B组Ⅰ型胶原表达以及A、C组Ⅲ型胶原、TNC表达随时间增加均呈逐渐增高趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。实时荧光定量PCR结果示:诱导培养21 d,C组Ⅰ型胶原、TNC m RNA相对表达量显著高于A、B组,B组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量显著高于A、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、C组Ⅰ型胶原、TNC以及C组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量随时间增加呈逐渐上调趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 h AMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,经体外诱导后韧带特异性基因表达上调,韧带特异性蛋白合成增加,可作为韧带组织 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 韧带组织工程 TGF-Β1 BFGF 透明质酸

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人羊膜负载人羊膜间充质干细胞对SD大鼠皮肤创面愈合的影响 被引量：12

2

作者 霍双枝 施萍 庞希宁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期611-614,I0005-I0009,共9页

目的观察人羊膜(HAM)负载人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对SD大鼠皮肤创面愈合的影响。方法采用胰酶消化HAM的上皮细胞,将hAMSCs接种于HAM上培养,然后贴覆于大鼠创面,观察创面大体变化,采用HE染色和免疫组织化学染色法检测创面愈合情况,并... 目的观察人羊膜(HAM)负载人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对SD大鼠皮肤创面愈合的影响。方法采用胰酶消化HAM的上皮细胞,将hAMSCs接种于HAM上培养,然后贴覆于大鼠创面,观察创面大体变化,采用HE染色和免疫组织化学染色法检测创面愈合情况,并与单纯羊膜组和对照组进行比较。结果 HAM负载hAMSCs组大鼠创面的平均愈合时间为(18.3±0.9)d,明显快于对照组的(26.4±0.7)d(P<0.01)和单纯羊膜组的(21.5±1.2)d(P<0.05);术后11 d和14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠的创面愈合率分别为(81.5±7.2)%和(94.3±3.6)%,明显高于对照组的(48.5±3.2)%和(74.3±4.3)%及单纯羊膜组的(68.5±4.5)%和(86.8±4.8)%(P均<0.01)。皮肤切片HE染色结果证实,HAM负载hAMSCs组大鼠的伤口愈合质量明显优于单纯羊膜组和对照组。免疫组织化学染色结果显示,术后14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠皮肤CK19阳性表皮干细胞数为48.2±3.2,明显高于单纯羊膜组的37.7±3.1(P<0.05)和对照组的29.6±2.4(P<0.01);血管内皮生长因子阳性颗粒表达数为64.5±4.5,也明显高于单纯羊膜组的52.6±3.8(P<0.05)和对照组的40.7±3.1(P<0.01)。结论 HAM负载hAMSCs可能是通过促进表皮干细胞和毛细血管再生,促进皮肤损伤修复。 展开更多

关键词 人羊膜 人羊膜间充质干细胞 创伤修复 角蛋白19 血管内皮生长因子

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NF-κB信号通路在人羊膜间充质干细胞治疗宫腔粘连中的作用 被引量：11

3

作者 勾亚婷 张文文 +8 位作者 李长江 于结 毛艳华 吴本媛 张应凤 陈芯培 黄佳月 孙聪聪 王佳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1101-1108,共8页

目的探讨IκB-α/NF-κB信号通路在人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)治疗宫腔粘连(intrauterine adhesion, IUA)中的作用机制。方法体内实验:18只SD大鼠分为Sham组、IUA模型组及hAMSCs组;采用HE及Mas... 目的探讨IκB-α/NF-κB信号通路在人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)治疗宫腔粘连(intrauterine adhesion, IUA)中的作用机制。方法体内实验:18只SD大鼠分为Sham组、IUA模型组及hAMSCs组;采用HE及Masson染色分别计数子宫内膜腺体个数及纤维化面积百分比,免疫组化法检测子宫内膜组织中IκB-α(NF-κB抑制蛋白)、核转录因子P65、E-型钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。体外实验:分别用外源性生长因子[10 ng/mL(TGF-β1+EGF+PDGF-BB),诱导组]及10 nmol/L BAY11-7082联合生长因子[10 ng/mL(TGF-β1+EGF+PDGF-BB),抑制剂组]诱导hAMSCs 5 d,以不加生长因子诱导的hAMSCs作为对照组;RT-PCR检测各组中IκB-α、角蛋白(CK-7、CK-19)的表达水平。结果体内实验:IUA模型组中IκB-α、P65、Vimentin较Sham组表达增加,E-cadherin表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);hAMSCs组中IκB-α、P65、Vimentin较IUA模型组表达下降,E-cadherin表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验:诱导组中IκB-α较对照组表达下降,CK-7表达增加;抑制剂组中CK-7、CK-19较诱导组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 hAMSCs移植具有治疗宫腔粘连的作用,其作用机制可能是通过抑制IκB-α/NF-κB通路激活从而促进hAMSCs向子宫内膜上皮细胞转化。 展开更多

