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人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化 被引量:1
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作者 刘磊 许淑芬 +1 位作者 方艳秋 谭岩 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期434-436,共3页
目的构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白,为其临床应用奠定基础。方法根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SODcDNA序列。将所得的PCR产物插... 目的构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白,为其临床应用奠定基础。方法根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SODcDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,重组质粒经酶切,PCR及测序鉴定正确后,将目的片段插入原核表达载体PET20b(+)中并转化大肠杆菌DE3,通过IPTG诱导表达出目的蛋白,经镍固定金属亲和层析纯化。采用邻苯三酚自身氧化法测定SOD生物学活性。结果序列分析表明SOD基因成熟肽编码区含有465bp与GenBank(X02317)中已报道序列一致的SOD核苷酸。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示表达的目的蛋白分子质量约为19kD并与商品化的人SOD单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA琼脂糖纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带。可溶蛋白酶活力达1300U/ml。结论在大肠杆菌中获得了人SOD的高效表达,为研究其生物学功能和广泛应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人超氧化物歧化酶 表达纯化 大肠杆菌
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人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测 被引量:4
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作者 周宇飞 周峻岗 +1 位作者 袁汉英 吕红 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期178-184,共7页
为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过N... 为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达到80%以上.用邻苯三酚自氧化法和E-玫瑰花法分别测定了人超氧化物歧化酶酶活性和胸腺素活性.结果表明,融合蛋白6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1的超氧化物歧化酶比活性分别为120 998±5 206 U/mg和31 279±1 121 U/mg;融合蛋白在1×10-7mol/L浓度下的E玫瑰花结率分别为(38.4±1.6)%和(36.6±0.2)%.结果说明:融合蛋白中由5个氨基酸G4S构成的连接肽能有效地保障2个蛋白质各自的结构特征,使融合蛋白既有超氧化物歧化酶的活性,又具有胸腺素的活性. 展开更多
关键词 胸腺素Α1 人超氧化物歧化酶 融合蛋白 Ni-NTA亲和层析纯化 活性测定
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人SOD基因的克隆与原核表达 被引量:3
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作者 宋凯 宋继梅 《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期91-94,共4页
超氧化物歧化酶(SOD)是机体内超氧自由基的天然清除剂,在抗衰老、抗辐射、抗逆境,消炎、抑制肿瘤和癌症,以及自身免疫疾病的治疗方面有很重要的作用。我国目前主要从血液中提取SOD,有关重组人SOD的研究较少。文章通过RT-PCR方法克隆得到... 超氧化物歧化酶(SOD)是机体内超氧自由基的天然清除剂,在抗衰老、抗辐射、抗逆境,消炎、抑制肿瘤和癌症,以及自身免疫疾病的治疗方面有很重要的作用。我国目前主要从血液中提取SOD,有关重组人SOD的研究较少。文章通过RT-PCR方法克隆得到人SOD基因,并成功构建其原核表达载体pET-16b-SOD,为通过基因重组技术生产人SOD创造了条件。 展开更多
关键词 人超氧化物歧化酶 基因克隆 原核表达
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化学渗透法破碎基因重组E.coli提取重组人SOD包含体和复性 被引量:5
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作者 刘建荣 王慧 +1 位作者 赵晓瑜 静天玉 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期96-102,共7页
以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol&... 以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性。选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol·L-1 EDTA可以较好地破碎重组大肠杆菌细胞,所提取的包含体溶解液纯度与超声法相近,可达65%左右。采用透析法复性包含体,尿素终浓度0.1 mol·L-1时rhSOD包含体复性效果优于1.0 mol·L-1,比活分别为:Triton法2800 U·mg-1,EDTA法3200 U·mg-1,超声法2800 U·mg-1,复性rhSOD纯度达85%左右。本研究建立的用于破碎重组大肠杆菌释放rhSOD包含体的Triton法和EDTA法,包含体复性后比活等于或高于超声法,与机械破菌法相比,简便有效,成本低廉,无需特殊破菌设备,为放大规模破菌提取重组大肠杆菌包含体和复性奠定了实验基础。 展开更多
关键词 重组人超氧化物歧化酶 化学渗透 细胞破碎 包含体 复性
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重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化 被引量:3
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作者 朱希强 袁勤生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期252-255,共4页
目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC... 目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。 展开更多
关键词 重组人 稀释 叠后 定性定量分析 蛋白纯化 纯化效率 包涵体蛋白 蛋白浓度 氧化还原 基本条件 金属离子 尿素浓度 复性效率 蛋白溶液 IMAC 最佳条件 酸浓度 体外 对比率 亲和 GSH 温度 肝素
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EFFECT OF IONIZING RADIATION ON IMMUNOLOGICAL PROPERTY OF HUMAN CuZn-SOD
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作者 刘智峰 方允中 魏康 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1989年第23期1966-1970,共5页
By the indirect action of ionizing radiation in living bodies, oxygen free radicals as OH and O, can be brought about, giving rise to the damage of biomacromolecules. It is requisite to consider whether or not the cha... By the indirect action of ionizing radiation in living bodies, oxygen free radicals as OH and O, can be brought about, giving rise to the damage of biomacromolecules. It is requisite to consider whether or not the change of copper-zinc superoxide dismutase 展开更多
关键词 lonizing RADIATION IMMUNOLOGICAL PROPERTY human CUZN-sod
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