致病性嗜水气单胞菌多重PCR检测方法的建立 被引量：42

1

作者 饶静静 李寿崧 +2 位作者 黄克和 江树勋 潘群兴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期749-755,共7页

致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S r... 致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA保守区设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,试图建立一种检测致病性嗜水气单胞菌的多重PCR检测方法。对8株嗜水气单胞菌、16株相关菌株进行多重PCR检测,结果显示,非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA和aerA,而致病性分离株则至少含有hlyA基因;对40份送检的水产动物样品进行多重PCR检测,结果与常规微生物学检测符合率为97.5%。多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,最低可检测模板量为10 ng的样品。该方法的建立对水产动物嗜水气单胞菌病的快速诊断和分子流行病学的调查有重要意义。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 hlya基因 aerA基因 多重PCR

下载PDF 职称材料

RT-PCR方法检测单核细胞增生李斯特活菌研究 被引量：12

2

作者 李善志 吴清平 +1 位作者 张菊梅 郭伟鹏 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第6期641-643,共3页

目的：建立单核细胞增生李斯特活菌快速检测技术，解决PCR带来的假阳性问题。方法：采用以mRNA为基础的RT—PCR方法对单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因进行检测，设计引物，扩增，并作了特异性和灵敏度比较。结果：该引物能较好地扩增... 目的：建立单核细胞增生李斯特活菌快速检测技术，解决PCR带来的假阳性问题。方法：采用以mRNA为基础的RT—PCR方法对单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因进行检测，设计引物，扩增，并作了特异性和灵敏度比较。结果：该引物能较好地扩增单核细胞增生李斯特菌的特异性片断，而对其它的李斯特菌以及常见食源性致病菌无特异性扩增条带；检测的灵敏度纯菌可达到1×10^4cfu／ml，人工污染样品猪肉、虾肉和牛奶等培养12—16h，可达4．5cfu／ml（g）。结论：可以应用该方法对样品中单核细胞增生李斯特活菌进行检测，能较好地解决PCR检测所带来的假阳性问题。 展开更多

关键词 MRNA RT—PCR 单核细胞增生李斯特菌 活菌检测 hlya基因

下载PDF 职称材料

单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用 被引量：12

3

作者 王金凤 刘立兵 +5 位作者 耿云云 石蕊寒 孙晓霞 南汇珠 姜彦芬 王建昌 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2018年第8期213-218,98,共7页

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃... 本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 REAL-TIME RPA hlya基因 食品安全

原文传递

单增李斯特菌反转录环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：10

4

作者 徐匆 罗华建 +5 位作者 黄皓 梁卫驱 胡珊 李艳芳 胡楚维 罗鸿斌 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第6期297-302,共6页

本研究针对单增李斯特菌的快速检测方法进行开发,首先根据单增李斯特菌hly A基因序列保守区设计2对引物,在同一体系中对单增李斯特菌的RNA进行反转录及环介导等温扩增,同时使用羟基萘酚蓝(终浓度200μM)作为反转录环介导等温扩增产物的... 本研究针对单增李斯特菌的快速检测方法进行开发,首先根据单增李斯特菌hly A基因序列保守区设计2对引物,在同一体系中对单增李斯特菌的RNA进行反转录及环介导等温扩增,同时使用羟基萘酚蓝(终浓度200μM)作为反转录环介导等温扩增产物的指示剂,在不开盖进行凝胶电泳检测的情况下,可直接根据体系颜色变化判读结果,能够在20 h内(包括增菌时间)检测出样本中是否存在单增李斯特菌的RNA。本研究建立的RT-LAMP-HNB检测方法对单增李斯特菌RNA的检出限为5.8×10^-3μg/m L,起始接种浓度检出限为10 CFU/10 mL,灵敏度是RT-PCR的10倍,且能够检测出是牛奶中否存在的单增李斯特活菌,具有实际应用价值。本研究开发的检测方法具有快速、准确、便捷、灵敏度高等特点,适用于在基层或不便利地区推广使用。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP) 羟基萘酚蓝(HNB) hlya基因 快速检测