关键词 宫腔粘连 人羊膜间充质干细胞 干细胞移植 NF-ΚB

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人羊膜间充质干细胞与骨髓间充质干细胞对外周血淋巴细胞的免疫调节作用比较 被引量：6

4

作者 宋洁 高雅 +4 位作者 卓伟彬 杨春燕 许影 平宝红 孙海涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期780-785,共6页

目的比较人羊膜间充质干细胞(h AMSC)与骨髓间充质干细胞(h BMSC)对异体外周血淋巴细胞的免疫调节功能,为临床应用h AMSC治疗移植物抗宿主病提供实验依据。方法通过酶消化法和Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分别分离出人羊膜间充质干细... 目的比较人羊膜间充质干细胞(h AMSC)与骨髓间充质干细胞(h BMSC)对异体外周血淋巴细胞的免疫调节功能,为临床应用h AMSC治疗移植物抗宿主病提供实验依据。方法通过酶消化法和Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分别分离出人羊膜间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,体外扩增培养间充质干细胞(MSC),获取第4代细胞,建立MSC与经植物血凝素(PHA)刺激的异体人外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系,采用流式细胞术分析比较两种不同共培养体系中T淋巴细胞亚群的变化情况,采用ELISA法比较两种MSC共培养体系中细胞因子白介素2(IL-2)及白介素10(IL-10)的分泌水平。结果 (1)h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组Treg、Th2、Tc2细胞亚群的比例均较PBMC+PHA组明显上升(P<0.05),Th1、Tc1细胞亚群的比例均较PBMC+PHA组明显下降(P<0.05),且h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组T细胞亚群的变化差异无统计学意义(P>0.05);(2)ELISA结果提示,与PBMC+PHA组相比,h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PHA+PBMC共培养组上清液中IL-2的水平均明显下降(P<0.05),h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PHA+PBMC共培养组上清液中IL-10水平均明显上升(P<0.05),h AMSC+PBMC+PHA、h BMSC+PBMC+PHA共培养组上清液中IL-2、IL-10含量的变化无统计学差异(P>0.05)。结论 h AMSC、h BMSC对外周血淋巴细胞具有相似的免疫调节功能,提示h AMSC可能为移植物抗宿主病的预防和治疗提供一种新的选择。 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 人骨髓间充质干细胞 淋巴细胞 白介素2 白介素10 免疫调节

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人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞的研究进展 被引量：6

5

作者 薛玲玲 陈锦阳 +1 位作者 庄盼 刘军权 《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 2021年第3期184-188,共5页

人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞存在于人羊膜组织中,统称为人羊膜细胞。人羊膜细胞可塑性强,具有多向分化的潜能;并且免疫原性低,移植不会发生免疫排斥反应,成为近年来研究的热点。人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞的生物学特... 人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞存在于人羊膜组织中,统称为人羊膜细胞。人羊膜细胞可塑性强,具有多向分化的潜能;并且免疫原性低,移植不会发生免疫排斥反应,成为近年来研究的热点。人羊膜上皮细胞和人羊膜间充质干细胞的生物学特性使其符合干细胞药物产品的标准,将其应用于诸多疾病的治疗,如心肌梗死、脑梗死和肾损伤等,均已取得良好的疗效,此外还为许多疑难杂症提供了治疗方向。本文将从羊膜细胞的生物学特性、分离方法、表面标记物、分化潜能和对相关疾病的研究进展等方面进行综述。 展开更多

关键词 人羊膜上皮细胞 人羊膜间充质干细胞 生物学特性 分化潜能

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人羊膜间充质干细胞对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子影响的研究

6

作者 朱秀连 崔培 +6 位作者 詹球 李榕生 蒙凤姬 朱富军 杨福旺 童亚林 辛海明 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第5期528-534,共7页

