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外源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策略 被引量：19
1
作者 聂东宋 梁宋平 李敏 《吉首大学学报》 2001年第3期40-44,共5页
高效表达外源蛋白 ,在理论和实践上特别是在生物制药中具有重要意义 ,巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一 .影响外源蛋白在P .pastoris中表达的因素很多 ,主要包括外源基因自身的特性、载体、宿主细... 高效表达外源蛋白 ,在理论和实践上特别是在生物制药中具有重要意义 ,巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一 .影响外源蛋白在P .pastoris中表达的因素很多 ,主要包括外源基因自身的特性、载体、宿主细胞几个方面 ,了解和灵活运用它们的联系 ,有助于获得外源基因在P . 展开更多
关键词 巴氏毕赤酵母 外源蛋白 高效表达 真核表达系统 生物制药 基因工程菌
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巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略 被引量：17
2
作者 胡世界 罗素兰 +1 位作者 张吉贞 长孙东亭 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期78-83,共6页
毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达... 毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高水平表达 表达策略
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饲料用酶制剂的研究进展与趋势 被引量：18
3
作者 杨培龙 姚斌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1844-1851,共8页
饲料用酶目前已成为世界工业酶产业中增长速度最快、势头最强劲的一部分。畜牧业开发应用饲料用酶制剂有着重大意义:可缓解饲料资源短缺、人畜争粮的局面,有利于保障粮食安全;提供更为安全、优质的动物产品,有利于保障食品安全;减轻环... 饲料用酶目前已成为世界工业酶产业中增长速度最快、势头最强劲的一部分。畜牧业开发应用饲料用酶制剂有着重大意义:可缓解饲料资源短缺、人畜争粮的局面,有利于保障粮食安全;提供更为安全、优质的动物产品,有利于保障食品安全;减轻环境污染,保障养殖业的可持续发展。饲料用酶的应用效果已在世界范围内得到公认,但酶的使用量还较低,其主要原因在于饲料用酶的性质难以满足饲料工业的要求,以及饲料用酶表达量低,生产成本较高。因此,目前的研发趋势主要体现在:1)饲料用酶基因资源的高通量筛选技术,尤其是特殊环境微生物和未培养微生物中的基因资源;2)酶蛋白的分子改良技术,利用蛋白质工程技术定向改良,创造具有优良特性的酶蛋白质分子,进一步提高饲料用酶的应用性能;3)饲料用酶高效表达和生产技术;4)饲料用酶的应用效果快速评估技术和配套应用技术体系。 展开更多
关键词 饲料酶制剂 基因克隆 高通量筛选 蛋白质工程 高效表达 应用技术
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在大肠杆菌中温度诱导高效表达猪生长激素 被引量：18
4
作者 余旭平 齐顺章 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期307-311,共5页
本实验构建了温度诱导的表达猪生长激素的表达载体,转化大肠杆菌N4830后,经温度诱导,获得了高效表达。由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot证实表达产物为猪生长激素,经扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌细胞全蛋白的30%左右。
关键词 猪 生长激素 温度 高效表达
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猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达 被引量：9
5
作者 袁改玲 才学鹏 +5 位作者 景志忠 郑亚东 骆学农 贾万忠 李辉 丁军涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期563-567,共5页
将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并... 将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并对表达产物进行SDS_PAGE和Westernblot分析、脱糖基化分析、分子筛纯化和小鼠免疫接种等表明,目的蛋白得到了高效表达并进行了适度的糖基化,易于纯化且具有免疫活性。在5L发酵罐中目的蛋白表达量达到2·54mg/mL,为制备基因工程疫苗打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 TSO18基因 毕赤酵母 高效表达
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重组人胸腺素原α在大肠杆菌中的表达优化 被引量：13
6
作者 杨旭 郭葆玉 +2 位作者 叶正良 道书艳 张冉 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第3期135-138,共4页