下载PDF 职称材料

嗜水气单胞菌气溶素和溶血素基因的克隆与结构预测 被引量：11

5

作者 刘明智 叶星 +3 位作者 田园园 邓国成 马冬梅 白俊杰 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期356-362,共7页

从患出血病草鱼体上分离出1个菌株,传统分类学及16SrRNA基因鉴定其为嗜水气单胞菌,人工感染实验显示该分离菌株为强毒株。克隆该菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因,序列分析显示这2个基因只有46.7%的同源性... 从患出血病草鱼体上分离出1个菌株,传统分类学及16SrRNA基因鉴定其为嗜水气单胞菌,人工感染实验显示该分离菌株为强毒株。克隆该菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因,序列分析显示这2个基因只有46.7%的同源性。Blast分析显示,hlyA基因与GenBank上已登录的hlyA序列具有较高的同源性,而aerA基因与已登录的aerA基因以及一些hlyA序列也具有较高的同源性。对与aerA基因同源性较高的这些hlyA序列进行结构域预测,发现它们均具有APT结构域和气溶素结构域,说明它们实际上应是aerA基因,只是命名上与hlyA基因混淆。用DNAstar软件预测aerA和hlyA的抗原区,显示它们均具有很好的抗原性。用特异性引物检测菌株的aerA基因和hlyA基因,结果显示2株毒力株均有特异条带,而无毒株则未扩增到特异条带,说明aerA和hlyA有可能作为鉴定嗜水气单胞菌毒力菌株的标记。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 气溶素 溶血素 基因 序列

下载PDF 职称材料

K88ac^+和K88ad^+产肠毒素大肠杆菌hlyA基因缺失株的构建及相关功能初步分析 被引量：9

6

作者 姜露 聂佳佳 +3 位作者 杨样 羊扬 周明旭 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期524-529,共6页

为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)溶血素hlyA基因的相关生物学特性,本研究通过Red同源重组的方法构建了ETEC标准株K88ac+C83902和K88ad+C83903的hlyA基因缺失株。体外生长试验和酵解试验表明:缺失株C83902△hlyA和C83903△hlyA生长速度及... 为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)溶血素hlyA基因的相关生物学特性,本研究通过Red同源重组的方法构建了ETEC标准株K88ac+C83902和K88ad+C83903的hlyA基因缺失株。体外生长试验和酵解试验表明:缺失株C83902△hlyA和C83903△hlyA生长速度及生长周期各个阶段的特性与相应野生株相比无差异,其分解发酵糖类和氨基酸的能力也未发生改变。小鼠感染试验显示经野生株和回补株感染的小鼠致死率高,而缺失株不致死,表明hlyA基因可以增强ETEC对ICR小鼠的致病力。从感染小鼠的十二指肠、空肠、回肠分离感染的靶细菌,平板计数和PCR检测表明,ETEC在小鼠回肠的黏附能力强于在十二指肠和空肠,并且基因缺失株黏附能力比野生株显著降低。本研究首次对ETEC溶血素hlyA基因进行研究,为进一步阐释α-溶血素与机体相互作用的分子机制和ETEC的致病机制,以及预防ETEC感染提供了相关的实验依据。 展开更多

关键词 ETEC hlya基因 黏附 小鼠感染试验

下载PDF 职称材料

食品中单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度(LAMP)检测方法的建立 被引量：10

7

作者 黄朱梁 薛超波 +1 位作者 孙瑛 王萍亚 《食品工业》 北大核心 2015年第1期277-280,共4页

建立单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度LAMP检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌hly A基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法 (LAMP)建立单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法。建立的LAMP方法具有高度特异性,经对14株细菌进行扩... 建立单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度LAMP检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌hly A基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法 (LAMP)建立单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法。建立的LAMP方法具有高度特异性,经对14株细菌进行扩增,单核细胞增生李斯特氏菌为LAMP阳性,其他菌株均为LAMP阴性。建立的LAMP方法对培养的单核细胞增生李斯特氏菌的检测下限为32 CFU/m L,可在60 min内完成扩增反应。用建立的LAMP方法对160份不同食品进行检测,共检出5份LAMP阳性样本,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可节省大量时间,且对试验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 环介导等温扩增技术 hly A基因