背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染... 背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cells,AT-Ⅱ)增殖、凋亡及炎症因子的影响。方法采用酶消化法分离培养hAMSCs和AT-Ⅱ,采用流式细胞术和免疫荧光分别鉴定hAMSCs和AT-Ⅱ;松木屑烟雾溶液染毒AT-Ⅱ复制烟雾诱导的细胞损伤。实验细胞分为对照组(无血清DMEM/F12)、致伤组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒)和治疗组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒,hAMSCs与AT-Ⅱ共培养)。采用CCK-8检测细胞的增殖活性;Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;Elisa检测炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-10的表达。结果与对照组比较,致伤组AT-Ⅱ的活性降低(P<0.01),经hAMSCs治疗后,与致伤组比较,AT-Ⅱ细胞活性增加(P<0.01);致伤组细胞的凋亡率在12 h和24 h均增加(P<0.01),hAMSCs治疗后细胞凋亡率降低(P<0.01);细胞致伤后炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量增加(P<0.05),经hAMSCs共培养12 h和24 h后,促炎因子TNF-α和IL-6的表达均下调(P<0.05),IL-10含量增加(P<0.05)。结论hAMSCs可以促进松木屑烟雾溶液诱导的AT-Ⅱ增殖和抑制细胞凋亡,可能与调节炎症因子的表达有关,为探究hAMSCs治疗烟雾引起的急性肺损伤提供理论依据。 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 肺泡Ⅱ型上皮细胞 增殖 凋亡 炎症因子

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表皮生长因子影响人羊膜间充质干细胞迁移的机制 被引量：6

7

作者 李彩虹 施萍 庞希宁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期606-610,共5页

目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAM... 目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAMSCs的迁移能力,W estern blot检测各组磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化AKT(P-AKT)和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)及金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达情况,RNA-Seq技术对EGF组和对照组细胞中差异表达基因进行分析。结果 EGF组细胞的迁移能力明显高于对照组(P=0.0361),抑制剂AG1478+EGF组(P=0.0113)、抑制剂LY294002+EGF组(P=0.0169)和抑制剂U0126+EGF组(P=0.0293)明显低于EGF组。EGF可增加hAMSCs的P-EGFR、P-AKT和P-ERK1/2及MMP-2的表达,但P-AKT和P-ERK表达的增加可被AG1478和LY294002抑制。对EGF组和对照组细胞中差异表达基因的GO功能富集分析和KEGG代谢途径分析结果表明,EGF组细胞中发生转录上调的基因主要参与转录调节、蛋白质修饰、凋亡抑制等生命过程,其中与MAPK信号通路有关的基因为DUSP5、IL1B、DUSP6、NGF和HSPA2。结论 EGF引起的hAMSCs迁移可能是通过PI3K/AKT、ERK信号通路介导的,需要MMP-2的表达,及其参与转录调节、蛋白质修饰和凋亡抑制等基因的协同表达。 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 表皮生长因子 磷脂酰肌醇激酶-3 细胞外调节蛋白激酶

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人羊膜间充质干细胞移植对CCl_4诱导的小鼠损伤肝HGF、SIRT-1、α-SMA及P^(27kip1)表达的影响 被引量：6

8

作者 丛姗 白立恒 +2 位作者 李岩 宋瑾 曹贵方 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期292-300,共9页

人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)具有自我增殖和多向分化潜能,有望为干细胞移植性治疗提供新来源,是病变组织器官损伤修复的理想种子细胞.但目前关于h AMSCs对肝损伤的修复机制仍不十分清楚.本研究采用胰蛋白酶-胶原酶消化法从羊膜组织中... 人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)具有自我增殖和多向分化潜能,有望为干细胞移植性治疗提供新来源,是病变组织器官损伤修复的理想种子细胞.但目前关于h AMSCs对肝损伤的修复机制仍不十分清楚.本研究采用胰蛋白酶-胶原酶消化法从羊膜组织中分离、纯化了间充质干细胞.免疫荧光检测表面标记波形丝蛋白(vimentin)和阶段特异表达抗原4(SSEA-4)均呈阳性.h AMSCs表达CD29、CD49d、CD73表面抗原,但不表达骨髓间充质表面抗原CD34、CD45和人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR).实时定量PCR和Western印迹检测揭示,h AMSCs移植后可提高受损肝组织中肝细胞生长因子(HGF)和沉默信息调节因子1(SIRT-1)的表达,抑制α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和周期性蛋白依赖性激酶抑制因子(P27kip1)的表达.因为上述蛋白质分子涉及肝细胞增殖、再生、凋亡调节,抑或肝纤维化过程,因此h AMSCs移植后所引起的上述分子表达变化可改善四氯化碳(CCL4)诱导的肝损伤,抑制肝细胞凋亡,促进肝细胞有丝分裂,对肝损伤有一定的修复作用.该研究为进一步探索调控肝再生、损伤修复信号通路(机制)及预防肝纤维化提供了新启示. 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 四氯化碳(CCL_4) 肝纤维化

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低氧预处理人羊膜间充质干细胞的生物学特征 被引量：5

9

作者 代敏 王帅 +6 位作者 张霓霓 黄桂林 余丽梅 胡小华 易杰 姚礼 张立刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第19期3004-3008,共5页