在 1 5L的生物反应器内 ,对重组人胸腺素原α(huPTMAα)在大肠杆菌TG 1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化 ;应用NBS MICROS 1 5L T DR型生物反应器 (1 5L) ,用工程菌E colipGEX IN/PTMA ,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓... 在 1 5L的生物反应器内 ,对重组人胸腺素原α(huPTMAα)在大肠杆菌TG 1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化 ;应用NBS MICROS 1 5L T DR型生物反应器 (1 5L) ,用工程菌E colipGEX IN/PTMA ,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓度 ,利用正交试验对发酵条件进行了优化。经 1次预试验和 9次正式试验结果表明 ,huPTMAα的表达受溶氧条件的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因子 ,当其为 2 5 0r/min时 ,表达水平最高。经SDS PAGE和凝胶扫描发现表达蛋白占菌体蛋白的 60 %以上。该实验为工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 ,对其稳定性 。 展开更多
关键词 重组人胸腺素原α 大肠杆菌 正交设计 试验 高效表达
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巨大芽孢杆菌表达外源蛋白的特点及其研究进展 被引量：13
7
作者 牟琳 王红宁 邹立扣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期93-97,共5页
巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的分泌型基因工程宿主菌,现已广泛应用于工业和学术研究领域,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。综述了其自身的优点、表达载体的特点、巨大芽孢杆菌的转化方法、外源蛋白的表达、... 巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的分泌型基因工程宿主菌,现已广泛应用于工业和学术研究领域,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。综述了其自身的优点、表达载体的特点、巨大芽孢杆菌的转化方法、外源蛋白的表达、高效表达的策略以及表达系统的应用。 展开更多
关键词 巨大芽孢杆菌 外源蛋白 高效表达
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狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：11
8
作者 蔡月琴 马益萍 +2 位作者 申会刚 郭军庆 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期145-149,共5页
为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中... 为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白 高效表达 蛋白纯化
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中国高水平大学教育国际化表达现状研究——基于84所教育部核准的大学章程文本分析 被引量：12
9
作者 张海滨 董维春 《中国高教研究》 CSSCI 北大核心 2016年第4期85-89,110,共6页
教育国际化是建设世界一流大学的必由之路,现代大学制度是建设世界一流大学的制度保障,而大学章程是现代大学制度的基石与载体。通过对教育部已核准的84所部属高校章程中有关教育国际化的表达统计与分析表明,我国高水平大学发展目标定... 教育国际化是建设世界一流大学的必由之路,现代大学制度是建设世界一流大学的制度保障,而大学章程是现代大学制度的基石与载体。通过对教育部已核准的84所部属高校章程中有关教育国际化的表达统计与分析表明,我国高水平大学发展目标定位表达比较明确,推进国际化进程形式呈现多样化的表达,但一些具有实质性、可操作性的实践指标上表达度较低。研究结果可为后续大学章程的修订提供参考意见。 展开更多
关键词 高水平大学 教育国际化 大学章程 表达现状
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人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达 被引量：3
10
作者 何炜 袁汉英 +2 位作者 高卜渝 陈向岭 李育阳 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期156-162,共7页