原文传递

鱼致病性舒伯特气单胞菌双重PCR检测方法的建立 被引量：8

8

作者 刘春 李凯彬 +4 位作者 王庆 王芳 曾伟伟 石存斌 吴淑勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期54-57,共4页

为快速准确鉴别检测鳢源致病性舒伯特气单胞菌(A.schubertii),本实验根据该菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB)、溶血素基因(hlyA)的保守序列设计引物,建立了检测致病性A.schubertii的双重PCR方法。结果显示gyrB和hlyA基因扩增产物分别为601 b... 为快速准确鉴别检测鳢源致病性舒伯特气单胞菌(A.schubertii),本实验根据该菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB)、溶血素基因(hlyA)的保守序列设计引物,建立了检测致病性A.schubertii的双重PCR方法。结果显示gyrB和hlyA基因扩增产物分别为601 bp和375 bp;其最低检出菌体DNA量为2.3×10-2ng,最低检出菌数为3×102cfu。特异性试验结果显示,该方法对温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、无乳链球菌、诺卡氏菌、迟缓爱德华氏菌、荧光假单胞菌、柱状黄杆菌、哈氏弧菌以及类志贺邻单胞菌扩增结果均为阴性。应用该方法对37份临床病料样品的检测结果与传统细菌分离鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于A.schubertii的快速检测和流行病学研究。 展开更多

关键词 舒伯特气单胞菌 gyrB基因 hlya基因 双重PCR

下载PDF 职称材料

应用环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究 被引量：7

9

作者 唐梦君 高玉时 +4 位作者 周生 张小燕 唐修君 蒲俊华 葛庆联 《中国动物检疫》 CAS 2010年第9期25-28,共4页

目的建立环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌。方法根据单核细胞增生李斯特菌(LM)hlyA基因序列中的保守区域,采用在线引物设计软件Primer Explorer4.0进行设计,获得一套特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,对单核细胞增生... 目的建立环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌。方法根据单核细胞增生李斯特菌(LM)hlyA基因序列中的保守区域,采用在线引物设计软件Primer Explorer4.0进行设计,获得一套特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,对单核细胞增生李斯特菌hlyA基因进行LAMP扩增,并与常规PCR方法进行比较。结果建立的LAMP方法能成功扩增出梯形条带,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌纯培养物和人工染菌的灵敏度为5.44×102cfu/mL,而对照PCR检测的灵敏度为5.44×104cfu/mL。对10株细菌进行LAMP扩增,仅单核细胞增生李斯特菌得到阳性结果。从DNA提取到报告结果,耗时仅1h。结论 LAMP检测单核细胞增生李斯特菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便,有望发展成为快速检测食品中单核细胞增生李斯特菌的有效手段。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特菌 环介导等温扩增技术 hlya基因

下载PDF 职称材料

食品中单核细胞增生性李斯特菌的快速分离鉴定 被引量：6

10

作者 何勇琴 潘迎捷 卢瑛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期215-218,共4页

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,能引起人畜共患李斯杆菌病。本文采用两种不同的增菌分离方法从散装牛奶和猪肉中共分离得到8株单增李斯特菌。通过革兰氏染色、生化鉴定、PC... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,能引起人畜共患李斯杆菌病。本文采用两种不同的增菌分离方法从散装牛奶和猪肉中共分离得到8株单增李斯特菌。通过革兰氏染色、生化鉴定、PCR扩增hlyA基因、16SrDNA测序、血清分型等一系列实验对可疑菌株进行分析鉴定。综合实验结果和其他单增李斯特菌分离标准,探讨开发了一种快速分离鉴定单增李斯特菌的方法,该方法可在4～5d内完成单增李斯特菌的分离检测过程。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 快速 分离 鉴定 hlya基因 血清分型

下载PDF 职称材料

环介导等温扩增技术快速检测奶粉中的单增李斯特菌 被引量：6

11

作者 路彦霞 孟兆祥 +3 位作者 马晓燕 王羽 张先舟 张伟 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第6期703-706,共4页