背景:干细胞移植治疗为许多疑难疾病带来了希望,但移植细胞存活数量少及分泌功能差,很难发挥治疗效用,致使该技术在临床应用受阻。低氧预处理可有效改善植入细胞的增殖活性、抗凋亡能力、分泌功能等生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜... 背景:干细胞移植治疗为许多疑难疾病带来了希望,但移植细胞存活数量少及分泌功能差,很难发挥治疗效用,致使该技术在临床应用受阻。低氧预处理可有效改善植入细胞的增殖活性、抗凋亡能力、分泌功能等生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞有望在组织损伤修复中发挥更好的治疗作用。目的:探讨低氧预处理对人羊膜间充质干细胞生物学特征的影响。方法:利用机械法和酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并传至第3代,将其低氧预处理(体积分数为3%O2)48 h,设置常氧(体积分数为21%O2)对照组,通过CCK-8及Edu增殖实验检测两组人羊膜间充质干细胞增殖活性及DNA合成率。将两组细胞用无血清培养基培养24 h后,Annexin V-FITC/PI实验检测细胞凋亡情况,收集上清液,采用血管生成蛋白芯片(Proteome Profiler)检测上清液中分泌的血管生成相关因子水平。结果与结论:低氧预处理不影响人羊膜间充质干细胞的干细胞特性,能提高人羊膜间充质干细胞的增殖活性;在无血清培养条件下,低氧预处理使人羊膜间充质干细胞的抗凋亡作用得到增强,同时分泌了更多量的血管相关生成因子。 展开更多

关键词 干细胞 人羊膜间充质干细胞 低氧 预处理 生物学特征 增殖 凋亡 血管生成

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脑源性神经营养因子修饰人羊膜间充质干细胞移植改善阿尔茨海默病大鼠认知功能 被引量：4

10

作者 王玉香 崔传举 +1 位作者 李彦玲 李艾帆 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第13期2045-2049,共5页

背景:研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的人间充质干细胞可用于治疗脊髓损伤和创伤性脑损伤等,但对阿尔茨海默病是否有疗效,既往鲜有报道。目的:观察脑源性神经营养因子修饰人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem ce... 背景:研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的人间充质干细胞可用于治疗脊髓损伤和创伤性脑损伤等,但对阿尔茨海默病是否有疗效,既往鲜有报道。目的:观察脑源性神经营养因子修饰人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰转移酶、基底前脑神经生长因子表达的影响。方法:40只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、hAMSCs组、BDNF-hAMSCs组,每组10只。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白25-35构建阿尔茨海默病模型,第14天后侧脑室注射10μL的hAMSCs或10μL的脑源性神经营养因子转染hAMSCs。移植后2周,采用Morris水迷宫测试评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测海马胆碱乙酰转移酶的表达,RT-PCR检测基底前脑神经生长因子mRNA的表达。结果与结论:①Morris水迷宫测试第3,4,5天时,hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期均低于模型组(P<0.05);测试第4,5天时,BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期低于hAMSCs组(P<0.05);②模型组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量明显低于对照组(P<0.05);hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量均高于模型组(P<0.05),并且BDNF-hAMSCs组高于hAMSCs组(P<0.05);③结果表明,用脑源性神经营养因子修饰hAMSCs可进一步提高hAMSCs治疗阿尔茨海默病的认知功能,并且可以明显提高海马胆碱乙酰转移酶和基底前脑神经生长因子的表达水平。 展开更多

关键词 干细胞 人羊膜间充质干细胞 脑源性神经营养因子 阿尔茨海默病 胆碱乙酰转移酶 脑神经生长因子 认知功能

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人羊膜间充质细胞分离培养及其干细胞特性研究 被引量：5

11

作者 李海建 张广静 +2 位作者 江兰 余春艳 金岩 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第2期227-229,共3页

目的:研究人羊膜间充质细胞(Humanamnioticmesenchymalcells,HAMCs)的分离、培养及其干细胞特性,为羊膜间充质细胞在再生医学的潜在应用奠定实验基础。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,经胰酶胶原酶序贯消化,DMEM/F1... 目的:研究人羊膜间充质细胞(Humanamnioticmesenchymalcells,HAMCs)的分离、培养及其干细胞特性,为羊膜间充质细胞在再生医学的潜在应用奠定实验基础。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,经胰酶胶原酶序贯消化,DMEM/F12培养,倒置显微镜下观察其形态,MTT法检测其生长规律,免疫荧光的方法对细胞进行鉴定,定向诱导方法检测细胞的多向分化潜能。结果:来源于羊膜的间充质细胞,细胞免疫荧光显示SSEA-4,OCT-4阳性,具有很强的增殖能力,并且具有一定的多向分化能力,在特定条件下可分化为脂肪细胞和成骨细胞;结论:羊膜间充质细胞能够在体外分离、培养、扩增,并且具有干细胞特性。羊膜间充质细胞在再生医学和组织工程应用有很好的前景。 展开更多