超氧化物歧化酶 (SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶 ,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用 .对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆 ,并得到带有启动子PADH2 GAPDH和终止子TADH1的高效... 超氧化物歧化酶 (SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶 ,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用 .对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆 ,并得到带有启动子PADH2 GAPDH和终止子TADH1的高效稳定的酿酒酵母表达载体 pHC11 hSOD .转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4 /pHC11 hSOD .表达产物经破壁后SDS PAGE电泳检测为 2 0ku的条带 ;酶活性测定结果表明发酵液有 4 0万U/L的hSOD活性 .此外 ,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法 .纯化产物在SDS PAGE上和Superdex分子筛检测显示 ,所得产物的纯度已达 95 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 酿酒酵母 高效表达
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重组人生长激素在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达研究 被引量：8
11
作者 刘社际 杨立明 《生物技术通讯》 CAS 2000年第4期264-267,共4页
对重组人生长激素基因工程菌pET 11b rhGH BL2 1的培养条件进行了优化 ,在NBSMPP 4 0发酵罐中实现了高密度培养和高效表达 ,三批实验结果表明 ,在较短的发酵时间 (12h)内细菌干重达 85g L ,重组人生长激素占细菌总蛋白量的 2 5
关键词 RHGH 高效表达 大肠杆菌 人生长激素
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高温乳糖酶基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：3
12
作者 陈卫 张灏 +1 位作者 葛佳佳 丁霄霖 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期8-11,共4页
来源于嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)的 β -半乳糖苷酶基因bgaB经克隆、测序后 ,转入大肠杆菌高效表达载体pET - 2 0 (b)中。重组菌在IPTG诱导下 ,表达出的重组蛋白比酶活量为 6 6 6U/mg ,比出发菌株高 5 0倍。
关键词 嗜热脂肪芽孢杆菌 Β-半乳糖苷酶 基因克隆 高温乳糖酶基因 大肠杆菌 高效表达 pET表达载体
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甘露聚糖酶man23基因的重组及其在短短芽孢杆菌中的表达 被引量：5
13
作者 周海燕 饶力群 吴永尧 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期389-394,共6页
为了提高甘露聚糖酶Man23的表达量,降低它的体外降解程度,将其基因连接到质粒pHY-p43上,由强启动子p43启动基因man23的表达,将构建的重组质粒pHY-p43-man23转化至短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中,经转化的B.brevis发酵后的上清液... 为了提高甘露聚糖酶Man23的表达量,降低它的体外降解程度,将其基因连接到质粒pHY-p43上,由强启动子p43启动基因man23的表达,将构建的重组质粒pHY-p43-man23转化至短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中,经转化的B.brevis发酵后的上清液中酶活高达22480 U?mL-1,较出发菌株Bacillus subtilisB23所产生的甘露聚糖酶活力提高了26.7%.B.brevis体系的表达产物经SDS-PAGE检测,其图谱比出发菌株表达产物的更为明晰,目的蛋白带更宽,带色更深,说明目的酶的产量得到了大幅提高,表达产物得到了明显纯化.试验表明以p43为启动子,B.brevis为表达质粒的宿主菌,不仅保证了基因产物的分泌和正确折叠,而且实现了基因的高表达和产物的高活力. 展开更多
关键词 甘露聚糖酶 短短芽孢杆菌 p43启动子 高效表达
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人γ-干扰素基因工程菌培养条件的研究 被引量：4
14
作者 靳挺 关怡新 姚善泾 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期724-728,共5页
对表达重组人γ-干扰素的基因工程菌的培养条件进行了较详细的研究.确定了最佳的培养及诱导时间,并利用正交试验设计,对影响工程菌生长和重组人γ-干扰素表达的条件如培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的量及摇床转速、装液量、接种量... 对表达重组人γ-干扰素的基因工程菌的培养条件进行了较详细的研究.确定了最佳的培养及诱导时间,并利用正交试验设计,对影响工程菌生长和重组人γ-干扰素表达的条件如培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的量及摇床转速、装液量、接种量、pH等进行了优化.结果表明,在优化条件下,表达的γ-干扰素包涵体占菌体总蛋白的60%以上,每升发酵液可获得包涵体约为1.6g. 展开更多
关键词 重组人Γ-干扰素 培养条件 高效表达 基因工程菌 包涵体 发酵