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下特异、灵敏、快速的新型基因扩增技术。试验以单增李斯特菌为研究对象,根据其特有的hlyA基因设计了一套特异性引物,进行LAMP扩增。结果表明,LAMP检... 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下特异、灵敏、快速的新型基因扩增技术。试验以单增李斯特菌为研究对象,根据其特有的hlyA基因设计了一套特异性引物,进行LAMP扩增。结果表明,LAMP检测单增李斯特菌的灵敏度为2.45×101cfu/mL,其对人工感染奶粉样品的检出限为7.32×101cfu/mL。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带,特异性强。表明LAMP法适合于食品中污染单增李斯特菌的快速检测。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 LAMP hlya基因 快速检测

下载PDF 职称材料

改良LAMP检测鸡肉中单增李斯特氏菌的研究 被引量：5

12

作者 冯显显 杨倩 +5 位作者 张先舟 马晓燕 李英军 张伟 王建昌 陈启跃 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第19期130-136,共7页

本研究建立一种改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测鸡肉中单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L. monocytogenes)的方法。针对单增李斯特氏菌的溶血素基因(hlyA)设计LAMP引物,对单增李斯特... 本研究建立一种改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测鸡肉中单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L. monocytogenes)的方法。针对单增李斯特氏菌的溶血素基因(hlyA)设计LAMP引物,对单增李斯特氏菌进行特异性检测,通过荧光曲线和肉眼观察荧光颜色来判定检测结果。试验结果表明:改良LAMP方法检测单增李斯特氏菌具有良好的特异性,7株单增李斯特氏菌呈阳性结果,24株非单增李斯特氏菌呈阴性结果。与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法相比,改良LAMP方法具有灵敏度高(5.4×100 fg/μL)、检出限低(3.9×100 CFU/g)的特点,均是PCR结果的100倍。对66份鸡肉样品进行检测,得到改良LAMP方法的敏感性为100%,特异性为98.41%,符合率为98.48%。综上所述,改良LAMP方法能够快速、准确的检测单增李斯特氏菌,具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 改良环介导等温扩增方法 单增李斯特氏菌 hlya基因 检测 鸡肉

下载PDF 职称材料

环介导等温扩增技术与横向流动试纸条法快速检测单增李斯特菌的研究 被引量：5

13

作者 李秀梅 梁智选 +4 位作者 李颖 郭恋 王虹 关建军 王红军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期804-808,共5页

为建立一种快速、便捷的单增李斯特菌检测方法,本研究针对单增李斯特菌hlyA基因设计了4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的探针,采用环介导等温扩增(LAMP)与横向流动试纸条检测技术(LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的单增李斯特... 为建立一种快速、便捷的单增李斯特菌检测方法,本研究针对单增李斯特菌hlyA基因设计了4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的探针,采用环介导等温扩增(LAMP)与横向流动试纸条检测技术(LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的单增李斯特菌LAMP-LFD检测方法。通过对其反应条件进行优化,结果显示,优化后的扩增温度和时间为63℃反应50 min,完成检测全过程仅需80 min。该方法仅可以特异性地检出单增李斯特菌,而对其它6种常见食源性致病菌的检测均呈阴性。对纯细菌培养物的检测灵敏度为3.6 cfu/m L,是利用外引物建立的PCR方法的100倍。该方法重复性好。对15份牛奶和15份猪肉的细菌分离鉴定和LAMP-LFD检测表明,二者符合率为100%。研究结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测单增李斯特菌,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 hlya基因 环介导等温扩增 横向流动试纸条 检测