关键词 羊膜间充质细胞 细胞培养 干细胞 组织工程

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针刺对人羊膜间充质细胞移植治疗去卵巢大鼠骨质疏松的协同效应 被引量：5

12

作者 陈玉敏 陈涛平 +2 位作者 韩翠玉 史同焕 董淑香 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期43-49,共7页

目的探讨针刺联合人羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cells,HAMCs)移植对去卵巢骨质疏松协同效应研究。方法选择雌性未孕的Wistar大鼠45只,完全随机分组分为假手术组、模型组及实验组(针刺+人羊膜间充质细胞移植),每组各15... 目的探讨针刺联合人羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cells,HAMCs)移植对去卵巢骨质疏松协同效应研究。方法选择雌性未孕的Wistar大鼠45只,完全随机分组分为假手术组、模型组及实验组(针刺+人羊膜间充质细胞移植),每组各15只。各组手术伤口恢复后,第7天开行针刺+尾静脉注射HAMCs液(假手术组除外)连续干预12周,于末次干预后24 h,处死大鼠并采集标本。从开始干预至处死,每周测定1次各组大鼠的体质量,双能X线吸收骨密度仪分别测定左侧股骨中点、远端和近端骨密度,用原子吸收法测定其骨钙含量;干预12周后采用ELISA法检测血清25-羟基维生素D(25-HVD)、I型胶原C端肽(CTX-I)、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)的表达变化;干预12周后检测各组大鼠生物力学性能的变化。干预12周后RT-PCR技术检测椎骨中转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达情况。结果假手术组大鼠体重逐渐增加,符合动物自然生长规律,模型组于造模后两个月开始,体重却明显高于假手术组,实验组体重渐增,与假手术组相近。模型组比较假手术组的骨密度和骨钙含量均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与模型组较,实验组的骨密度和骨钙含量含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA法显示,血清25-HVD、CTX-I、BAP、TRAP5b的表达,与假手术组比较,模型组显著降低,与模型组比较,实验组显著升高,(P<0.05)。生物法力学检测显示,假手术组的极限载荷、极限应力和弹性模量比模型组有显著增高(P<0.05),实验组的极限载荷和弹性模量比假手术组有显著增高(P<0.05)。RT-PCR检测显示TGF-β1的m-RNA的表达,与假手术组、模型组比较,实验组明显上调(P<0.05)。结论针刺联合人羊膜间充质细胞(HAMCs)移植具有较好的对去卵巢骨质疏松协同效应,可改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用。 展开更多

关键词 人羊膜间充质细胞 针刺 移植 去卵巢 大鼠 骨质疏松

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hAMSCs调控MAPK信号通路对急性肺损伤AQP1的影响 被引量：1

13

作者 李埝 赵建军 +1 位作者 张建勇 赵睿桢 《中华肺部疾病杂志（电子版）》 2023年第2期156-163,共8页

目的 分析人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stromal cells, hAMSCs)移植后对急性肺损伤(acute lung injury, ALI)大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的影响及对肺损伤的作用机制... 目的 分析人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stromal cells, hAMSCs)移植后对急性肺损伤(acute lung injury, ALI)大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的影响及对肺损伤的作用机制。方法 随机将84只SD雄性大鼠分为4组(n=21):生理盐水对照组(NS组)、LPS诱导ALI模型组(LPS组)、hAMSCs对照组(NH组)及hAMSCs干预组(LH组)。LPS组和LH组大鼠通过舌下静脉注射LPS(4 mg/kg)造模;NS组和NH组大鼠通过舌下静脉注射250μl生理盐水,2 h后NH组和LH组大鼠通过尾静脉注射250μl经DAPI标记的hAMSCs(2.5×10^(6)个);NS组和LPS组大鼠通过尾静脉注射250μl生理盐水。每组分别于6 h、12 h、72 h随机处死7只大鼠观察hAMSCs在每组中的定植情况、肺组织病理形态,湿干重比值(W/D),Elisa法检测BALF中TNF-α、IL-1β水平,IHC及WB法检测各组大鼠肺组织AQP1、p38MAPK和p-p38 MAPK的表达。结果 (1)NH和LH组大鼠肺泡周围有蓝色荧光标记的hAMSCs, LH组分布较多,NH组分布较少;(2)NS组、NH组对应时相点的大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中TNF-α和IL-1β水平、AQP1和p-p38 MAPK蛋白表达量相比较无显著性差异(P>0.05);(3)与NS组、NH组时相点相比较,LPS组、LH组对应时相点大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中TNF-α、IL-1β水平和p-p38 MAPK蛋白表达量升高,AQP1表达量降低(P<0.05);(4)LPS 6 h组与12 h组大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中TNF-α和IL-1β水平、AQP1和p-p38 MAPK蛋白表达量无明显差异(P>0.05);与LPS 6 h组、12 h组相比较,LPS 72 h组大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中IL-1β和TNF-α水平、p-p38 MAPK蛋白表达量降低,AQP1表达量升高(P<0.05);LH 6 h组与12 h组大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中IL-1β和TNF-α水平、AQP1和p-p38 MAPK蛋白表达量无明显差异(P>0.05);与LH 6 h组、12 h组相比较,LH 72 h组大鼠肺组织病理评分、W/D比值、BALF中IL-1β和TNF-α水 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 脂多糖 急性肺损伤 水通道蛋白1