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融合蛋白GST-Ulp1p在大肠杆菌中的高效可溶性表达及其活性鉴定 被引量：7
15
作者 傅俊华 王琪 +6 位作者 尹杰超 刘铭瑶 李宁 姚文斌 任桂萍 李璐 李德山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期837-842,共6页
利用基因工程技术,体外重组小分子类泛素修饰蛋白酶1(Ulp1)的活性片段,获得高表达、高特异性重组蛋白酶。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisia中提取Ulp1编码第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段(Ulp1p),在其C端加入6×His并连接到... 利用基因工程技术,体外重组小分子类泛素修饰蛋白酶1(Ulp1)的活性片段,获得高表达、高特异性重组蛋白酶。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisia中提取Ulp1编码第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段(Ulp1p),在其C端加入6×His并连接到大肠杆菌表达载体pGEX中,构建重组表达质粒pGEX-Ulp1p-his6。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。表达、纯化后,以SUMO融合蛋白检测其活性。经过优化,该蛋白可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40.12%。可通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱或Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到纯度98%的蛋白。经酶切分析,比活力为1.375×104U/mg。融合蛋白GST-Ulp1p-His6无需切除谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签,具有很高的活性,制备简易;6×His标签,有利于底物蛋白切割后纯化,减少蛋白损失。本研究为制备高活力的SUMO蛋白酶提供了一个新方法。 展开更多
关键词 SUMO蛋白酶1(Ulp1) 谷胱甘肽S-转移酶(GST) 高效表达 活性鉴定
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海栖热袍菌木聚糖酶B的分子改造、高效表达及其在啤酒中的应用 被引量：6
16
作者 刘学强 江正强 +3 位作者 余静 马俊文 杨行 闫巧娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期66-73,共8页
研究海栖热袍菌木聚糖酶B(TmXynB)的定向进化、高效表达和应用。构建突变文库后经两轮筛选,获得一个在酸性高温下具有高比活力的突变体(mTmXynB)。突变体mTmXynB的最适pH值和最适温度为5.5和90℃,较野生型的最适pH值和最适温度分别下降... 研究海栖热袍菌木聚糖酶B(TmXynB)的定向进化、高效表达和应用。构建突变文库后经两轮筛选,获得一个在酸性高温下具有高比活力的突变体(mTmXynB)。突变体mTmXynB的最适pH值和最适温度为5.5和90℃,较野生型的最适pH值和最适温度分别下降了0.5和10℃,对小麦阿拉伯木聚糖的比活力由529 U/mg提高至1565 U/mg。序列比对表明,mTmXynB中3个氨基酸发生突变,分别为Asn91Ser、Trp129Arg和Arg143Glu。经定点突变实验,Arg143Glu通过改变局部蛋白表面的电荷分布提高了其耐酸性,Trp129Arg通过打破疏水平台降低了酶的最适温度,而Asn91Ser可能通过改变底物结合位点Trp89的构象提高该酶的催化活力。进一步将mTmXynB表达至毕赤酵母,经高密度发酵酶活力达18000 U/mL。突变体mTmXynB和野生型TmXynB分别添加至麦芽糖化过程中,结果表明mTmXynB在150 U/g麦芽添加量时效果最好,可降低45%的过滤时间和8.7%的料液黏度。而TmXynB在600 U/g麦芽添加量时效果最好,分别降低39%和8.1%的过滤速度和料液黏度。因此,突变体mTmXynB在啤酒工业中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 木聚糖酶B 海栖热袍菌 定向进化 高效表达 麦芽糖化
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玉米赤霉烯酮降解酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达 被引量：6
17
作者 王义春 王龑 +3 位作者 江均平 赵月菊 邢福国 周露 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期372-380,共9页
通过密码子优化、体外多拷贝构建实现玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)降解酶基因(zlhy-6)在毕赤酵母GS115菌株中的高效表达。按酵母密码子偏好性优化zlhy-6基因的密码子,与α因子信号肽编码序列一起合成,插入到pAO815质粒中,通过酶切酶... 通过密码子优化、体外多拷贝构建实现玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)降解酶基因(zlhy-6)在毕赤酵母GS115菌株中的高效表达。按酵母密码子偏好性优化zlhy-6基因的密码子,与α因子信号肽编码序列一起合成,插入到pAO815质粒中,通过酶切酶连构建含1–6个表达盒的表达质粒,将其转入毕赤酵母GS115菌中,获得ZEN降解酶重组菌株。重组蛋白分子量为28.9 kDa,与预期一致。重组菌用甲醇诱导3 d,蛋白浓度达最高,之后下降;在pH 5.0、4.5条件下诱导培养,表达量最高;每天添加0.8%的甲醇、接种量10%表达水平最高;4拷贝的转化子表达水平最高,三角瓶发酵3 d,酶活性达到10 U/mL。在1 g玉米渣中添加0.1–0.5 mL发酵上清液,水解24 h,玉米渣中ZEN的降解率为44.08%–75.51%。研究结果为ZEN降解酶工业生产及在食品饲料中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 降解 zlhy-6 高效表达 多拷贝 毕赤酵母