下载PDF 职称材料

气单胞菌aerA和hlyA两基因在溺死诊断中的应用 被引量：4

14

作者 肖成 朱晓琳 +7 位作者 徐曲毅 韩雅莉 李越 余仲昊 李欢 彭帆 刘向东 刘超 《刑事技术》 2021年第2期111-118,共8页

目的建立溺死尸体脏器气单胞菌气溶素(aerA)和溶血素(hlyA)两基因的PCR-CE检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法设计气单胞菌(Aeromonas)特异性引物aer-A1和hlyA-1,构建PCR-CE方法;扩增52种标准株... 目的建立溺死尸体脏器气单胞菌气溶素(aerA)和溶血素(hlyA)两基因的PCR-CE检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法设计气单胞菌(Aeromonas)特异性引物aer-A1和hlyA-1,构建PCR-CE方法;扩增52种标准株DNA;确定最低DNA检测浓度;检测16只实验猪和40例真实案件尸体组织样本,分别计算两对引物总阳性率。结果引物aerA-1可特异性扩增杀鲑气单胞菌和温和气单胞菌,产物片段为180bp,灵敏度分别为0.034、0.92ng;引物hlyA-1可特异性扩增杀鲑气单胞菌和嗜水气单胞菌,产物片段为150bp,灵敏度分别为0.94、0.034ng。利用aerA-1检测溺死实验猪和真实案件尸体组织样本,溺死阳性率分别为70.00%、78.38%;利用hlyA-1检测溺死实验猪和真实案件尸体组织样本,溺死阳性率分别为80.00%、83.78%。结论基于气单胞菌aerA基因和hlyA基因建立的PCR-CE检测方法进行溺死诊断,快速灵敏,特异性好,有良好的应用前景。 展开更多

关键词 法医学 溺死诊断 聚合酶链式反应-毛细管电泳 气单胞菌 aerA基因 hlya基因

下载PDF 职称材料

可视化LAMP法快速检测单增李斯特菌 被引量：4

15

作者 何晓伟 王德国 霍贵成 《食品科技》 CAS 北大核心 2013年第1期322-326,共5页

为了快速检测单增李斯特菌,以李氏溶血素基因(hlyA)为靶基因,罗丹明B衍生物作为反应指示剂(阴性为红色,阳性为蓝色),通过优化指示剂、镁离子等浓度,建立一种快速、准确的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测体系。结果表明:试剂盒法提取人工... 为了快速检测单增李斯特菌,以李氏溶血素基因(hlyA)为靶基因,罗丹明B衍生物作为反应指示剂(阴性为红色,阳性为蓝色),通过优化指示剂、镁离子等浓度,建立一种快速、准确的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测体系。结果表明:试剂盒法提取人工污染乳中该菌的基因组,LAMP体系扩增60min,通过肉眼观察扩增结果,检测限为1.08×101cfu/mL,其灵敏度是PCR法的10倍,与GB4789.30—2010相比,准确度为100%。 展开更多

关键词 环介导等温核酸扩增(LAMP) hlya基因 单增李斯特菌 罗丹明B衍生物

原文传递

霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：3

16

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第11期106-108,共3页

为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15... 为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15株试验菌株荧光定量PCR检测只有VC菌株为阳性,表明该检测方法特异性强;灵敏性试验表明该方法的灵敏度为25 cfu/m L;稳定性和重复性试验表明同一样品重复检测4次,Ct值的变异系数均小于2%;对145份临床样品进行检测,共计检出2份VC阳性样品,与行标法(SN/T 2425—2010)检测结果一致。说明该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 霍乱弧菌(VC) hlya基因 实时荧光定量PCR 快速检测 检测方法的建立

原文传递

大鲵致病性嗜水气单胞菌PCR诊断方法的建立 被引量：3

17

作者 余波 王芳 +3 位作者 罗永成 徐景峨 杨莉 史开志 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期133-135,共3页

根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌气溶素基因(hlyA)序列,设计1对特异性引物,通过对PCR反应条件进行优化,建立了检测大鲵致病性嗜水气单胞菌的PCR诊断方法。结果表明:扩增的阳性条带约为600 bp,特异性、敏感性结果显示,该PCR方法对致病... 根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌气溶素基因(hlyA)序列,设计1对特异性引物,通过对PCR反应条件进行优化,建立了检测大鲵致病性嗜水气单胞菌的PCR诊断方法。结果表明:扩增的阳性条带约为600 bp,特异性、敏感性结果显示,该PCR方法对致病性嗜水气单胞菌DNA的最低检测量为0.4 ng/L,而非致病性嗜水气单胞菌、大肠杆菌、黄杆菌、弗氏柠檬酸杆菌的扩增结果均为阴性。对123份大鲵病料进行检测,结果建立的PCR方法检测结果与细菌学和生化检验结果符合率为97.6%,表明该PCR方法能够对大鲵致病性嗜水气单胞菌样品进行快捷、灵敏、准确的检测。 展开更多