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TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究 被引量：5

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作者 邹刚 李豫皖 +6 位作者 金瑛 朱喜忠 杨继滨 王胜民 尤奇 熊华章 刘毅 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期582-593,共12页

目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细� 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 韧带成纤维细胞 TGF—β1 VEGF 组织工程韧带

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人羊膜间充质干细胞在女性生殖系统的应用前景 被引量：1

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作者 许发亚 何琪 +2 位作者 李细艳 涂皎 肖雁冰 《生殖医学杂志》 CAS 2023年第6期963-967,共5页

人羊膜间质干细胞具有来源广泛、对供体无创伤、低免疫原性、无明显致瘤性、多种分化潜能的特点,其通过趋化作用到达目标组织,同时能分泌多种细胞因子,具有抗炎、抗纤维化、促进组织修复和再生的功能。女性卵巢功能减退会导致排卵异常... 人羊膜间质干细胞具有来源广泛、对供体无创伤、低免疫原性、无明显致瘤性、多种分化潜能的特点,其通过趋化作用到达目标组织,同时能分泌多种细胞因子,具有抗炎、抗纤维化、促进组织修复和再生的功能。女性卵巢功能减退会导致排卵异常、生殖激素分泌不足等,而子宫内膜基底层受损导致自身修复不良,从而造成生殖系统病变。目前临床上的常规治疗方法并不能满足患者的生育需求,多项研究表明,人羊膜间充质干细胞在女性生殖领域具有较好的应用前景。本文总结人羊膜间充质干细胞的生理特性,探讨其在女性生殖的应用前景。 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 生殖 组织修复 卵巢早衰 宫腔粘连

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静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能 被引量：5

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作者 方宁 王钰莹 +3 位作者 陈代雄 余丽梅 章涛 赵春华 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第12期1516-1522,共7页

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 心肌梗死 移植 分化 心功能

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人羊膜间充质干细胞改善小鼠自身免疫性卵巢功能不全及子宫内膜容受性 被引量：5

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作者 李林艳 刘荣霞 +4 位作者 彭淋珅 范振海 何青 陈辉 余丽梅 《中华生殖与避孕杂志》 CSCD 北大核心 2021年第12期1062-1070,共9页

目的探索人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对自身免疫性早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠卵巢功能和子宫内膜容受性的影响。方法使用透明带3多肽-弗氏免疫佐剂诱导小鼠... 目的探索人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对自身免疫性早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠卵巢功能和子宫内膜容受性的影响。方法使用透明带3多肽-弗氏免疫佐剂诱导小鼠自身免疫性POI,一次性尾静脉注射移植hAMSCs 1×106细胞/只,将动物分为正常组(n=10)、模型组(n=15)、hAMSCs组(n=15),阴道涂片监测动情周期,酶联免疫法检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hornome,FSH)、雌二醇与抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)含量,HE染色观察卵巢和子宫病理组织学变化,免疫组织化学检测子宫同源框A10(homeobox A10,HOXA10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和FSH受体(FSH receptor,FSHR)蛋白表达,综合评价子宫内膜容受性。结果hAMSCs移植6周,hAMSCs组动情周期异常率[40.00%(6/15)]低于模型组[86.67%(13/15),P=0.021]。与模型组血清FSH[(10.239±1.091)μg/L]、雌二醇[(103.325±4.952)ng/L]和AMH[(1.133±0.494)μg/L]水平相比,hAMSCs组FSH水平[(7.664±0.735)μg/L]明显降低(P<0.001),雌二醇[(126.883±23.370)ng/L]和AMH[(2.204±0.453)μg/L]水平均明显升高(P=0.015,P<0.001)。与模型组不同,hAMSCs组卵巢指数、子宫指数增高;卵巢组织不同发育阶段的卵泡数增加,间质纤维化和闭锁卵泡少见,子宫壁与子宫内膜增厚,腺体数量和体积增加。HOXA10吸光度(absorbance,A)值hAMSCs组(5.90±1.94)高于模型组(2.79±1.27,P=0.029),TNF-αA值hAMSCs组(3.83±1.23)低于模型组(6.26±0.96,P=0.002);FSHR A值hAMSCs组(3.61±1.66)与模型组(2.74±0.22)差异无统计学意义(P>0.05),但模型组低于正常组(4.13±0.54,P=0.006)。结论移植hAMSCs在恢复自身免疫性POI小鼠卵巢功能的同时,可明显改善子宫内膜容受性,有助于提高生育能力。 展开更多

