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表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
李雅婧
诸葛福艳
+3 位作者
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
《重庆医学》
CAS
北大核心
2017年第32期4465-4468,4472,共5页
目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达...
目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达。结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5mRNA凝胶电泳可见193bp和75bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P<0.01);Western blot检测可见55.0×10~3(hCD4)和40.6×10~3(hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性。转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1RNA均显著升高(P<0.05)。结论成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究。
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关键词
骨髓间充质干细胞
HIV-1
细胞模型
h
cd
4
/
ccr
5
基因表达
下载PDF
职称材料
表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建
2
作者
李雅婧
诸葛福艳
+3 位作者
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
《华夏医学》
CAS
2016年第5期6-11,共6页
目的:构建一种高效转染h CD4和h CCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达h CD4和h CCR5的质粒载体PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用q RT-PCR方法检测293T细胞中h CD4/CCR5的m...
目的:构建一种高效转染h CD4和h CCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达h CD4和h CCR5的质粒载体PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用q RT-PCR方法检测293T细胞中h CD4/CCR5的m RNA表达。将本慢病毒载体转染于小鼠白血病细胞L615,应用q RT-PCR检测细胞内h CD4/CCR5 m RNA的表达及对HIV-1的易感性。结果:成功构建PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5质粒表达载体,包装成的慢病毒载体在293T细胞中具有h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05);转染于L615细胞亦表现出h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05),并具备了HIV-1入胞感染的特点。结论:成功建立h CD4和h CCR5基因双启动的慢病毒载体,可使目的细胞高效表达h CD4及h CCR5分子,对HIV-1宿主细胞的制备、HIV/AIDS的发病机制和抗病毒研究具有积极的意义。
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关键词
慢病毒载体
H
cd
4
/h
ccr
5
质粒
基因表达
下载PDF
职称材料
题名
表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
李雅婧
诸葛福艳
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
机构
广东医科大学附属龙华中心医院
桂林医学院生物技术学院
中山大学生命科学院
广州中医药大学热带医学研究所
桂林医学院广西肝脏损伤与修复分子医学重点实验室
出处
《重庆医学》
CAS
北大核心
2017年第32期4465-4468,4472,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(81660755
81573861)
深圳市科技计划项目(JCYJ20170307160524377)
文摘
目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达。结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5mRNA凝胶电泳可见193bp和75bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P<0.01);Western blot检测可见55.0×10~3(hCD4)和40.6×10~3(hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性。转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1RNA均显著升高(P<0.05)。结论成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究。
关键词
骨髓间充质干细胞
HIV-1
细胞模型
h
cd
4
/
ccr
5
基因表达
Keywords
mesenchymal
stem
cells
HIV-1
cell
model
human
cd
4
and
ccr
5
gene
expression
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建
2
作者
李雅婧
诸葛福艳
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
机构
桂林医学院生物技术学院
中山大学生命科学院
广州中医药大学热带医学研究所
桂林医学院广西肝脏损伤与修复分子医学重点实验室
出处
《华夏医学》
CAS
2016年第5期6-11,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(81660755
81573861)
文摘
目的:构建一种高效转染h CD4和h CCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达h CD4和h CCR5的质粒载体PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用q RT-PCR方法检测293T细胞中h CD4/CCR5的m RNA表达。将本慢病毒载体转染于小鼠白血病细胞L615,应用q RT-PCR检测细胞内h CD4/CCR5 m RNA的表达及对HIV-1的易感性。结果:成功构建PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5质粒表达载体,包装成的慢病毒载体在293T细胞中具有h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05);转染于L615细胞亦表现出h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05),并具备了HIV-1入胞感染的特点。结论:成功建立h CD4和h CCR5基因双启动的慢病毒载体,可使目的细胞高效表达h CD4及h CCR5分子,对HIV-1宿主细胞的制备、HIV/AIDS的发病机制和抗病毒研究具有积极的意义。
关键词
慢病毒载体
H
cd
4
/h
ccr
5
质粒
基因表达
Keywords
lentiviral
vector
human
cd
4
and
ccr
5
plasmid
gene
expression
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立
李雅婧
诸葛福艳
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
《重庆医学》
CAS
北大核心
2017
1
下载PDF
职称材料
2
表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建
李雅婧
诸葛福艳
梁娟
何金洋
谭宁
曾常春
《华夏医学》
CAS
2016
0
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职称材料
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0
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