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大白菜CHS基因鉴定及其在高氮水平下转录表达分析
18
作者 雷娟利 赵彦婷 +3 位作者 岳智臣 陶鹏 胡齐赞 李必元 《浙江农业科学》 2024年第5期1102-1107,共6页
为了探究高氮水平引起大白菜叶柄黑点症加剧的机制,通过对抗、感叶柄黑点症大白菜品系进行正常氮和高氮水平处理,处理前和处理后不同时间对叶柄取样并进行转录组测序,然后再对大白菜查尔酮合酶(chalcone synthetase,CHS)基因进行鉴定并... 为了探究高氮水平引起大白菜叶柄黑点症加剧的机制,通过对抗、感叶柄黑点症大白菜品系进行正常氮和高氮水平处理,处理前和处理后不同时间对叶柄取样并进行转录组测序,然后再对大白菜查尔酮合酶(chalcone synthetase,CHS)基因进行鉴定并分析不同的大白菜CHS基因在正常氮水平和高氮水平、抗性品系和感性品系之间的差异表达,结果表明,共鉴定到7个大白菜CHS基因,其中有3个(BrCHS1、BrCHS3及BrCHS4)在高氮水平下表达量比正常氮水平下高,且在高氮水平下感性品系表达量高于抗性品系。因此推测这3个大白菜CHS基因可能与大白菜叶柄黑点症的形成有关。研究结果为揭示大白菜叶柄黑点症发生机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大白菜 叶柄黑点症 查尔酮合酶 高氮 表达分析
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β-葡萄糖苷酶催化活性改造及在毕赤酵母中的高效表达
19
作者 吴涛旭 阳鹏辉 +1 位作者 李阳阳 刘松 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期126-133,共8页
β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)能催化底物非还原末端的β-D-葡萄糖苷键水解释放葡萄糖和相应配基,是纤维素糖化过程中的关键酶之一。篮状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)来源的β-葡萄糖苷酶bgl3A热稳定性较好,但催化活性还亟待提... β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)能催化底物非还原末端的β-D-葡萄糖苷键水解释放葡萄糖和相应配基,是纤维素糖化过程中的关键酶之一。篮状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)来源的β-葡萄糖苷酶bgl3A热稳定性较好,但催化活性还亟待提高。该研究中,通过Discovery Studio 2022柔性对接模块构建了bgl3A和底物pNPG的复合物结构;基于结合能预测模块对bgl3A催化活性位点6以内的氨基酸残基进行虚拟突变,计算突变前后酶对pNPG的结合能变化;对结合能变化小于-0.7 kcal/mol的20个突变体进行表达、纯化和酶学性质分析。与bgl3A相比,突变体bgl3A-N237Y的比酶活和k_(cat)/K_(m)分别提升了22%和25%。将bgl3A-N237Y在毕赤酵母中表达,通过信号肽替换和共表达分子伴侣使其摇瓶发酵酶活力达106.6 U/mL,较优化前提高75%。研究得到高活性bgl3A突变体及其生产菌将有助于提高其工业化应用效果。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 催化活性 底物结合能 毕赤酵母 高效表达
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碱性果胶酶在重组毕赤酵母中高效表达的关键因素研究 被引量：5
20
作者 王芸 华兆哲 +3 位作者 刘立明 堵国成 陈坚 陈坚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期341-345,共5页
为提高重组毕赤酵母生产碱性果胶酶的产量和生产强度,在摇瓶条件下优化了重组毕赤酵母生产碱性果胶酶的关键因素。结果表明,以下条件:初始甘油浓度40g/L、初始甲醇浓度3.1g甲醇/gDCW、每24h添加0.51g甲醇/gDCW、诱导表达周期72h、250mL... 为提高重组毕赤酵母生产碱性果胶酶的产量和生产强度,在摇瓶条件下优化了重组毕赤酵母生产碱性果胶酶的关键因素。结果表明,以下条件:初始甘油浓度40g/L、初始甲醇浓度3.1g甲醇/gDCW、每24h添加0.51g甲醇/gDCW、诱导表达周期72h、250mL三角瓶诱导培养基装液量30mL、初始pH6.0,最适于菌体生长与产物表达。在此基础上,7L罐上通过恒速流加甘油进一步提高细胞密度,诱导阶段甲醇采取前期恒速流加和后期DO-stat,发酵结束菌体干重达80g/L,酶活为217U/mL,比摇瓶结果提高了66.2%。 展开更多
关键词 碱性果胶酶 重组毕赤酵母 高效表达 甲醇诱导
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