关键词 原发性卵巢功能不全 人羊膜间充质干细胞 子宫内膜容受性 同源框A10 肿瘤坏死因子-Α 卵泡刺激素受体

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人羊膜间充质干细胞移植骨髓抑制小鼠的造血功能 被引量：3

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作者 姚观平 余丽梅 +6 位作者 范振海 方宁 任飞 罗娇 张小雨 王钰莹 刘金伟 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第23期4248-4255,共8页

背景:大剂量化疗药物可造成严重的骨髓损伤,除药物治疗外,干细胞移植已越来越多的用于骨髓损伤的治疗。目的:观察人羊膜间充质干细胞移植对顺铂所致骨髓抑制小鼠造血功能恢复的影响。方法:体外培养人羊膜间充质干细胞,雌性ICR小鼠被随... 背景:大剂量化疗药物可造成严重的骨髓损伤,除药物治疗外,干细胞移植已越来越多的用于骨髓损伤的治疗。目的:观察人羊膜间充质干细胞移植对顺铂所致骨髓抑制小鼠造血功能恢复的影响。方法:体外培养人羊膜间充质干细胞,雌性ICR小鼠被随机分为3组,除空白组外,其余小鼠腹腔注射顺铂诱导ICR小鼠制备骨髓抑制模型,建模后人羊膜间充质干细胞移植组小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞3.0×105/g,空白组和模型组注射等量PBS。结果与结论:连续给予顺铂7d后,ICR小鼠体质量明显降低,但模型组与人羊膜间充质干细胞移植组之间差异无显著性意义。模型组小鼠外周血白细胞、淋巴细胞、单个核细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积和血小板等水平明显低于空白组(P<0.01),于首次给顺铂后第21天开始恢复。人羊膜间充质干细胞移植组外周血的上述指标较模型组提前7d开始恢复,第21天时,已接近或达到空白组水平;与空白组相比,人羊膜间充质干细胞移植后的一两天及移植后的2周出现了一过性的白细胞增高和血小板数增加。第24天,人羊膜间充质干细胞移植组小鼠股骨髓腔冲洗液有核细胞数明显高于模型组(P<0.05),骨髓组织病理学检查结果也显示,人羊膜间充质干细胞移植组小鼠股骨骨髓组织结构明显改善,与空白组相似,骨髓细胞数明显增多,可见较多的巨核细胞,且人羊膜间充质干细胞移植组后2周,骨髓组织可见分布较广的小鼠抗人核单克隆抗体-FITC阳性的移植细胞定植。以上结果表明,人羊膜间充质干细胞移植治疗较早地改善顺铂所致骨髓抑制小鼠的造血功能。 展开更多

关键词 干细胞 干细胞移植 人羊膜间充质干细胞 顺铂 骨髓抑制 造血功能 小鼠 白细胞 红细胞 淋 巴细胞 单个核细胞 血红蛋白 红细胞压积 血小板 国家自然科学基金 干细胞图片文章

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Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子体外促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞的定向分化 被引量：4

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作者 桑鹏 刘毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4644-4650,共7页