关键词 致病性嗜水气单胞菌 PCR 气溶素基因

下载PDF 职称材料

大鲵致病性嗜水气单胞菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制 被引量：3

18

作者 余波 罗永成 +4 位作者 马永兵 徐景峨 周思旋 杨莉 史开志 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1098-1103,共6页

根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌特异性的气溶素基因序列,设计1对引物,利用普通PCR技术扩增获得hlyA基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了快速检测致病性嗜水气单胞菌的... 根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌特异性的气溶素基因序列,设计1对引物,利用普通PCR技术扩增获得hlyA基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了快速检测致病性嗜水气单胞菌的SYBR GreenⅠ荧光定量诊断方法,以此为基础研制出试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对非致病性嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、迟缓爱德华菌、柱状黄杆菌均无阳性信号扩增,重复性好,灵敏度可达1.0x101拷贝/uL。结果表明研制的致病性嗜水气单胞菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等特点,适合于大鲵临床样品的检测。 展开更多

关键词 致病性嗜水气单胞菌 荧光定量PCR 气溶素基因

原文传递

中国El Tor生物型霍乱弧菌流行株中非溶血变异菌株分布及进化特征 被引量：1

19

作者 范宇峰 赵林 +7 位作者 卢昕 李旭 孙惠惠 王嘉正 刘鸣 李杰 逄波 阚飙 《疾病监测》 CAS 2019年第6期489-494,共6页

目的分析第7次霍乱大流行期间中国O1群El Tor型霍乱弧菌流行菌株中非溶血变异菌株的流行分布特征以及进化特征。方法选择1961年以来不同霍乱流行期的O1群El Tor型产毒菌株,测定溶血表型并分析其时间分布特点。比较菌株溶血素基因hlyA的... 目的分析第7次霍乱大流行期间中国O1群El Tor型霍乱弧菌流行菌株中非溶血变异菌株的流行分布特征以及进化特征。方法选择1961年以来不同霍乱流行期的O1群El Tor型产毒菌株,测定溶血表型并分析其时间分布特点。比较菌株溶血素基因hlyA的序列变异及不同序列型的分布,构建这些菌株的核心基因组进化树,分析非溶血株在进化分支中的分布及克隆化特征。结果在第7次霍乱大流行的中国霍乱流行中,溶血素基因hlyA在第1次流行高峰期后,出现了明显的序列型转换。非溶血株主要出现在始于20世纪70年代的第2次流行中,并成为多见的变异型。非溶血菌株分布在不同流行期和流行克隆中,没有形成单一的克隆化。但部分非溶血菌株克隆引起数年的流行扩散。结论 O1群El Tor型菌株的非溶血变异独立于基因组逐年累积的克隆进化,很可能是一种随机性较强的变异。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 霍乱溶血素 hlya基因 生物型 序列型 单核苷酸多态性分析

原文传递

电化学方法在李斯特氏菌毒力基因检测中的应用

20

作者 吴凌伟 刘全俊 +1 位作者 吴中伟 陆祖宏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期512-516,共5页

单核李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)是食源性李斯特氏病的病源菌,该病可引起败血病、脑膜炎、流产等。李斯特氏菌的毒力因子listeriolysin O(LLO)是引发李斯特氏病的主要原因。文章使用一种特殊的电化学方法从样品中检测编码LLO... 单核李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)是食源性李斯特氏病的病源菌,该病可引起败血病、脑膜炎、流产等。李斯特氏菌的毒力因子listeriolysin O(LLO)是引发李斯特氏病的主要原因。文章使用一种特殊的电化学方法从样品中检测编码LLO的hlyA基因。该方法以化合物Nhydroxy sulfosucc inimide(NHS)和N-(3-dimethylamion)propyl-N'-ethyl carbodiimidehydroc hloride(EDC)作为激活剂,使单链DNA探针结合到金电极表面组成工作电极,以[Co(phen)3](ClO4)3作为指示剂来检测循环伏安曲线(Cyclic voltammetry,CV),通过CV峰值的变化来估算hlyA基因的含量,从而确定LM的污染情况。这种新颖的电化学方法用于免标记的目标DNA的杂交检测,具有快速和方便的特点。 展开更多

关键词 单核李斯特氏菌 电化学 DNA检测 hlya基因

下载PDF 职称材料