背景:人羊膜间充质干细胞具有多向分化能力,相关研究表明Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子均能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞定向分化。目的:探讨Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子促进人羊膜间充质干细胞向人韧带... 背景:人羊膜间充质干细胞具有多向分化能力,相关研究表明Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子均能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞定向分化。目的:探讨Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞分化的效果。方法:经遵义医学院附属医院伦理委员会批准,术前签署知情同意书,取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态;苏木精-伊红染色观察新鲜人羊膜结构;取第3代人羊膜间充质干细胞分4组进行培养:①单纯人羊膜间充质干细胞培养组;②人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染组;③人羊膜间充质干细胞经碱性成纤维细胞生长因子诱导组;④人羊膜间充质干细胞经Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子联合诱导组。细胞培养3d开始采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;细胞培养14 d后,实时荧光定量PCR评价各组细胞向人韧带成纤维细胞定向分化的效果。结果与结论:①第3代人羊膜间充质干细胞呈长梭形、涡旋状贴壁生长;②新鲜人羊膜呈明显的分层结构,共分为5层:上皮层、基底层、致密层、纤维母细胞层和海绵层;③人羊膜间充质干细胞经Scleraxis基因慢病毒感染24h后表达绿色荧光,荧光表达量较强且稳定;经过碱性成纤维细胞生长因子诱导后14d的形态近似于人韧带成纤维细胞;④CCK-8实验结果显示:4组细胞均呈S型生长,其中Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组较单纯培养组增殖能力强(P <0.05),但这3组间的增殖能力差异无显著性意义(P> 0.05);⑤实时荧光定量PCR显示:Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组韧带相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C、TNMD的m RNA表达量均高于单纯 展开更多

关键词 人羊膜间充质干细胞 SCLERAXIS 碱性成纤维细胞生长因子 定向分化 人韧带成纤维细胞 慢病毒感染 组织工程

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Runx2基因诱导人羊膜MSCs体外向韧带成纤维细胞定向分化及促进兔腱-骨愈合的研究

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作者 谢淘 仲鹤鹤 +4 位作者 金瑛 刘修齐 陈方 向宽 吴术红 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1523-1532,共10页

目的探讨Runx2基因是否具有体外诱导人羊膜MSCs(human amniotic MSCs,hAMSCs)向韧带成纤维细胞分化以及在体内能否促进兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合。方法取健康产妇自愿捐赠胎盘分离培养hAMSCs并传代后行流式细胞鉴定。构建携带Runx2... 目的探讨Runx2基因是否具有体外诱导人羊膜MSCs(human amniotic MSCs,hAMSCs)向韧带成纤维细胞分化以及在体内能否促进兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合。方法取健康产妇自愿捐赠胎盘分离培养hAMSCs并传代后行流式细胞鉴定。构建携带Runx2基因的腺病毒载体(Ad-Runx2)以及空质粒载体腺病毒(Ad-NC),经病毒滴度测定后分别转染第3代hAMSCs(Ad-Runx2组、Ad-NC组),实时荧光定量PCR及Western blot检测Runx2基因及蛋白表达,验证Ad-Runx2基因转染hAMSCs有效性;然后于转染后培养3、7 d时,进一步采用实时荧光定量PCR检测韧带成纤维细胞相关基因[VEGF、Ⅰ型胶原、纤连蛋白(Fibronectin)和肌腱蛋白C(Tenascin-C)]表达;以单纯hAMSCs作为空白对照组。将单纯hAMSCs以及转染Ad-NC、Ad-Runx2的hAMSCs分别与基质胶(Matrigel)按照体积比1∶1和1∶2混合构建复合物,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,取增殖较好的对应复合物进行后续动物实验。将12只新西兰白兔随机分为假手术组(Sham组)、前交叉韧带重建组(ACLR组)、前交叉韧带重建+Ad-NC组(Ad-NC组)、前交叉韧带重建+Ad-Runx2组(Ad-Runx2组)4组,每组3只。制备前交叉韧带重建模型后,Ad-NC组、Ad-Runx2组于骨道内对应注射最佳hAMSCs-Matrigel复合物。术后1个月取材行大体、组织学(HE染色及天狼猩红染色)、免疫荧光染色观察,评价韧带组织中炎症细胞浸润以及Ⅰ/Ⅲ型胶原、Tenascin-C含量。结果流式细胞鉴定分离培养细胞符合MSCs表型特征。Runx2基因成功转染至hAMSCs;与Ad-NC组相比,Ad-Runx2组转染后VEGF及Ⅰ型胶原基因相对表达量于培养3、7 d时均增高(P<0.05),Fibronectin仅3 d时增高(P<0.05),而Tenascin-C于3 d时增高、7 d时降低(P<0.05)。CCK-8检测示两种比例混合培养后,细胞增殖组间以及组内各时间点间差异均无统计学意义(P>0.05),选择1∶1比例构建复合物进行后续实验。动物实验显� 展开更多

关键词 Runx2基因 人羊膜MSCs 韧带成纤维细胞 腱-骨愈合 韧带组织工程

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